苦参药材质量标准研究

2011-02-12李毅，王飞，吴民

中成药 2011年2期

李毅，王飞，吴民

(新疆克拉玛依市中心医院，新疆克拉玛依市834000)

药用苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根，具有清热燥湿、祛风杀虫、利尿等功效。经药理实验和临床观察证明，其中主要含生物碱成分，同时还含黄酮、醌类等成分。其中苦参碱(matrine)为其有主要有效成分之一，具有抗肿瘤，平喘和抑菌作用;氧化苦参碱具有抗肿瘤，平喘等作用。黄酮类成分具有抗心律失常及抗真菌作用。本试验采用HPLC法对中药苦参进行了高效液相色谱法的测定研究。

1 药材与设备

1.1 药材及材料苦参药材由沈阳药科大学孙启时教授鉴定为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根。苦参碱对照品(供含量测定用)购于中国药品生物制品检定所，批号110805－200306。氧化苦参碱对照品(供含量测定用)购于中国药品生物制品检定所，批号0780－200004。

1.2 色谱条件色谱柱:Waters XTerraTMRP18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:0.02 mol/mL 乙酸-乙腈 (60 ∶40);检测波长:220 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:25℃;进样量:20 μL。

1.3 仪器岛津-2010CHT高效液相色谱仪(日本岛津公司);Lc-solution工作站(日本岛津公司提供);Mettle AE 163电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.4 检测波长的选择参考2005版中国药典中药材“苦参”含量测定项下色谱条件与系统适用性试验:检测波长为220 nm，故选择检测波长为220 nm。

2 样品的制备

2.1 对照品溶液的制备

取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量，精密称定，加0.02 mol/mL乙酸-乙腈 (60∶40)溶解，制成每1 mL含0.1 mg的苦参碱溶液，氧化苦参碱1 mg的溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取苦参药材，研细，精密称取，置于100 mL量瓶中，加浓氨水2 mL浸润，加二氯甲烷60 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。

3 方法学考察

3.1 线性范围的考察

标准曲线的绘制:精密量取苦参碱溶液0.25、1.25、2.50、5.00、7.50 mL 至 10 mL 量瓶加0.02 mol/mL 乙酸-乙腈 (60:40)定容至 10 mL，得浓度 0.002 5、0.012 5、0.025、0.050、0.075 mg/mL浓度的对照品溶液。

精密量取氧化苦参碱溶液0.50、1.25、2.50、5.00 mL至10 mL量瓶加0.02 mol/mL乙酸-乙腈 (60∶40)定容至10 mL，得浓度0.050、0.125、0.250、0.500 mg/mL 浓度的对照品溶液。

结果表明苦参碱在2.5～75 μg/mL范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系 y=1.35e－7x+1.84e－4，r=0.999 9。氧化苦参碱在50～1 000 μg/mL范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系，y=1.43e－7x+1.64e－3，r=0.999 9。

3.2 回收率试验精密称取已知含量样品9份，分别精密加入适量氧化苦参碱对照品，按供试品溶液制备方法处理，依次测定，计算回收率，苦参碱平均回收率99.1%，RSD为4.7%，氧化苦参碱平均回收率99.9%，RSD为2.1%。

3.3 精密度试验取粉末适量，按供试品溶液的制备方法制得供试溶液1份，在同样色谱条件下，连续进样5针，进样量为20 μL，依次测定，记录峰面积，得苦参碱 RSD为0.65%;氧化苦参碱RSD为0.70%。显示精密度良好。

3.4 重复性试验取粉末，按供试品溶液的制备方法制得供试溶液6份，在同样色谱条件下进样，进样量为20 μL，依次测定，得苦参碱平均含量为1.455 6 mg/g，RSD为2.80%;氧化苦参碱平均含量为12.235 5 mg/g，RSD为1.33%。

3.5 稳定性试验取适量，按供试品溶液的制备方法制得供试溶液 1 份，室温下放置，每隔 0、1、2、4、8、16 h;分别进样20 μL，依次测定峰面积，计算相对标准偏差，苦参碱与氧化苦参碱含量总和RSD为1.03%。

4 薄层色谱

苦参药材粉碎，取1 g粉末，加浓氨水2 mL浸润，加二氯甲烷60 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取槐定碱、苦参碱、氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1 mL各含1 mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版附录ⅥB)试验，吸取上述制备溶液各4 μL，分别点于同一用2%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(7∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。