虫草素对人肝癌Bel-7402细胞抑制及作用机制的研究

卢 群，罗少洪，何伟彬，梅文杰

(广东药学院，广东广州 510006)

虫草素是虫草的主要活性成分，具有抗肿瘤、抑菌、抑制病毒、抑制蛋白质激酶活性等作用［1－2］。研究证明虫草素能抑制mRNA的合成，诱导细胞凋亡，促进细胞分化，对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用［1－2］。诱导肿瘤细胞凋亡以及作用靶点已成研究的焦点。为探讨虫草素诱导肿瘤细胞凋亡的新靶点，对虫草素作用人肝癌Bel-7402细胞后的抑制和凋亡及p53、Bcl-2表达变化进行研究，寻找虫草素对人肝癌Bel-7402细胞抑制的新机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器 虫草素(广东药学院梅文杰教授提供)、人肝癌Bel-7402细胞(广东药学院陆幸妍副教授提供)、MTT及新生牛血清(美国Sigma公司)、PRMI 1640(美国 Gibco公司)、p53(博奥森公司)、Bcl-2(Sant Cruz)、酶标仪(美国Bio SN206976)、荧光显微镜(Olympus BX51)、流式细胞仪(Epics-XL Beckman-Coulter)

1.2 细胞抑制实验 MTT法检测细胞抑制率。按下列公式计算细胞抑制率:抑制率/%=(1－实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100%

1.3 倒置相差显微镜观察 不同浓度(0、25、50、100 mg·L－1)虫草素作用细胞，倒置相差显微镜观察细胞生长状态。

1.4 Hoechst 33258染色检测 不同浓度(0、25、50、100 mg·L－1)虫草素作用细胞，Hoechst 33258染色观察细胞形态。

1.5 流式细胞仪(FCM)检测 采用Annexin V联合 PI染色法检测细胞凋亡率。

1.6 Western blot检测 采用常规Western blot技术检测p53、Bcl-2的表达。

1.7 统计学处理 采用SPSS 11.0进行统计分析，数据用±s表示，两组数据较采用t检验，样本间比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 细胞抑制 不同浓度虫草素对Bel-7402细胞有明显的抑制作用，呈浓度时间依赖性关系。在25 mg·L－1虫草素作用2 d，抑制率达49.6%(P＜0.05)。

2.2 细胞生长状态 不同浓度虫草素作用Bel-7402细胞2 d有明显的抑制作用，随着浓度增加视野范围内细胞明显死亡。

2.3 细胞形态 不同浓度虫草素作用Bel-7402细胞24 h，大量细胞的染色质边集、凝聚、核碎裂、细胞核固缩及凋亡小体产生。

2.4 细胞凋亡 0、25、50、100 mg·L－1虫草素作用 Bel-7402细胞2 d，细胞凋亡率分别为2.5%、20.6%、27.9%、53.1%，均高于对照组的2.5%(P＜0.05)。

2.5 基因表达 50 mg·L－1虫草素作用Bel-7402细胞，在30 min内p53表达水平增加、24 h后Bcl-2表达水平下降。

3 讨论

虫草素对Bel-7402细胞活性呈浓度时间依赖性抑制，同时诱导细胞凋亡，这与文献报道相一致［3－5］。Western blot检测结果显示虫草素可引起使凋亡基因p53表达量增加，而使抗凋亡基因Bcl-2表达量下降［6］。

综上所述，虫草素可明显抑制Bel-7402细胞增殖，且诱导凋亡，其机制是上调p53、下调Bcl-2，促进细胞凋亡达到抗肿瘤细胞的效果，详细机制有待进一步研究。

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