HPLC法测定强筋壮骨丸中阿魏酸的含量

郭 琼 曲婷丽 赵正保 刘锐玲*

（山西医科大学药学院，山西 太原 030001）

强筋壮骨丸是由人参、当归、杜仲、鹿衔草等10味药材经精细加工而成的纯中药制剂，具有补益肝肾，强筋壮骨，活络止痛等功效，当归为方中主要药味，其主要活性成分为阿魏酸。阿魏酸具有明显的抗血小板释放5-羟色胺的作用，是活血止痛的主要有效成分之一；其含量测定方法主要有薄层洗脱比色法、双波长薄层扫描法、直接扫描法、高效液相色谱法等。前三种测定方法具有灵敏度低、专属性差、耗时等缺点，目前阿魏酸含量测定方法应用较多的是高效液相色谱法[1,2]。为了更好地控制该制剂的质量，本试验采用HPLC法对强筋壮骨丸中的阿魏酸含量检测方法进行研究。

1 仪器与试药

Agilent-1200高效液相色谱仪；TU-1901紫外分光光度计；电子天平；甲醇；纯水；磷酸（分析纯）；乙腈；阿魏酸对照品（购于中国药品生物制品检定所，批号：110773-200611）；强筋壮骨丸供试品和去当归的强筋壮骨丸阴性对照品（山西临汾黎光中医骨伤科医院制备）。

2 方法与结果

2.1 检测波长的选择

通过190～400nm波长紫外扫描，阿魏酸在320nm波长处有特征吸收，故选择为检测波长。

2.2 色谱条件

色谱柱：Venusil ASB C18（5μm：4.6mm×250mm）；乙腈-0.085%磷酸（12∶88）为流动相；流速1.0mL/min；检测波长320nm；柱温25℃；理论塔板数按阿魏酸计算应不低于3000。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取阿魏酸对照品适量，加70%甲醇制成每1mL含阿魏酸为50μg的溶液，即得。

2.4 供试品溶液的制备

取强筋壮骨丸供试品约10g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入70%甲醇20mL，密塞，称定重量，加热回流40min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.5 阴性对照品溶液的制备

处方中除去当归，按强筋壮骨丸制法，制得去当归的强筋壮骨丸阴性对照品。将上述阴性对照品，按供试品溶液的制备项下的方法制得去当归阴性对照品溶液。取阿魏酸对照品和强筋壮骨丸供试品溶液，按上述色谱条件分别进样20μL，结果阿魏酸在约28min出峰，样品中阿魏酸峰与杂质峰分离良好，而阴性对照无干扰。

2.6 线性关系的考察

取浓度为50mg/mL的阿魏酸对照品储备液，分别精密吸取0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.5mL置于10mL的容量瓶中，用70%甲醇溶液稀释至刻度，得阿魏酸对照品溶液。精密吸取上述溶液各20μL，依上述色谱条件测得峰面积为纵坐标（y），浓度为横坐标（x），绘制标准曲线。回归方程为：阿魏酸y=97.42x-20.487（r=0.9999），结果表明阿魏酸在浓度为0.5～12.5mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验

精密吸取阿魏酸对照品溶液（5μg/mL）20μL，在上述色谱条件下重复进样6次，测定峰面积值，计算得其RSD为2.82%（n=6）。

2.8 加样回收率试验

精密称取已测定的强筋壮骨丸供试品5g共6份，分别精密加入50μg/mL阿魏酸对照品溶液0.8mL，按供试品溶液的制备方法制备供试液。分别进行测定，计算含量，平均回收率：99.63%，RSD：2.53%。

3 讨 论

有文献报道，阿魏酸性质不稳定，遇光和热易分解，置于棕色瓶中的阿魏酸对照品溶液在4℃下2周后开始分解。因此在试验中阿魏酸对照品溶液与供试品溶液均为现用现配，于棕色瓶中避光保存。阿魏酸为有机酸类成分，易溶于热水、醇和乙醚，而乙醚的毒性较大；热水和乙醇的沸点较高，参考中华人民共和国药典2010版，本试验采用毒性较小、沸点较低的甲醇作为提取溶剂。在提取溶剂剂量考察试验中，本试验先后采用15mL、20mL、25mL、30mL70%甲醇溶剂进行回流提取，结果发现提取溶剂超过20mL后阿魏酸的提取量无显著差异，因此本试验选用20mL甲醇溶液进行回流提取。

本文建立的强筋壮骨丸中阿魏酸的含量检测方法简便、准确、重现性好，可用于强筋壮骨丸的质量控制。

[1]胡益勇,徐晓玉.阿魏酸的化学和药理研究进展[J].中成药,2006,28(2)：253-255.

[2]钟露苗,彭艳梅.醒脑通络片中阿魏酸含量测定方法学研究[J].中南药学,2010,8(2)：135-135.