复合L-色氨酸发酵微生态制剂对土鸡生长性能和非特异性免疫的影响

吴毅芳 周常义 苏文金 张志刚 苏国成

随着食品安全引起的社会问题被广泛关注，人们健康安全意识的逐步提高，抗生素、促生长素等与日常饮食息息相关的添加剂的生产和使用备受争议。在这种情况下，对绿色畜禽产品的大量需求促进了微生态制剂在畜禽养殖过程中的应用和相关新型制剂的开发生产。

本试验中使用的发酵制剂为复合L-色氨酸发酵微生态制剂，以枯草芽孢杆菌、多肽、蛋白酶、L-色氨酸、豆腐渣为主要成分，旨在实现豆腐渣、玉米浆等工业下脚料二次利用的同时，获得既能平衡日粮氨基酸又具有益生效应、生产成本较低的微生态制剂。本试验通过改变制剂在基础日粮中的添加比例，考察该制剂对土鸡生长性能和非特异性免疫活性的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

复合L-色氨酸发酵微生态制剂（本实验室制得）；基础日粮（直接从饲料店购得适合雏鸡食用的小鸡饲料）；鸡苗（从鸡苗场购得1日龄土鸡120羽）；溶菌酶检测试剂盒（南京建成公司购得）；实验室常用检测制剂。

1.2 方法

1.2.1 试验分组及饲喂方式

土鸡苗分成4组，每组30羽。A组饲喂基础日粮；B组饲喂95%的基础日粮和5%发酵制剂混合物；C组饲喂90%的基础日粮和10%发酵制剂混合物；D组饲喂85%的基础日粮和15%发酵制剂混合物。

从2日龄开始在B、C、D 3组日粮中添加适量的发酵制剂直到7日龄，作为适应期。

1.2.2 检测方法

从7日龄开始对各组日粮按比例混合后饲喂，每日早晚饲喂两次，每次饲喂时间为2 h，每日称取各组日粮消耗量。8日龄、17日龄、27日龄时每组分别取样6只进行称重、解剖试验。获取各试验组的肝脏、小肠上段内容物及粪便，对各组料肉比[1]、消化酶[2]、溶菌酶[3]、肝脏器官指数[4]、肠道及粪便中的大肠杆菌和乳酸杆菌[5]进行比较。

1.2.3 测定指标

1.2.3.1 料肉比

料肉比=每组饲料总消耗量/每组总增重量。

1.2.3.2 消化酶

消化酶主要针对肠道中蛋白酶和纤维素酶进行检测，取每个小肠上段内容物0.5 g于50 ml离心管中，添加9.5 ml生理盐水稀释，置于37℃摇床150 r/min震荡30 min后，参照Cüneyt Suzer[2]的方法进行测定。

1.2.3.3 溶菌酶

详见南京建成公司溶菌酶检测试剂盒说明书。

1.2.3.4 肝脏器官指数

肝脏器官指数=肝脏重量/体重。

1.2.3.5 大肠杆菌及乳酸杆菌检测

通过选择性培养基（伊红美蓝培养基和MC培养基）对以上两种菌进行活菌平板计数。小肠上段内容物样品以及粪便样品的制法同1.2.3.2。

2 结果分析与讨论

2.1 发酵制剂对土鸡生产性能的影响（见表1）

表1 发酵制剂对土鸡生产性能的影响

由表1可知，B、C、D 3个试验组的料肉比均比对照组A有所下降，阶段二料肉比均与对照组差异显著（P＜0.05）。阶段一即8日龄到17日龄，由于肉鸡羽毛尚未发育完全，需要消耗较多的能量以维持体温，另外户外养殖期间气温较低等因素导致阶段一料肉比较高。阶段二即18日龄到27日龄，由于肉鸡羽翼逐渐丰满，维持体温所需能量相对较少，试验组逐渐适应添加了发酵制剂的日粮口味和养殖环境以及发酵制剂促进消化吸收作用逐步凸显等原因，3个试验组阶段二的料肉比均较阶段一有所减少，其中B组下降最为显著，为10.7%。未添加发酵制剂的对照组阶段二的料肉比比阶段一提高了9%。27日龄时，B、C、D 3组料肉比分别相对A组下降了19.4%、16.1%和15.5%。理论上，发酵制剂促消化吸收能力与枯草芽孢杆菌、蛋白酶、多肽、L-色氨酸等营养成分相关，阶段一3个试验组的料肉比相对对照组有所下降，说明发酵制剂在促进土鸡消化吸收方面具有一定程度的滞后性。由此可推断，蛋白酶、多肽、L-色氨酸等成分在提高日粮吸收利用率方面起一定的作用。但其后料肉比显著降低，关键是由于枯草芽孢杆菌在肠道中的定植以及相关消化酶的分泌，促进饲料中大分子的蛋白、纤维和脂肪在肠道中的再次分解和吸收，同时多肽促进氨基酸吸收的协同作用进一步提高了营养成分的吸收率，从而导致料肉比的下降。

2.2 发酵制剂对土鸡消化道能力的影响（见表2）

表2显示在雏鸡生长的前27日龄，对照组肠道中的蛋白酶、纤维素酶酶活随着日龄的增长逐渐降低并趋于稳定（总体上变化程度逐渐减小）。理论上该指标将稳定在一个适宜的水平直到生长后期随着动物机能的衰退而进一步降低。A组肠道蛋白酶活性27日龄时下降到8日龄36.6%，B、C、D 3组分别达到8日龄时的66.1%、79.6%、66.7%，蛋白酶的下降程度与对照组相比差异显著（P＜0.05）。其中B、C两组的蛋白酶下降程度不及A组的50%。阶段一中，蛋白酶和纤维素酶主要来源于日粮。表2中17日龄的纤维素酶和蛋白酶数据反映出3个试验组与对照组蛋白酶活性差异显著，3个试验组蛋白酶降低程度不及对照组，说明日粮中的蛋白酶在胃酸性环境下具有一定程度的稳定性，即通过胃消化酶的作用后仍具有活性，有效增加肠道中蛋白酶作用效果，促进未完全分解的蛋白物质的消化吸收。阶段二中3个试验组的蛋白酶主要来自定植于肠道中的枯草芽孢杆菌的分泌和日粮供给。A、B、C、D 4组27日龄时纤维素酶活性分别是8日龄的42.9%、113.9%、90.7%和64.2%。阶段二纤维素酶来自于定植后的枯草芽孢杆菌的分泌以及日粮的补充，导致B、C两组纤维素酶活性有所提高，前者对纤维素酶活性的提高具有关键作用。D组纤维素酶和蛋白酶活性的下降，可能由于添加发酵制剂含量过高，一定程度上改变了蛋白质、纤维素等营养成分的平衡，纤维素摄取量比对照组有所下降并超过某一临界点导致了D组纤维素酶活性整体偏低。

表2 发酵制剂对土鸡肠道消化能力的影响（U/g）

2.3 发酵制剂对土鸡非特异免疫活性的影响（见表3）

表3 发酵制剂对土鸡非特异免疫活性的影响

本试验中考察非特异性免疫力指标为血清中溶菌酶含量和肝脏指数。表3中，对照组溶菌酶含量随日龄的增加不断提高，17日龄时各组溶菌酶含量分别达到8日龄的3.92倍、4.54倍、4.66倍和4.25倍，试验组和对照组差异显著（P＜0.05）。27日龄时各组溶菌酶含量分别达到8日龄的4.25倍、4.64倍、4.67倍和4.61倍，试验组与对照组差异显著（P＜0.05）。由此推测，发酵制剂的添加可提前激活机体非特异性免疫活性，使机体溶菌酶含量迅速达到稳定阈值。表3中免疫器官指数即肝脏指数则随日龄的增加不断下降，27日龄时各组免疫器官指数分别为8日龄的65.7%、67.6%、70.5%和74.7%，试验组与对照组相比差异不显著（P＞0.05）。综上所述，试验组的非特异性免疫活性高于对照组，证明该发酵制剂有利于提高机体非特异性免疫力，可一定程度上促进机体非特异性免疫力提前达到稳定阈值。由阶段一与阶段二溶菌酶活性及免疫器官指数的变化程度可推测发酵制剂中的多肽是提高非特异性免疫的有效成分。多肽与枯草芽孢杆菌均能提高机体免疫力，但二者作用机理不同。目前关于二者作用机理的研究和探讨还处于初步阶段，未有成熟的理论体系和实验进行验证说明。多肽对于免疫力的提高作用可能与其参与体液循环有关，阶段一由于雏鸡个体较小，血液流量小，从日粮中吸收的多肽相对浓度较高，一定程度上加快了机体免疫力提高的速度。

2.4 发酵制剂对土鸡肠道微生物菌群的影响（见表4）

表4 发酵制剂对土鸡肠道微生物菌群的影响（×105CFU/g）

由表4可知，肠道中的大肠杆菌和乳酸杆菌数量随日龄的增加逐渐减少。这可能与肠道长度和质量的增加有关，长度的增长使微生物的分布逐渐扩散开，一定程度上降低了分布密度。另外，由于所取肠道为上段，接近胃部，随着日龄的增长，胃部和肠道上部消化能力的逐渐完善，肠道上端环境中存在的蛋白酶、酸碱消化液等均不利于微生物的生长繁殖，故大肠杆菌和乳酸杆菌密度随着日龄的增长逐渐减小，理论上将趋于稳定。粪便中的菌群首先来源于肠道，其次是空气和环境。表4显示粪便中的相关菌密度高于肠道上段，这是由于粪便中来自于肠道的菌群主要来自于肠道中段和下段，这些部位的菌密度由于肠道生存环境的改善而有所提高，高于肠上段菌群密度。表4中，试验组17 d、27 d B、C、D 3组的肠道和粪便中的大肠杆菌数均显著低于对照组（P＜0.05)，而乳酸杆菌数则显著高于A组（P＜0.05）。两种菌群数量变化主要由于肠道中氧气的变化，即枯草芽孢杆菌的定植及其需氧特性，降低了肠道中的氧气浓度，促进了乳酸杆菌的生长，同时抑制了大肠杆菌。

3 结论

本试验考察了自制复合L-色氨酸微生态制剂对土鸡生长性能和非特异性免疫等生理活性的影响。通过试验既验证了复合L-色氨酸微生态制剂具有降低土鸡料肉比、提高非特异性免疫、促进肠道益生菌生长等生理作用，也为该制剂日后生产实践中粗蛋白、纤维素等相关比例的调整提供了依据，即粗蛋白浓度过高、纤维素浓度过低均可最终提高料肉比，降低经济效益。通过综合比较，以添加5%制剂的混合日粮为最佳配方，该添加比例能平衡日粮中的氨基酸、显著降低土鸡的料肉比、提高非特异性免疫活性、有效促进其肠道益生菌的生长，满足了微生态制剂对于提高生长性能、提高经济效益的基本要求。今后可以其中L-色氨酸含量、多肽含量、枯草芽孢杆菌数为基准，调整混合日粮中的粗蛋白、纤维素比例，以实现更高的经济效益。

[1] 吴健.微生态制剂代替抗生素对肉用仔鸡生产性能影响的研究[J].中国家禽,2009,31(11):55-56.

[2] Cüneyt Suzer,Deniz çoban,H.Okan Kamaci.Lactobacillus spp.bacteria as probiotics in gilthead sea bream(Sparus aurata,L.)larvae:Effects on growth performanceanddigestiveenzyme activities[J].Aquaculture,2008(280):140-145.

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