清喉咽合剂中连翘苷的含量测定

李会勤

清喉咽合剂为《中国药典》2005年版一部收载品种,主要由地黄，麦冬，玄参，连翘，黄芩等组成，其中连翘为君药，其主要成份为连翘苷，经多年临床应用证明,该方具有养阴清肺，利咽解毒。用于阴虚燥热、火毒内蕴所致的咽部肿痛、咽干少津、咽部白腐有苔膜、喉核肿大；局限性的咽白喉、轻度中毒型白喉、急性扁桃体炎、咽峡炎等[1]。清喉咽合剂在现行药典的质量标准中采用高效液相色谱法对黄岑苷的含量测定，为了提高该产品的质量，保证临床用药的安全有效，本文采用高效液相色谱法对清喉咽合剂中连翘苷的含量进行了测定，结果比较满意，现报告如下：

1 仪器与试剂

岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪,SPD-10Avp紫外检测器（日本岛津）；万分之一分析天平（FA2004A）；连翘苷对照品（中国药品生物制品检定所,批号12311-0507）；清喉咽合剂（批号：20090812；20091203；20090904，北京龙泰基药业有限责任公司），甲醇、乙腈均为色谱纯,水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

表1 回收率实验结果（n=6）

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：ODS C18柱（250mm×4.6mm 5μm），流动相：乙睛：水（21：78）；检测波长为230nm，流速1.0ml/min，柱温25℃，进样量：25μL，理论塔板数按连翘苷峰计算不低于3000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 样品的制备工艺 五味药品粉碎成粗粉，用57％乙醇浸渍24小时后，过滤得滤液6000ml，减压回收乙醇并浓缩至约1400ml，加水800mL，煮沸30分钟，静置48小时，滤过，滤渣用少量水洗涤，洗液并入滤液中，减压浓缩至约1000ml，加苯甲酸钠3g，搅匀，静置24小时，滤过，滤液转移至1000mL锥形瓶中，水补充至相应的刻度，摇匀。

2.2.2 供试品溶液的配置 精密取同一批清喉咽合剂（批号：20090812）100mL，离心过滤，转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇萃取3次，合并乙酸乙酯液，浓缩，过中性氧化铝柱，75％乙醇洗脱，除去杂质，洗脱液浓缩，冷冻干燥，残渣甲醇溶解，滤过，过0.45μm微孔滤膜,并转移至10mL容量瓶中，甲醇补充至相应刻度，即得，摇匀，供试品溶液即得。

2.2.3 对照品溶液的配置 精密称取连翘苷对照品1.0mg，加入甲醇适量，超声波催溶，转移至10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得对照品贮备液，备用。

2.2.4 阴性对照溶液 按照清喉咽合剂的制备工艺制备不含连翘的样品,按样品的制备方法制成阴性对照溶液。

2.3 标准曲线的绘制 精密吸取连翘苷对照品溶液1mL、2mL、4mL、6mL、10mL于10mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度,摇匀，按照上述方法进样20μL，按上述色谱条件进行含量测定,以峰面积（S）对浓度（C）作二元一次线性回归,得回归方程S=87956X+36571（r=0.9998）。结果表明连翘苷在0.01mg/ml～0.1mg/ml范围内呈现良好的线性关系。

2.4 专属性考察 取供试品、对照品、及阴性对照溶液各25μL按上述色谱条件进行测定,连翘苷和供试品中其他组分色谱峰可达到基线分离,阴性对照溶液对连翘苷的测定无干扰,本法专属性较好。

2.5 稳定性试验 精密取同一供试品溶液，分别在2、5、10、20、24h进样250μL,按照上述色谱条件测定连翘苷的含量，计算得平均RSD值为1.07％，表明连翘苷在24h内基本稳定。

2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液25μl连续注入5次,按照色谱条件测定连翘苷的含量,计算得平均RSD值为1.21％，精密度良好。

2.7 重现性试验 精密取同一批清喉咽合剂,按供试品溶液制备方法平行制备5份供试品溶液,按照色谱条件测定连翘苷含量,计算连翘苷含量为0.1917mg/mL,平均RSD值1.21％，表明重现性良好。

2.8 加样回收率试验 取已测含量的样品（批号：20090812）5mL于20mL量瓶中，加入连翘苷适量，按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液,甲醇补至相应的刻度，照上述色谱条件进行测定,计算回收率，结果见表1。

2.9 样品测定 取不同批号（批号：20090812；20091203；20090904）的样品，按照供试品溶液制备方法制备供试液,按外标法测定含量,每个样品平行测定3次，计算出样品中连翘苷的含量，结果所测定含量分别为（0.1919、0.1935、0.1923）mg/mL。

3 讨论

3.1 检测波长的选择 应用二极管阵列检测器在190～400nm对连翘苷对照品溶液进行扫描,在波长230nm有最大吸收,且样品中其它成分在此波长处对测定无干扰，故测定波长选定为230nm。

3.2 流动相的选择 在该实验中,曾选用不同的流动相，包括乙腈-水（28∶72）作为流动相[2],乙睛-水（23∶77）[3],通过调节不同比例的流动相实验,结果表明,以乙腈-水（21∶78）为流动相分离效果明显,没有拖尾而且保留时间适宜。

本文建立的清喉咽合剂中连翘苷的含量测定方法。简便可靠、精密度高、快速、分离度好，可用于对清喉咽合剂的质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（1部）[M].北京：化学工业出版社,2005：622.

[2]宋世才,周亚球.高效液相色谱法测定抗病毒胶囊中连翘苷的含量[J].时珍国医国药,2007；（18）：94-95.

[3]余积飞,马丽芬,何琴.维C银翘片中连翘苷的质量控制方法研究[J].大理学院,2008,7（10）：5-7.