急性冠脉综合征患者趋化因子CXCL16与GRACE积分的相关性及临床意义

李定良 巫相宏

研究表明，动脉粥样硬化是一种慢性的炎症性疾病，炎症反应在动脉粥样硬化的发生和发展过程中起重要的作用[1]。趋化因子（CXC chemokine ligand 16，CXCL16）是近年在人动脉粥样硬化损伤部位的巨噬细胞中发现的一种趋化因子，同时也是一种膜结合蛋白，研究发现其在动脉粥样硬化病变过程中有着重要作用[2-4]。全球急性冠脉综合征注册（the Global Registry of Acute Coronary Events，GRACE）研究是目前世界上第一个对急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）进行的全球多中心的前瞻性临床研究，GRACE危险评分可用以指导ACS患者的危险分层，帮助选择正确的治疗策略[5]。本研究旨在观察不同类型冠心病患者外周血中CXCL16水平，分析CXCL16水平与GRACE危险评分和C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）水平的相关性，探讨血清CXCL16在急性冠脉综合征危险分层中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2010年1～7月我院心内科住院并经冠状动脉造影确诊的冠心病患者61例纳入实验组，男42例，女19例；年龄38～94岁，平均（62.3±11.3）岁。按照2007年美国心脏病学会/美国心脏学会（ACC/AHA）冠心病处理指南的诊断标准，分为急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）组30例，其中不稳定型心绞痛（Unstable angina，UA）17例，急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）13例；稳定型心绞痛（stable angina pectoris，SA）组30例；对照组为同期住院经冠状动脉造影后排除冠心病者24例，男13例，女11例，年龄38～81岁，平均（57.9±13.0）岁。冠心病患者与非冠心病患者性别、年龄、糖尿病及高血压病史、冠心病家族史及相关用药史等方面均无统计学差异，具有可比性。排除标准：风湿性疾病，自身免疫性疾病，周围血管疾病或周围血管，血栓性疾病，脑卒中，肝、肾功能不全，发热，感染性疾病，肿瘤，或近期（至少1个月）有手术、外伤史的患者。

1.2 方法

1.2.1 血标本采集和检测 所有研究对象于入院次晨空腹肘正中静脉取血，分离血清标本-80℃保存备用。采用免疫比浊法测定测定血清CRP水平。CXCL16的测定采用酶联免疫定量分析的方法。试剂盒购自桂海生物公司，应用双抗体夹心法测定标本中CXCL16水平。用纯化的CXCL16抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入CXCL16，再与HRP标记的CXCL16抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CXCL16呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人CXCL16浓度。

1.2.2 GRACE危险评分[5]GRACE评分的内容包括年龄、心率、收缩压、肌酐、Killip分级、是否有已知心脏事件、心肌酶标志物、ST段变化，理论分值范围为2～383分，见表1。

1.3 统计学处理 所有数据均应用SPSS15.0统计软件处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，多样本比较采用方差分析，组间两两比较采用q检验，计数资料用x2检验，多组比较采用Kruskal Wallis法；血清CXCL16与CRP、GRACE危险评分之间的关系采用Pearson直线相关分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

表1 GRACE危险评分系统

2 结果

2.1 外周静脉血CXCL16和CRP水平的比较 我们发现，随着冠状动脉病变程度的增加，CXCL16、CRP水平逐渐升高。CXCL16及CRP水平在ACS组中均明显高于SA组和正常对照组（均P＜0.01）；CXCL16水平在SA组中高于正常对照组，差别显著（P＜0.01）；CRP水平在SA组中与对照组比较，表达水平高于正常对照组，但差别没有统计学意义；见表2。

表2 各组外周静脉血中CXCL16，CRP水平比较

2.2 外周静脉血CXCL16与GRACE危险评分及CRP水平的相关性分析见图1，2。

Pearson直线相关分析ACS患者外周静脉血中的CXCL16水平[（9.96±6.53）ng/mL]与GRACE危险评分（134.50±55.57）呈正相关（r=0.770，P＜0.01），而且与CRP水平[（17.71±15.48）mg/L]亦呈正相关r=0.852，P＜0.01）。

3 讨论

CXCL16是一种跨膜趋化因子，既能以分泌形式又能以膜结合形式存在，参与炎症和免疫应答过程，另外还具有清道夫受体的功能，与氧化型低密度脂蛋白（OX-LDL）结合，参与相关的生物学效应[2-6]。近年研究发现，CXCL16参与动脉粥样硬化（AS）的形成，其机制主要有：①趋化激活T细胞。CXCL16可强烈趋化激活CD8+T细胞，达整个T细胞的40％[2]，趋化激活后的T淋巴细胞分泌γ干扰素（INF-γ）、肿瘤坏死因子-β（TNF-β）、GM-CSF等炎症因子，以旁分泌的方式影响其周围细胞的功能活动，在AS发生、发展中起调节作用。②促进细胞一细胞间黏附和细胞增殖。平滑肌细胞的增殖是AS形成中的重要环节，它与一些生长因子的作用有关。CXCL16及其受体在动脉平滑肌细胞均有表达，研究发现CXCL16可以增加细胞间黏附并诱导核因子-κB（NF-κB）依赖的主动脉平滑肌细胞增殖[3]。③血管源性因子。动脉粥样硬化斑块内的新生血管可能在促进斑块的发生、发展，甚至诱发斑块出血和斑块破裂这一系列事件中起着关键性作用[4-7]。研究表明，CXCL16不仅可诱导激人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖与趋化，同时还作为血管源性因子存在，其可以显著诱导血管生成[8]。④氧化型低密度脂蛋白受体。氧化低密度脂蛋白及其脂质成分激活内皮细胞是引起AS病理变化的关键环节。CXCL16是新发现的OX-LDL的细胞表面受体，对OX-LDL有较强的结合和内吞摄取的能力，参与了动脉粥样硬化细胞内脂酯聚集的过程[7]，可能在AS病变中起重要作用。

急性冠状动脉综合征（ACS）是以冠状动脉粥样硬化斑块破裂，继发完全或不完全闭塞性血栓形成为病理基础的一组临床综合征，ACS中存在严重的内皮细胞受损激活状态，黏附并聚集大量白细胞到血管内皮，使炎症因子水平进一步增加，形成恶性循环，最终导致急性炎症爆发和血栓形成。本研究发现CXCL16活性水平在ACS组显著高于SA组和对照组，在SA组中亦显著高于对照组，提示CXCL16与动脉粥样硬化有关，并随着冠心病病情的加重而进一步升高，而冠心病病情的加重与冠状动脉粥样硬化斑块的不稳定性增加有密切关系，炎症反应加剧了斑块的不稳定性，CXCL16则参与了炎症反应，加重了冠心病的病情。

图1 ACS患者外周静脉血CXCL16与GRACE危险评分之间的相关关系图

图2 ACS患者外周静脉血CXCL16与CRP水平之间的相关关系图

研究发现，CRP在冠状动脉中的分布与冠状动脉内膜炎症或坏死过程相一致，除了作为炎症产物，还可以直接促进炎症反应及局部血栓的形成，改变冠状动脉粥样斑块的结构，促使斑块破裂[9]，与急性冠脉综合征的发生及发展密切相关[10]。本研究发现，CRP水平在ACS组中显著高于SA组和正常对照组，但在SA组与对照组比较，差别没有统计学意义，说明CRP水平可反映ACS中冠状动脉粥样斑块的不稳定状态。稳定性心绞痛患者中，冠状动脉粥样硬化斑块可能相对稳定，斑块破裂，炎症反应亦相对较轻，从而部分患者血液中CRP水平有所升高，但总体比较起来，与正常人差别不明显。CXCL16水平与CRP水平呈正相关，进一步证实了CXCL16与炎症反应密切相关，通过炎症反应加剧了斑块的不稳定。

全球ACS注册研究是目前世界上第一项针对ACS患者进行的多国家、前瞻性观察研究，2007年更新的ACC/AHA指南指出：GRACE风险评分是对急性冠脉综合征患者进行风险评估的方法之一。在ACS组中，CXCL16水平与GRACE危险评分呈正相关，因此检测ACS患者的CXCL16对ACS患者的危险分层及治疗策略的选择具有一定的临床指导意义。

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