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淫羊藿总黄酮对高脂血症大鼠血清脂联素水平的影响

2011-02-08赵智明赵凌杰董晓蕾

中国中医急症 2011年1期
关键词:高脂黄酮内皮

蔡 辉 赵智明 赵凌杰 董晓蕾

南京军区南京总医院(江苏南京210002)

淫羊藿为为小檗科淫羊藿的多年生植物,主要含淫羊藿总黄酮。淫羊藿苷为淫羊藿总黄酮主要成分。研究显示淫羊藿总黄酮有改善冠状动脉血管内皮功能[1-2]。本实验研究高脂血症模型大鼠经淫羊藿总黄酮处理后主动脉内皮改变及血浆脂联素水平的变化,探讨淫羊藿总黄酮对高脂大鼠血管内皮的保护作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物及试药 (1)动物:刚断乳的SD雄性大鼠35只,平均体质量约60g,清洁型,由南京军区南京总医院动物实验中心提供[实验动物使用许可证号:SYXK(苏)2003-0032]。 (2)试药:淫羊藿总黄酮由南京泽朗医药公司合成,其中淫羊藿总黄酮含量占90%。脂联素ELISA试剂盒购于美国R&D公司;甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.2 造模及给药 所有大鼠均适应性喂养1周,随机分为自配方高脂饲料(鱼粉3%、猪油12%、白蔗糖5%、鸡蛋10%、胆固醇2%、胆酸盐0.5%、甲基硫氧嘧啶0.2%和67.3%基础饲料)组(26只)和对照组(予普通饲料,9只)。高脂饲料进食量控制在15g(100g/d),分早、中、晚三餐定时定量给予,第12周末从大鼠眶后静脉抽血检测血脂水平以确定模型是否复制成功。再将高脂饲料组大鼠随机分为模型组 (8只)和低剂量淫羊藿总黄酮组(100mg/kg,9 只)、高剂量淫羊藿总黄酮组(200mg/kg,9 只)。 模型组及高、低剂量淫羊藿总黄酮组继续喂饲高脂饲料,并予相应药物灌胃,对照组和模型组予空白溶剂灌胃。各组均给药4周。

1.3 标本采集 12周末从大鼠眶后静脉抽取血液4mL,常规消毒。实验结束后第16周,禁食24h,于次日上午8时,用20%氯胺酮,以1mL/100g剂量麻醉后,剪开胸腹腔,暴露心脏,左心室穿刺取血5mL,室温静置1h后,3000r/min离心 5min,分离血清置-20℃冰箱保存;于冰盘中分离主动脉,置液氮中保存。

1.4 血脂指标检测 甘油三酯 (TG)用TPO-PAP法,胆固醇(TC)用CHOD-PAP法,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)用选择性沉淀法,均按照试剂盒说明书进行。

1.5 主动脉病理检测 大鼠主动脉弓与胸主动脉交界处取材,10%中性甲醛固定,石蜡包埋,水平横切面制备石蜡切片,厚度4μm,苏木素伊红(HE)染色,100倍光镜下观察。

1.6 脂联素(ADP)检测 脂联素用ELISA法检测,应用双抗体夹心法测定标本中大鼠ADP水平,每份标本测2次取平均值,严格按照试剂盒说明进行操作。

1.7 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件。计量资料以表示,多组资料组间比较用单因素方差分析,方差齐性用LSD,方差不齐用Dunnett T3。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组血脂及ADP水平比较 见表1,表2。造模后12周时(干预前)高脂饮食组TG、TC、LDL-C较对照组明显升高 (<0.01)。实验16周末(干预后),模型组TG、TC显著高于对照组和高、低剂量淫羊藿总黄酮组(P<0.05或0.01),模型组HDL-C明显高于对照组(P<0.01),与高、低剂量淫羊藿总黄酮组比较无明显差异(P>0.05);模型组LDL-C高于对照组及高剂量淫羊藿总黄酮组,但差异无统计学意义(P>0.05)。模型组血清ADP水平显著低于其他各组(P<0.05);高剂量淫羊藿总黄酮组ADP水平较低剂量高,差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 第12周时(干预前)血脂水平比较 (mmol/L

表1 第12周时(干预前)血脂水平比较 (mmol/L

与对照组比较,*P<0.05。

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表2 干预后各组血脂及脂联素水平比较

表2 干预后各组血脂及脂联素水平比较

与模型组比较,△P<0.05,△△P<0.01;与高剂量淫羊藿总黄酮组比较,▲P<0.05。

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2.2 主动脉病理检测结果 见图1。光镜下可见:对照组血管壁结构清晰、内皮细胞完整无脱落,内膜薄,中层平滑肌层均匀、厚度正常,外层为疏松结缔组织;模型组血管内皮细胞部分脱落,内膜增厚,血管壁向管腔内突出,可见中膜平滑肌增生、排列紊乱;低剂量淫羊藿总黄酮组可见内膜轻度增厚,少量缺损,未见明显平滑肌增生;高剂量淫羊藿总黄酮组没有明显的病理改变。

图1 各组主动脉病理学切片

3 讨 论

高脂饮食为动脉粥样硬化独立危险因素,在没有代谢综合征情况下高脂饮食可增加血浆TC及LDL,并增加动脉粥样硬化形成危险[3]。其中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)和TC会对动脉内膜造成功能性损伤,出现血管内皮损伤[4]。本研究利用高脂饮食饲养大鼠12周后,发现大鼠血脂水平增高,模型组TG、TC均明显升高,主动脉病理切片示出现不同程度的内膜增厚、断裂、脱落、平滑肌增生,符合内皮损伤表现,形成高脂血症内皮损伤模型。药物干预后可见,淫羊藿总黄酮能降低血脂(TG、TC)水平,减轻血管内皮细胞损伤,说明淫羊藿总黄酮通过调节血脂改善血管内皮。

ADP为白色脂肪组织分泌的唯一与体内脂含量负相关的脂肪因子,为诊断心血管疾病的一个新的生物标志物[5],其水平随着不断增加的血脂水平而下降。ADP通过激活cAMP和AMP激酶的活性来抑制TNF-α诱导的核因子κB,从而起到抗炎、抗氧化等作用,改善高脂所致的内皮细胞损伤[6-8]。并有研究显示高脂饮食诱导的肥胖大鼠可出现血管内皮损伤,舒张功能障碍,通过加入ADP进行孵化,可改善动脉血管内皮的功能[9]。ADP素抑制动脉粥样硬化主要通过抑制单核细胞聚集和吞噬细胞的激活,并可抑制血管内皮损伤及增加内皮性NO的量,改善内皮细胞功能[10]。本研究显示,高脂血症模型组较对照组ADP水平显著下降,进一步证明了低ADP与高脂血症及其诱导的血管内皮损伤有关。有研究显示ADP改善高脂血症所致的血管内皮损伤,可能与增加eNOS的活性,抑制iNOS活性相关,从而增加NO的量,减轻氧化应激水平[8]。淫羊藿总黄酮可显著提高血浆ADP水平,高剂量治疗组较低剂量治疗组改善更为明显,差异有统计学意义。病理切片示淫羊藿组血管未见明显改变,未见脂质沉积,内皮完整,平滑肌未见增厚。提示淫羊藿总黄酮可能通过提高血浆ADP水平发挥保护血管内皮,抗动脉粥样硬化作用。

本研究显示淫羊藿总黄酮通过调节高脂血症大鼠血脂及提高血浆ADP水平,从而达到抗高脂症所致的早期动脉粥样硬化血管内皮损伤。

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