白及三七混剂对门脉高压性胃病大鼠模型血小板功能的影响*

雷 霆 陈志国 周 军 肖 刚

陕西中医学院附属医院（陕西咸阳712000）

门脉高压性胃病 （PHG）系指门脉高压病所伴发的一种特殊类型的胃黏膜病变，是引起上消化道出血的重要因素之一。在重度肝功能不全患者及重度PHG患者中，PHG为第1位出血因素［1］。本研究通过建立PHG大鼠模型，应用白及三七混剂治疗 PHG，观察血浆中血小板 4因子（PF4）和可溶性 P-选择素（SPS）的变化，探讨其治疗PHG出血的机制。

1 材料与方法

1.1 实验药物 白及三七混剂 （白及粉200mg/kg、三七粉200mg/kg加入沸水，晾凉后制成糊剂）；云南白药 （国药准字Z53020798，产品批号：20090607）；10%水合氯醛；青霉素钠（哈药集团总厂生产，生产批号：C080101417）。

1.2实验动物 健康SD大鼠40只，雌雄各半，育龄6~8周，体质量（200±20）g，购自西安交通大学动物实验中心，合格证编号：SCXK（陕）2007-001。

1.3 试剂与仪器 酶联免疫试剂由西安阿尔宝生物技术有限公司提供试剂盒（48孔配置）。高速台式离心机（北京安亭医用离心机厂）；超净工作台（苏州净化设备公司，SW-CJ-ID型）；低温冰箱（三洋公司MDF-U332型）；酶联免疫检测仪（国营华东电子管厂DG5031型）；电子天平（上海第二分析仪器厂FA 2004N型）；显微镜（德国Leica公司DM40008型）。

1.4 分组及造模［2-5］40只健康SD大鼠适应性饲养1周后，根据随机数字表分为假手术组、模型组、白及三七混剂组及云南白药组。除假手术组外，其余3组采用1期门静脉缩窄加左肾上腺静脉结扎法复制大鼠PHG模型。10%水合氯醛（0.3mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，正中切口入腹，游离出门静脉，用9号针头作内支撑，缩窄门静脉横经约90%，再将左肾上腺静脉结扎。假手术组只游离门静脉和左肾上腺静脉，不缩窄或结扎。2周后随机自手术组选取2只及假手术组1只处死，取肝组织行苦味酸-天狼红染色，按实验动物肝纤维化组织学Ⅵ级标准进行肝纤维化程度评判对照，镜下观察肝纤维形成，示模型制备成功［6］。

1.5 给药方法及标本采集 白及三七混剂组按1mL/100g每日给予白及三七等混剂灌胃（400mg/kg）；云南白药组按1mL/100g每日予云南白药灌胃（400mg/kg）；假手术组及模型组大鼠正常喂养。给药7d后处死大鼠，采取血样标本，待测。

1.6 检测指标 选择柠檬酸钠作为抗凝剂，与血样标本混合10～20min，2000～3000r/min离心20min左右， 仔细收集上清液，即为血浆成分，将所有处理好的血样进行酶联免疫法测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本中大鼠PF4和SPS质量浓度。

2 结 果

2.1 病理学检查结果 PHG模型病理切片 （×40）观察结果显示：胃黏膜下小血管管壁增厚，管腔扩张，单位视野下数目增多（如图1A），肝组织汇管区小血管扩张，假小叶形成，少数肝细胞呈现双核增生改变（如图1B）。

图1 PHG模型大鼠病理组织切片图

2.2 各组血浆中SPS和PF4水平比较 见表1。白及三七混剂组与云南白药组大鼠血浆中PF4和SPS的含量与模型组比较明显升高（P﹤0.01）；但白及三七混剂组和云南白药组比较，PF4和SPS的含量无明显差异（P＜0.05）。

表1 各组血浆中SPS、PF4水平比较 （ng/mL

表1 各组血浆中SPS、PF4水平比较 （ng/mL

与模型组比较，*P＜0.01；与假手术组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

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3 讨 论

建立稳定的肝硬变门脉高压症模型是肝硬变门脉高压症基础性研究的前提［7］。本实验采用门静脉缩窄加左肾上腺静脉结扎法，成功诱导出较理想的大鼠肝硬变门静脉高压症胃病模型。该方法特点在于实验性肝硬变在形成过程中历经肝细胞变性坏死、纤维组织增生及假小叶形成等几个阶段，这与人类肝硬变自然演变过程基本一致。经过预实验中证实，采用PHG肾上腺静脉结扎法，造模15d后，大鼠门静脉压稳定在较高水平（测定肠系膜前静脉分支静脉压平均大于10mmHg），胃底黏膜及黏膜下动静短路早期出现并异常开放，并且其胃黏膜具有特征性病理变化，类似于临床上PHG患者的胃肠黏膜变化［8］。该方法造模成功率高，复制简单易行，符合本课题的实验设计基本要求。

肝硬化门脉高压对血小板功能的影响是一个复杂问题，涉及到血小板结构、形态、生理生化性质等多方面的改变。血小板在止血过程中起作用，除依赖于血小板的数量外，血小板的功能状态也极其关键。研究结果表明，肝硬化患者血小板黏附、活化和聚集能力显著低于正常，提示血小板功能异常在肝硬化患者的出血倾向中起着非常重要作用［9］。国内曾有报道，肝硬化门脉高压时血小板功能不同程度降低，其中通过实验检测发现，血块收缩异常者占77.8%，血小板黏附率降低者占66.7%，PF4减少者占78%，血小板聚集率降低者占77.8%，血小板第3因子有效性减少者占 65.7%［10］。

本实验研究发现，模型组较假手术组PF4及SPS指标均明显下降，说明肝硬化PHG时血小板凝血功能各项参数将不同程度上发生改变，血小板活化能力出现不同程度下降表现，这一结果极可能是PHG并发上消化道出血的主要原因之一。如果临床治疗上选用一些能够有效改善血小板活化能力的药物，那么PHG并发上消化道出血机率将会显著降低。

白及三七混剂中诸药虽然都有止血，活血散瘀的功效，但是由于各成分的相互作用，其综合作用绝不是单味药的简单叠加，还可能会出现新的作用。通过笔者近年临床应用证实：白及三七混剂在PHG急慢性出血治疗上是一种安全、价廉、有效、无毒副作用重要药物，该药物围手术期治疗中结合中医辨证加减后，可以使患者得到有效的合理的个体化治疗。

笔者选取云南白药作为对照组，白及三七混剂作为治疗组，仔细观察其对血小板凝血功能指标变化的影响，结果发现：云南白药及白及三七混剂均能够升高PF4及SPS指标，改善血小板活化能力，提高机体的凝血功能，有效地促进止血过程进行，但两者彼此之间治疗效果接近。药理研究表明：云南白药能促进血小板聚集，增强血小板活化百分率及血小板表面糖蛋白表达，能缩短血液凝血时间，使伤口出血时间及凝血酶原时间缩短，对动脉血管有明显收缩作用。因此，临床上应用白及三七混剂治疗PHG出血的作用机理可能应该与血小板活化功能提高有关。其具体机制可能是：血小板表面多种受体经混剂所产生的胶原物质诱导刺激，迅速发生蛋白磷酸化反应，激活了血小板，引起释放反应发生，形成或释放出组织因子，进一步激活凝血系统中的多种凝血因子，从而实现体内促凝过程，其表现出迅速有力的止血作用。PHG时血小板活化能力会降低，这可能是PHG合并上消化道出血原因之一。白及三七混剂在PHG出血治疗中是一种可行的方法，具有一定的临床实用价值，其作用机制还需进一步研究探讨。

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［3］管洪庚，陈易人，吕光成.门脉高压性胃病动物模型复制及发病机理研究［J］，中华实验外科杂志，1999，16（1）：84-85.

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［6］ 张瑞，刘浔阳.洛沙坦在大鼠门脉高压性胃病中的作用［J］.中南大学学报，2007，32（3）：494-497.

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［8］王昕琛，杨镇，李洪华，等.门静脉高压大鼠胃黏膜及微血管增生程度的初步研究［J］.肝脏杂志，2006，11（1）：21-23.

［9］王修石，袁亚军.对620例肝硬化血小参数与凝血功能相关指标的探讨［J］.国际检验医学杂志，2006，27（9）：791.

［10］霍丽娟，田玲琳.氯沙坦对肝硬化门脉高压症大鼠肝静脉压力梯度的影响［J］.中西医结合肝病杂志，2009，19（3）∶165-167.