HBV-DNA乙型病毒性肝炎前S1抗原与HBV血清标志物的相关性

邓良准,李 锐

(1.陕西省汉中市三二0一医院感染科,陕西汉中,723000;2.山西省太原市传染病院,山西太原,030012)

乙型病毒性肝炎是我国的高发病,掌握乙肝 病毒在体内的复制对准确判断病情以及对抗病毒治疗的准确监测具有重要的意义。目前,绝大多数医疗机构不具备检测HBV-DNA的条件,只能根据乙肝标志物检测结果粗略判断有无乙肝病毒复制。为探讨HBV-DNA,PreS1与其他HBV标志物的相关性,正确评价其临床意义,作者采用荧光定量PCR技术,酶联免疫吸附法(ELISA)分别对200份HBsAg阳性样本及40份HBsAg阴性样本进行了 HBV-DNA、PreS1、HBVm 标志物检测,以讨论其相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择本院感染科2005年8月至2007年9月住院HBV感染者200例,均符合2000年第10次全国病毒性肝炎会议制定乙肝诊断标准,男128例,女72例,年龄20～59岁,平均39.8岁。其中急性乙肝患者血清25份(抗HBc-IgM阴性),慢性乙肝患者血清145份,肝硬化患者血清30份。对照组选择其他类型肝炎40例进行PreS1检测。

1.2 方法

HBV PreS1检测:HBV PreS1试剂由中国科学院上海生物化学研究所研制,上海阿尔法生物技术有限公司生产。采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA),按试剂说明书操作。

HBV-DNA定量:检测所用仪器系德国Roche公司生产的Light Cycler自动荧光PCR仪;HNV-DNA FQ-PCR试剂盒由深圳皮基生物工程公司提供,严格按试剂说明书操作。

HBV血清标志物:检测试剂有华美生物工程公司生产,采用ELISA方法按试剂说明书操作。

2 结 果

2.1 200例HBV感染者HBV-DNA荧光定量及PreS1抗原检测

在能够检测到HBV-DNA的158份血清样本中(病毒载量>103拷贝/mL),PreS1抗原阳性率达81.6%(129/158)。且随血浆中HBV-DNA含量水平的增加,PreS1抗原阳性检出率也随之上升,2者之间存在显著相关性(P<0.01)。见表1。

表1 200份标本HBV-DNA含量与PreS1检测结果比较

2.2 不同HBV血清标志物组合HBV-DNA荧光定量PreS1抗原检测

HBeAg阳性标本91份,其中HBV-DNA阳性88份(阳性率96.7%),PreS1抗原阳性81份(阳性率89.0%)。HBeAg阴性率64.2%;PreS1抗原阳性53例,阳性率48.6%。HBeAg阴性,抗HBe阳性血清82份中,PreS1抗原阳性率54.8%(45/82);PreS1抗原存在于HBeAg,抗HBe双阴性血清(27)中 8份,阳性率29.6%(8/27),见表2。

表2 不同HBVm下HBV-DNA,PreS1的检测结果

2.3 不同乙肝、肝硬化患者HBV-DNA及PreS1检测

急性乙肝、轻度慢性乙肝标本中HBV-DNA及PreS1的阳性检出率无显著性差异(P>0.05)。而中重度慢性乙肝、肝炎肝硬化标本中HBV-DNA阳性检出率明显高于PreS1(P<0.05)。见表3。

表3 急慢性乙肝和肝硬化患者HBV-DNA、PreS1关系

3 讨 论

前S1抗原(PreS1)抗原由乙肝病毒前S1编码,由108或119个氨基酸组成的肽段,其位于HBVDane颗粒和管型颗粒上,具有高度的免疫原性。PreS1抗原只存在与完整的HBV颗粒上,具有很高的特异性。众多研究认为PreS1、PreS2及多聚人体血清蛋白受体(PHSA-R)在乙肝病毒侵入肝细胞过程中起重要作用,其在HBV复制时表达最多,可作为HBV复制的标志[1-4]。

通过对200份乙肝患者血清样本检测可以看出,在158份HBV-DNA定量阳性标本中PreS1抗原的阳性率高达81.6%,且随着病毒含量水平的增加 PreS1抗原的阳性率也随之升高。因此PreS1抗原很好的反映了HBV在体内的复制状况。但应该注意的是在HBV-DNA阴性的标本中仍有11.9%PreS1抗原阳性。这可能是由于抗病毒药物所致的HBV-DNA复制抑制或引物对应的DNA序列变异等原因所致[5]。

在对不同的HBV血清标志物组合分组进行HBV-DNA荧光定量及PreS1抗原对比发现,在HBeAg阴性标本中仍有48.6%PreS1抗原阳性,更有64.2%HBV-DNA荧光定量阳性。可能是由于HBV基因组前C区发生变异导致HBeAg表达障碍。此时HBeAg阴性并不表达HBV复制停止或病毒血症消失[6-9]。因此PreS1抗原可作为一种重要的病毒复制补充指标。

在对不同感染阶段样本分组比较发现,PreS1抗原在急性乙肝检出率高达92%,而且在急性乙肝及轻度乙肝样本中HBV-DNA荧光定量及PreS1抗原阳性率间没有显著差异。而在中重度慢性乙肝两者阳性率存在差异。同时急性及中重度慢性乙肝HBV-DNA荧光定量及PreS1抗原阳性率高于轻度慢乙肝。提示一方面在急性感染及中重度慢性乙肝阶段病毒复制水平较高,HBVDNA荧光定量及PreS1抗原具有良好的相关性。另一方面随着疾病的进展PreS1抗原的检出率较HBV-DNA有所下降,尤其在进入肝炎肝硬化阶段HBV-DNA荧光定量都有显著下降,以PreS1抗原的检出率下降尤甚。其原因可能是随着疾病的进展,HBV-DNA与肝细胞的基因组发生整合。随着感染病程延长和病情加重,整合率会增加,从而导致血清HBV含量减低,检出率下降[10]。

综上所述,传统上根据HBeAg是否阳性来判断HBV的复制情况是非常不严谨的[11-13]。都应进行血清HBV-DNA定量测定。如果条件可以开展PreS1抗原的检测作为参考和补充指标。这样能够更真实的反映HBV感染及复制情况。PreS1抗原在早期诊断乙肝,判断预后及确定治疗方案等反面具有重要的临床价值。

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