尼扎替丁分散片与尼扎替丁普通片在健康人体内的药代动力学研究

冒 群

(江苏省如皋市人民医院药剂科,江苏如皋,226500)

尼扎替丁(nizatidine)是一种强效、选择性组胺H2受体阻滞剂,竞争性地与组胺H2受体相结合,可逆性地抑制其功能,从而抑制胃酸分泌[1-2]。该药在国外已上市多年,用于治疗消化性溃疡、胃食管反流性疾病引起的烧心症状等,且无明显毒副作用[3-4]。消化性溃疡发作时,上腹疼痛呈反复周期性发作,疼痛难忍,多呈钝痛、灼痛或饥饿样痛等[5-8]。为了迅速缓解疼痛给病人带来的巨大痛苦,故将尼扎替丁制成分散片。为了揭示尼扎替丁分散片速释药物的行为,本研究建立了改进的高效液相色谱测定方法,并且应用于人体药代动力学研究,为临床安全、有效提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器与试剂:Waters 2690 Alliance HPLC仪,包括water 2487双波长检测器,Millennium32数据采集处理系统;3-18K高速离心机(德国sigma公司);HUP系列超纯水器(上海禾工科学仪器有限公司);微孔滤膜及过滤装置(MilliporeUSA)。

试验药:尼扎替分散片(150 mg/片,威特(湖南)药业有限公司,批号100601)。对照药:尼扎替丁片(150 mg/片,江苏恩华制药有限公司,批号100517)。尼扎替丁标准品(中国药科大学药物合成研究室提供,纯度98%以上);雷尼替丁对照品(天津一方科技有限公司,纯度98%以上)。甲醇为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。

1.1.2 对照品储备液及内标溶液的制备:精密称取尼扎替丁对照品适量,用甲醇溶解制备成含尼扎替丁50 mg/L的对照品储备液,4℃冰箱中保存。临用时,精密吸取适量,用流动相稀释至所需浓度即可。

精密称取雷尼替丁内标物适量,用甲醇溶解制备成含雷尼替丁60 μ g/L的对照品储备液,于4℃冰箱中保存。

1.2 方法[9-11]

1.2.1 血浆样品预处理:精密吸取受试者血浆0.5 mL,置于15 mL具塞试管内,精密加入内标物50 μ L(60 μ g/mL 雷尼替丁溶液)和50 μ L 盐析溶液(NaCl 10.0 g,氢氧化钠8.0 g,加适量的水至100 mL)。摇匀,加入三氯甲烷4.0 mL,漩涡混旋2 min,高速离心(12 000 r/min)10 min,取下层有机相于10 mL尖底玻璃试管中,40℃水浴中氮气吹干,进样前残渣用100 μ L流动相溶解 ,进样 80 μ L 。

1.2.2 色谱条件:色谱柱Dikma Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm,5 μ m)。流动相0.01 mol/L醋酸铵缓冲液:甲醇(60:40)。流速1 mL/min;柱温40℃;检测波长320 nm。

1.2.3 受试者选择:健康志愿者分成两组,每组6人,年龄(22.3±1.5)岁,体质量(63.5±7.0)kg。经病史询问,并经肝肾功能、血尿常规和心电图检查证实为健康受试者,志愿参加尼扎替丁分散片的人体生物利用度试验。受试者对试验过程及可能发生的不良反应表示理解并签约知情同意书,试验经伦理委员会批准。受试者受试前2周及试验期间未用过任何其他药物并禁烟酒。各组分别单剂量口服尼扎替丁分散片和尼扎替丁普通片,剂量均为20 mg。受试者于试验前日晚8时后禁食,次日晨用200 mL温开水送服受试药物。服药2 h后方可饮水,4 h后进相同低脂肪、低蛋白标准餐。受试者于服药前及服药后0.25、0.5、1、1.5 、2、4、6、8、10、12 h 取静脉血 2 mL 于肝素试管中,分离出血浆,-40℃保存待测。整个实验在医护人员监护下进行,并对药物产生的不良反应及时记录和处理。

2 结 果

2.1 专属性

将口服药物后的血浆按“1.2.1”项下操作,取80 μ L注入高效液相色谱仪,同法处理空白血浆和空白血浆加对照品和内标的血浆,所得色谱图显示,尼扎替丁和雷尼替丁(内标)的峰形对称,保留时间分别为6.113 min和4.532 min,且血浆中的杂质不干扰样品的测定,基线平稳,因此本法具有良好的专属性。

2.2 尼扎替丁标准曲线

精密量取上述标准溶液适量,分别加入1 mL空白血浆中,配成血浆浓度分别为 10、20、60、100、300、600、900、1 400 μ g/L 样品 ,样品均按“1.2.1血浆样品预处理”项下操作,取 80 μ L进样,进行HPLC分析以测得的尼扎替丁峰面积(Y)对血浆药物浓度(C)进行线性回归,得工作标准曲线方程(n=6):Y=0.001081 C-0.05394,r=0.9998。尼扎替丁的血药浓度在10～1 200 μ g/L范围内呈良好的线性关系,按信噪比3∶1确定最低检测限,最低检测限度为10 μ g/L。

2.3 精密度和回收率

采用空白血浆,添加适量的标准溶液,配置浓度高 、中 、低 3种浓度为 900 、100 、20 μ g/L 的加样标本,作为质控样品,每个浓度各6份,按“1.2.1血浆样品预处理”项下操作,测定尼扎替丁的浓度,以实测浓度与加入浓度之比乘以100%,计算回收率,并计算日内差。以同样的方法连续测定6 d,计算日间差,结果见表1。结果表明测得的日内及日间精密度均小于10%,回收率可达90%以上,可见本方法有较好的准确性,符合生物样本测定方法的要求。

2.4 稳定性

取高 、中 、低 3 种浓度为 900 、100 、20 μ g/L 的质控血浆,按“1.2.1血浆样品预处理”项下步骤处理后放于室温下自动进样器中,分别在 0、8、16、24 h测定,比较不同时间测定的浓度。结果尼扎替丁的浓度变化小于5%,表明血浆样品在24 h内稳定性良好。

2.5 多次冻融试验结果

配制高、中、低3种浓度的质控血浆适量,即时测定;另-20℃冷冻保存,解冻测定,连续3次,计算经3次冻融后尼扎替丁测定浓度的变化。结果尼扎替丁的浓度变化小于5%,表明血样经3次冻融后稳定性较好(表2)。

2.6 尼扎替丁在人体内药代动力学

12例健康志愿者空腹单剂量口服尼扎替丁分散片和普通片(150 mg)后,绘制血浆中平均血药浓度-时间曲线图,采用DAS2.1软件对尼扎替丁的药-时曲线进行拟合,结果表明,尼扎替丁的药-时曲线符合二室模型,所计算出的主要药动学参数见表1,本方法适用于测定人血浆中尼扎替丁的浓度。

表1 尼扎替丁主要药代动力学参数(±s,n=6)

表1 尼扎替丁主要药代动力学参数(±s,n=6)

参数 尼扎替丁分散片 尼扎替丁普通片Cmax(μ g/L) 1 614.8±106.2 1 311.7±89.5 tmax(h) 1.0±0.6 1.5±0.4 t1/2(h) 4.8±1.3 5.3±1.1 AUC0∞[μ g/(h·L)] 4 731.3±118.29 4 518.6±108.3 AUC0t[(μ g/(h·L)] 2 216.7±106.9 2 187.4±78.9

3 讨 论

前期研究选择血浆中尼扎替丁的提取方法时,分别比较了正丁醇、乙酸乙酯、氯仿、甲基叔丁醚、环己烷等,结果因用环己烷和正丁醇提取,所得提取液不易挥干;用乙酸乙酯和甲基叔丁醚提取,提取溶剂中杂质太多,干扰样品的测定。而尼扎替丁又易溶于氯仿,其溶解度是水中的4倍多,因此采用氯仿为提取溶剂;同时为减少尼扎替丁在血浆中的溶解造成的损失,采取碱化加盐析的方法,保证萃取回收率,同时也了满足最低检测限(约 10 μ g/L)的要求。

尼扎替丁分散片与普通片比较,其在体内代谢行为明显加快,约1.0 h左右到达血药浓度顶峰,且血药浓度明显比普通片提高1.23倍,消除半衰期为4.8 h左右。这可能与普通片剂存在着崩解速度慢的缺点,对药物的吸收有一定的影响有关。分散片速崩是由于所选择的崩解剂具有不溶于水(可不完全溶于水)与吸湿性强的特点,水分子通过毛细管作用或膨胀作用渗透进入片剂之中,吸水后粉粒膨胀而不溶解,不形成胶体溶液,不至于阻碍水分子的继续渗入而影响片剂的进一步崩解。故一般而言,分散片在19～21℃水中一般3 min内完全崩解,明显提高了药物的吸收度。分散片使药物的达峰峰度增加,达峰时间缩短。对于严重消化性溃疡患者而言,迅速缓解疼痛将会带来临床疗效上的优势。

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