益肾调肝汤Ⅱ号方对PCOS模型大鼠糖、脂代谢的影响※

● 陈 芊 张 斌 孙 选 孙云松 徐慧军

益肾调肝汤Ⅱ号方对PCOS模型大鼠糖、脂代谢的影响※

● 陈 芊 张 斌 孙 选 孙云松 徐慧军

目的:观察中药益肾调肝汤Ⅱ号方对PCOS模型大鼠胰岛素抵抗及血糖、血脂的影响，以了解该方对PCOS糖脂代谢的影响，试图探求其治疗机理。方法:24日龄Wistar大鼠进行皮下埋植左炔诺孕酮(左旋18－甲基炔诺酮硅胶棒)结合皮下注射hCG造模，分组灌服生理盐水、二甲双胍、中药15天后，观察各组大鼠体重变化及血空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL－C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL－C)的水平。结果:PCOS模型大鼠体重增加幅度明显大于正常组，血FBG、FINS、胰岛素抵抗指数(HOMA－IR)、TG、TC和LDL升高，HDL－C降低，运用中药益肾调肝汤Ⅱ号方中高剂量后，模型大鼠体重增加量与正常大鼠相近，血HDL－C升高，其它血值明显下降。结论:益肾调肝汤Ⅱ号方可改善胰岛素抵抗和高胰岛素血症、糖脂代谢紊乱，控制肥胖，促进排卵，恢复卵巢功能。

益肾调肝汤Ⅱ号方 多囊卵巢 胰岛素抵抗 血糖 血脂

多囊卵巢综合征(Polycysticovariansyndrome，PCOS)是一组以慢性无排卵、卵巢多囊性改变等为特征的综合征候群，是育龄妇女群体高发的一种疾病，不仅涉及生殖系统，直接影响女性的生育功能，而且是一种代谢综合征，常发生高胰岛素血症(High Insulin，HI)、高血脂、糖尿病和心血管疾病，在治疗上涉及月经失调、生育问题、内膜增生、远期代谢合并征等多学科问题，因此随着研究的深入，PCOS已经超出了妇科疾病的范畴，其病理机制涉及到遗传、内分泌、免疫、代谢等多个系统;而其给患者所造成的身心危害也更加引起人们的关注，是威胁到患者一生的疾病。至今医学界对于该病的病因未达成共识，中医药的多系统调理、多靶点作用及整体观念、辨证论治使其在治疗PCOS方面存在独特优势和巨大潜力，本研究旨在通过实验研究益肾调肝汤Ⅱ号方对PCOS模型大鼠胰岛素抵抗及血糖、血脂的影响，以了解该方对PCOS糖脂代谢的影响，试图探求其治疗机理。

1 材料与方法

1.1 实验药品、仪器和试剂 益肾调肝汤I号方:山茱萸、菟丝子、仙灵脾、当归、柴胡、白术、山药、陈皮、茯苓等，益肾调肝汤Ⅱ号方:I号方基础上加炮山甲、鳖甲等，中药由青岛市海慈医院药剂科提供。盐酸二甲双胍片:上海信谊九福药业有限公司生产，国药准字H31022081，规格0.25g，批号081113。左旋18－甲基炔诺酮硅胶棒产自上海达华药业有限公司，国药准字H10970174，每根硅胶棒含75mg左旋18－甲基炔诺酮，规格 39mm×2.4mm，批号080528。注射用hCG购自广东丽珠医药集团股份有限公司，国药准字 H44020674，规格1000IU/支，生产批号:081102。显微镜:日本Olympus公司生产(型号CX31)，分析天平:上海精科天平公司生产TG328A型。大鼠卵泡刺激素(FSH)、黄体生成激素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)微粒子酶联免疫测定法(MEIA)试剂均由美国Abbott公司(Abbott Laboratories)提供。全自动发光免疫分析仪:美国Abbott公司提供，仪器型号为AXSYMPLUS。

1.2 实验造模［1，2］选 24日龄大鼠体重(45～55g)之间Wistar雌性大鼠(青岛市动物研究所提供，动物许可证号SCXK(鲁)20030010)，麻醉后皮下埋植左炔诺孕酮(左旋18－甲基炔诺酮硅胶棒)3mm/只，3d后(27日龄)实验组每天皮下注射hCG 1.5 IU，2次/日，共9天;对照组大鼠27日龄始每日颈背部皮下注射与实验组等量生理盐水，共9天。采用阴道细胞学检查来判定是否造模成功。

1.3 分组给药 选择造模成功60只大鼠及未造模10只大鼠，分7组，未造模10只大鼠为正常对照组(Ⅰ组);造模的60只大鼠随机分为6小组，每组10只。依据人与各种动物以及各种动物之间用药剂量换算系数表换算实验给药剂量，灌胃给药，每天1次，持续15天。模型对照组(Ⅱ组)与正常对照组(Ⅰ组)每日一次生理盐水;西药对照组(Ⅲ组)每日一次二甲双胍按成人剂量(500mg/60kg)的7倍(58 mg/kg);中药对照组(Ⅳ组)每日一次益肾调肝汤I号方按成人剂量(2.95g/kg)的7倍(21.7g/kg);中药低、中、高剂量组(Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ组):每日一次益肾调肝汤Ⅱ号方按成人剂量(3.37g/kg)的3.5倍(11.8g/kg)、7 倍(23.6g/kg)、14 倍(47.2g/kg)。实验全过程动物自由饮水、进食。

1.4 观察指标 灌胃完成后1天即第16天晚20时起禁食过夜，次日动物称重记下体重;麻醉各组大鼠，开胸心脏采血，微粒子酶联免疫测定法(MEIA)方法测定下列数值:测量血清学测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL－C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL－C)水平。

1.5 统计学处理 用SPSS 16.0版本统计软件进行统计处理。

2 结果

2.1 各组大鼠试验前后体重情况 ①正常对照组(Ⅰ组)与其它组的差别有显著性意义(P＜0.05)，其它各组间的差别无显著性意义(P＞0.05)，表明造模成功。②经造模后PCOS模型大鼠体重增加，比正常组大鼠体重重(P＜0.05)，试验处理后各组大鼠体重均增加，但增加的量有差别，运用西药盐酸二甲双胍片、中药益肾调肝汤Ⅱ号方中高剂量后，模型大鼠的体重增加量与正常大鼠相近(P＞0.05)，而用益肾调肝汤I号方及Ⅱ号方低剂量后模型大鼠的体重增加量与给予生理盐水的模型大鼠相近(P＞0.05)，并明显高于正常组大鼠(P＜0.05)，即运用上两方剂的模型大鼠的体重仍增加明显。见表1。

2.2 各组大鼠血清FBG、FINS、HOMA－IR及血脂的比较 经造模后PCOS模型大鼠血清空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA－IR)及甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL－C)升高(P＜0.01)，而高密度脂蛋白胆固醇(HDL－C)降低(P＜0.01)，运用西药盐酸二甲双胍片、中药益肾调肝汤Ⅱ号方中高剂量后，模型大鼠血HDL－C升高(P＜0.05)，其它值的明显下降(P＜0.05)，而用益肾调肝汤I号方及Ⅱ号方低剂量后模型大鼠的上述值变化不明显(P＞0.05)，并明显高于正常组大鼠(P＜0.05)。见表2。

表1 各组大鼠试验前后体重情况(±s)

表1 各组大鼠试验前后体重情况(±s)

组别 动物总数(只) 试验前体重(g) 试验后体重(g) 差值(M±Q)正常对照组(Ⅰ组) 10 164.40 ±10.21 173.70 ±11.93 9.40 ±4.58★模型对照组(Ⅱ组) 10 195.30 ±17.03▲▲ 214.10 ±12.85 18.50 ±7.58▲▲西药对照组(Ⅲ组) 10 187.10 ±15.42▲ 197.50 ±14.32 10.40 ±6.35★中药对照组(Ⅳ组) 10 199.70 ±15.13▲▲ 218.70 ±10.73 19.00 ±6.12▲▲中药低剂量组(Ⅴ组) 10 188.00 ±10.07▲ 206.40 ±8.67 18.50 ±7.03▲▲中药中剂量组(Ⅵ组) 10 185.20 ±16.65▲ 196.90 ±10.74 11.70 ±10.56★中药高剂量组(Ⅶ组) 10 185.10 ±13.63▲ 194.70 ±9.04 9.60 ±7.23★

表2 各组大鼠血清FBG、FINS、HOMA－IR及血脂的比较(±s)

表2 各组大鼠血清FBG、FINS、HOMA－IR及血脂的比较(±s)

注:★与模型对照组比较，P＜0.05;★★ 与模型对照组比较，P＜0.01;▲与正常对照组比较，P＜0.05;▲▲与正常对照组比较，P ＜0.01。

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3 讨论

PCOS患者中有30%伴有糖耐量受损(IGT)，7.5%合并糖尿病。PCOS患者与体重相当的女性对照组比较，高胰岛素血症(HI)和胰岛素抵抗(IR)的发生率更高，程度更严重。超过40%的PCOS患者伴有肥胖，伴有肥胖的患者与体重相当的对照组及低体重的PCOS患者比较，IR更为明显。PCOS－IR患者空腹胰岛素(FT)和糖耐量试验(OGTT)后胰岛素水平均高，而HI可引起卵巢和肾上腺分泌雄激素增多，过高的雄激素又反过来影响胰岛素的功能，加重胰岛素抵抗，造成PCOS在发病机制上的恶性循环［1］。研究发现HI因胰岛素(INS)受体后的磷酸化异常进而刺激卵巢和肾上腺的细胞色素P450C17α—羟化酶mRNA的表达和活性而使雄激素合成增多［2］。P450C17a具有17烃化酶和17、20裂解酶的双重活性，使卵巢分泌的睾酮(T)增多和肾上腺的硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)增多。另外一些研究发现HI加重垂体促性腺激素的不协调作用，LH升高，HLH刺激P450C17α活性使卵巢T合成及分泌增多［3］;HI还能抑制肝脏合成性激素结合球蛋白(SHBG)使游离T升高，致雄激素的活性增加［4］。由此可见INS对卵巢源及肾上腺源雄激素的增加发挥着促进作用，提示HI在IR的PCOS高雄激素的形成中有不可忽视的作用。

PCOS患者的胰岛素抵抗不仅影响血脂的代谢，而且影响血脂的吸收利用。HI、IR促进肝脏分泌VLDL，引起胆固醇从HDL到VLDL的转化加速，导致血中HDL浓度降低;胰岛素依赖性抗脂解作用减弱;PCOS卵巢分泌性激素异常，表现为雄激素过多和雌激素相对不足，而雄激素(主要是T)降低腹部脂肪细胞的脂蛋白脂酶活性。本实验结果证实经造模后PCOS模型大鼠体重增重，血清FBG、FINS及HOMAIR升高(P＜0.01)，血清 TG、TC、LDL－C明显升高，而HDL－C降低(P＜0.01)，给予西药盐酸二甲双胍片后体重减轻，血 FBG、FINS、HOMA －IR、TG、TC、LDL－C明显下降(P＜0.05)，HDL－C升高(P＜0.05)，表明二甲双胍能改善PCOS大鼠IR以及血糖和血脂代谢，控制体重，可成为治疗PCOS重要的药，上述结果与一些报道相符［5、6］。本研究以二甲双胍作为实验的阳性对照药，中高剂量益肾调肝汤Ⅱ号方的效应与二甲双胍作用基本一致，而用益肾调肝汤I号方及Ⅱ号方低剂量后模型大鼠的上述值变化不明显，说明益肾调肝汤Ⅱ号方能用于临床PCOS患者的胰岛素抵抗、血糖血脂代谢异常治疗。但二甲双胍常有胃肠不适及头痛头晕不良反应，还可出现潮热、心悸，减少维生素B12吸收引起贫血，剂量控制不当易引起乳酸性酸中毒，中药无此副作用，可见益肾调肝汤Ⅱ号方较二甲双胍更有治疗优势。

我们通过临床观察研究认为PCOS以肾虚为本、肝失调畅为要，瘀血、痰浊阻滞为标。肝肾亏虚，肝郁克脾，气血津液运行失常，气滞血瘀，痰湿内停，脉络受阻，故经血调畅失常。补肾调肝为治疗PCOS的根本大法，活血化瘀、健脾燥湿是必要手段。益肾调肝汤I号方全方以补益肝肾为主，兼以理气活血、调经疏肝，能改善卵巢功能，促进排卵［7］。由于PCOS发病机理复杂，虚实错杂，多种病机集于一身或相互转化，脉络瘀阻血脉不畅，肾阴、肾阳的化生受阻，惟瘀去而新生，因此加大行血破坚之力，方能有助于正本清源。益肾调肝汤Ⅱ号方源于此在I号方基础上加穿山甲、鳖甲等破坚消癥之品，能入肝而调气血、散瘀结，助药达病所，使全方肝肾同补，破血化癥，除湿祛痰，补中有行，标本兼治，甚合PCOS本虚标实的病机，能取得较Ⅰ号方更好的疗效，不过需要达到一定剂量即常量或更高剂量才能有效。临床验证益肾调肝汤Ⅱ号方根据月经周期不同阶段阴阳气血的变化加减，治疗多囊卵巢综合征有满意疗效［8］。

［1］吴效科，周珊英，苏延华.多囊卵巢综合征患者的胰岛素抵抗［J］.中华妇产科学杂志，1999，34:698 －700.

［2］Dale P0，Tanbo T，et al.Fertil steril，1992，58:487 －491.

［3］Barberi RL，Makri s A，et al.J clip Endocrind metab，1986，62:904.

［4］Zhang L，Rodriguex H，etal.Proc Natl Acad SciUSA 1995，92:10619－10623.

［5］姚 军译，钱荣立校.多囊卵某综合征与代谢综合征［J］.中华糖尿病杂志，2005，13(2):151.

［6］Seli E，Duleba AJ.Should patientswith polycystic ovarian syndrome be treated with metformin［J］.Hum Reprod，2002，17(9):2230－2236.

［7］陈 芊，张 华，颜建敏，等.益肾调肝汤对排卵障碍卵巢功能的免疫调节［J］.中国自然医学杂志，2007，9(4):336 －339.

［8］益肾调肝Ⅱ号方治疗多囊卵巢综合征疗效观察［J］.中国中医药信息，2008年，(9):61－62.

山东省青岛市卫生局科研项目(No:青卫中医字2008－zyw035)

山东省青岛市海慈医院妇科(266033)