海洋低温蛋白酶MP对肉仔鸡生长发育的影响

庄志伟 郝建华 孙 谧 (山东六和集团 山东青岛6606山东省青岛黄海水产研究所酶与酶工程实验室 山东青岛66000)

海洋低温蛋白酶MP对肉仔鸡生长发育的影响

庄志伟1郝建华2孙 谧2(1山东六和集团 山东青岛2660612山东省青岛黄海水产研究所酶与酶工程实验室 山东青岛266000)

海洋低温蛋白酶 对肉仔鸡生长发育的影响

随着生活水平的提高，特别是自1999年比利时二恶英事件和英国疯牛病事件以来，人们越发关注由于抗生素滥用、乱用而引起的人畜健康问题，对畜产品安全性的呼声越来越高，环保意识也逐步加强。积极开发新的饲料资源，提高饲料的转化效率，降低饲料成本，促进畜牧业的可持续发展，已成为畜牧界亟待解决的问题。饲料添加剂多种多样，饲用酶制剂具有高度特异性和催化效率高、安全无毒害等优点，添加蛋白酶能补充动物体内源酶的不足，消除饲料中的抗营养因子，可显著提高饲料的利用率，扩大可利用饲料资源范围，降低养殖成本，改善养殖生态环境。酶制剂在饲料工业中的有效应用，使得饲料工业和养殖业安全、高效、环保和可持续发展成为可能。

海洋低温蛋白酶MP来自海洋细菌YS-80-122，经对该蛋白酶分离纯化，SDS-PAGE显示该蛋白酶分子量大约为46KD。其最适作用温度为30℃，最适pH为10.4，属于低温碱性蛋白酶。本文就海洋低温蛋白酶MP对肉仔鸡生产性能、免疫力的影响进行探讨，为该酶的生产应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

海洋低温蛋白酶MP由中国水产科学研究院黄海水产研究所提供。试验用饲料及鸡只由山东六和集团提供。

1.2 仪器设备与试剂

96孔V型微量血凝板、微型振荡器、塑料离心管、50μL移液器、DS-671电子秤、奥立龙酸度计、恒温箱。稀释液为氯化钠（GB1266-77）177g，磷酸二氢钾（GB1274-77）13.6g，氢氧化钠（GB629-77）3.0g，蒸馏水1000mL，高压灭菌，4℃保存，使用时作20倍稀释。

1.3 试验日粮及营养水平

见表1。

1.4 试验鸡免疫程序

见表2。

1.5 试验设计与方法

1.5.1 海洋低温蛋白酶MP对肉鸡生产性能的影响

试验鸡采用1d ROSS308雏鸡720只，公母混合雏，按饲养试验要求均分为4个处理，公母各半，每个处理设3个重复，每个重复60只。4个处理组添加不同剂量的海洋低温蛋白酶MP，见表3。自由采食、饮水饲养至35d。记录日耗料、日增重、料肉比、平均体重和成活率。

1.5.2 海洋低温蛋白酶MP对肉鸡体重影响

试验鸡采用1d ROSS308雏鸡640只，进行集中育雏，预试7天，按饲养试验要求随机均分为对照组、试验组，每组320只，设4个重复，每个重复80只，称个体重各组间无差异（P＞0.05）。对照组饲喂基础日粮，试验组则在基础日粮上添加500×10-6海洋低温蛋白酶MP，自由采食、饮水饲养至42日龄，试验期为35d。分别在2、4、6周末8∶00称取各组鸡30只体重并记录。1.5.3海洋低温蛋白酶MP对肉鸡NDHI效价的影响

表1日粮配方与营养水平

表2 肉仔鸡免疫程序

表3日粮设计方案

1.5.2 饲养至42d对试验鸡只各组取30只，用1mL一次性注射器抽出翼静脉约0.5mL血入塑料离心管，待凝固析出血清后以1000r/min离心5min做ND HI常规试验。

1.5.4 海洋低温蛋白酶MP对肉鸡免疫器官的影响

1.5.2 饲养至42d试验结束后将各组试验鸡只称重后处死，剖检，取出全部的脾脏、胸腺及法氏囊，用滤纸吸取表面的水分与血液后称重，计算免疫器官指数。NDHI检测同1.5.2。

免疫器官指数（g/g）=免疫器官重量/试验鸡只重量

1.5.5 鸡肠道乳酸杆菌数量的测定

1.5.5.1 采样及样品稀释

在21、35、42d分别从各处理重复中随机抽取公母鸡各2只称重后经口腔放血将鸡处死，5%新洁尔灭消毒液浸泡全身5min，无菌剖开腹腔，将回盲结合处上和盲肠中部各5cm分别接扎，无菌取肠内容物少许，将样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25g加入盛有225mL无菌水的三角瓶里，在微型振荡器上充分振摇，使样品均匀分散，吸取5mL悬液即为10-1的样品稀释液，另取灭菌小试管若干，每支加入稀释液4.5mL，取10-1的稀释液0.5mL加入第二管10-2，以此类推做递减稀释，终稀释度为10-11。

1.5.5.2 乳酸杆菌

选择10-3～10-5的稀释度，取100μL滴于MRS培养基平皿，用涂布棒涂布均匀，每个稀释度做3个平行样。将培养皿置于37℃生化厌氧箱中培养36h后进行菌落计数。

按下面公式计算每克内容物中乳酸杆菌的数量。每克肠内容物乳杆菌=3滴菌落数之和/3×滴数×稀释倍数，计算出每克内容物乳酸菌，计算出n log10的均值，进行统计分析。

1.6 数据处理与分析

采用SAS8.0统计软件ANOVA ONE-WAY过程进行单因素的方差分析，LSD式多重比较。

2 结果与分析

2.1 海洋低温蛋白酶MP对肉鸡生产性能的影响

从表4可以看出，日粮中加入中高剂量海洋低温蛋白酶MP明显提高肉仔鸡生产性能。

2.2 海洋低温蛋白酶MP对肉鸡体重的影响

从表5可以看出，试验组2周时差异不显著（P＞0.05），4周时则提高3.85%,差异显著（P＜0.05），6周时则提高 3.63%，差异显著（P＜0.05）。

2.3 海洋低温蛋白酶MP对肉鸡NDHI效价的影响

从表6可以看出，试验组与对照组ND HI抗体效价无差异（P＞0.05）。

2.4 海洋低温蛋白酶MP对肉鸡只均耗料量、料肉比的影响

从表7可以看出，头1周、第2周以及3～6周只均耗料试验组与对照组间均无差异（P＞0.05）；成活率也差异不显著（P＞0.05）；而料肉比提高2.65%，差异显著（P＜0.05）。

2.5 海洋低温蛋白酶MP对肉鸡免疫器官指数的影响

从表8可看出，试验组比对照组脾脏指数21d提高1.88%，差异显著（P＞0.05）；35d则为2.2%，差异显著（P＞0.05）；42d则为1.91%，差异显著（P＞0.05）。而胸腺指数21d提高5.5%，差异极显著（P＜0.01）；35d则 2.51%，差异显著 （P＞0.05）；42d则7.06%，差异极显著（P＜0.01）。法氏囊指数两者间差异不显著（P＞0.05）。

表4 海洋低温蛋白酶MP对35d肉仔鸡生产性能的影响

表5 各组试验鸡只均体重

表7 各组试验鸡只均耗料量和饲料增重比

表8 肉仔鸡免疫器官指数

表9 肉仔鸡肠道中乳酸杆菌的数量

2.6 海洋低温蛋白酶MP对肠道乳酸杆菌数量的影响

从表9可以看出，试验组与对照组在21d乳酸杆菌的数量差异不显著（P＞0.05）；35d则差异显著（P＜0.05）；42d则差异不显著（P＞0.05）；只有处理2与其差异显著（P＜0.05）。

3 讨论与结论

通过本试验，可以看出，海洋低温蛋白酶MP能提高肉仔鸡的体重3.53%，饲料转化率2.66%。机体免疫力与抵抗力方面，脾脏指数提高2%，胸腺指数提高4.8%，法氏囊指数变化不大，具有良好的推广应用价值。

试验组与对照组新城疫HI抗体水平无差异而言，与测定的法氏囊指数两者间无差异相统一，因为法氏囊主要参与机体的体液免疫，这与免疫学是一致的。对于不同酶源而言，对不同的原料底物、动物品种及不同生理阶段，其潜在的营养价值不同，因此，应进一步研究不同畜禽饲料中添加酶制剂的最佳种类和添加量，确定酶制剂的营养当量，建立体外酶活性和实际添加效果间的模型，从而充分地应用酶制剂的潜力，达到降低生产成本、提高经济效益及节约饲料资源的目的。

当今世上是发展低碳经济和加强环保工作，减轻畜牧生产对环境污染的现代化养殖业是以大规模集约化生产为基本特征的，对环境的污染日趋严重，如氮、磷造成的水体富营养化问题，中国的养殖污染在环保问题上占有很大的比重。在饲料中添加酶制剂，如蛋白酶和植酸酶等，可以降低养殖中氮、磷和其他元素的排泄量，有利于环境保护。

蛋白酶可以改善饲料利用率，又提高畜禽生产性能。饲用酶制剂可以在动物的消化道内，将饲料中的大分子物质水解为易吸收的小分子物质，降低营养物质在粪便中的排出量，即对内源酶起辅助补充作用。在幼龄动物消化酶发育不完善，年老动物消化酶分泌能力降低以及受到应激或疾病感染后的动物引起消化酶分泌紊乱等情况下，外源消化酶可补充内源酶的不足，增强动物对饲料养分的消化吸收能力，从而提畜禽产的生产力和饲料转化效率。Bedford和Pack的研究表明，含有淀粉酶、木聚糖酶和蛋白酶的复合酶对玉米-豆粕型日粮营养价值有一定作用，可提高其中玉米的可利用能3%～5%。肠道中的乳酸杆菌的数量在35d时有所增加，而42d则差异不显著，该酶能降低鸡肠道内提高乳酸杆菌的数量，而相应抑制大肠杆菌的数量，35日龄鸡的肠道杆菌数量明显高于对照组，说明海洋低温蛋白酶能够有效调节鸡肠道内大肠杆菌和乳酸杆菌的数量，使之达到平衡。酶制剂的应用已经引起养殖业和工业企业的高度重视，尤其现在的低碳环保经济，可以作为环保型饲料添加剂。

S831.4

A

1008-3847(2011)06-0002-04

国家“863”计划项目(2007AA091602)资助

庄志伟（1968-），男，博士研究生，主要从事畜禽养殖和海洋产物资源与酶工程研究。Email：zzw19680@163.com

* 通讯作者：孙 谧（1962-），研究员。Email∶sumi@ysfri.ac.cn，Tel∶(0532)85833961

董泽敏