盐酸巴尼地平β-环糊精包合物的制备

李艳

(华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部，武汉 430030)

高血压用药的研制一直是新药开发的重点和热点，钙离子阻滞药是公认的重要一线抗高血压药，其中二氢吡啶类钙拮抗剂因其降压疗效和降压幅度相对较强，而疗效个体差异较小，近年来得到快速发展。盐酸巴尼地平(barnidipine hydrochloride，BN)是新型长效二氢吡啶类钙离子拮抗剂，由于该药水溶性差，脂溶性强，首关效应较明显，口服生物利用度低，从而大大影响了疗效［1］。目前市场上剂型比较单一，只有胶囊和片剂，因此开发新型药物给药系统是研究的关键。环糊精包合技术在药剂学中应用日益广泛，能增加难溶性药物的溶解度，笔者拟通过采用 β-环糊精(βcyclodextrin，β-CD)包合技术［2］，对 BN-β-CD 包合物的制备工艺进行优化，确定最佳制备工艺条件，并对制得的包合物进行鉴定和溶出度测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 DF-101T型集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限责任公司)，SHZ-E-14小型循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)，UV-754型紫外可见分光光度计(上海分析仪器厂)，Diamond DSC(美国 Perkin Elmer公司)，VERTEX70傅立叶变换显微红外/拉曼光谱仪(德国Bruker公司)，RC806型智能药物溶出仪(北京中西泰安技术服务有限公司)。

1.2 试药 盐酸巴尼地平原料药(含量99.86%，武汉福鑫化工有限公司，批号:20100806)，β-CD(含量99.58%，武汉远河化工股份有限公司，批号:20100612)，甲醇(色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 包合物药物含量的测定

2.1.1 测定波长的选择 精密称取盐酸巴尼地平对照品适量，加入10%甲醇水溶液，配制成一定浓度的盐酸巴尼地平溶液，在200～400 nm波长范围进行扫描，结果表明盐酸巴尼地平在355 nm处有强吸收峰，辅料β-CD在此波长无吸收。因此确定355 nm为测定波长。

2.1.2 标准曲线的绘制 精密称取盐酸巴尼地平对照品5 mg，置于50 mL的棕色量瓶中，加入甲醇5 mL使之完全溶解后，纯化水定容，即得盐酸巴尼地平贮备液。分别精密吸取贮备液 0.2，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置于10 mL棕色量瓶中，加水定容至刻度，盐酸巴尼地平浓度分别为 2.0，10.0，20.0，30.0，40.0，50.0 μg·mL-1的 水溶液。以纯化水作空白对照，在波长355 nm处测其吸光度(A)，以浓度(C)对A做线性回归，得标准曲线方程为 A=0.013 2C+0.015，r=0.999 9。表明盐酸巴尼地平在 2.0 ～ 50.0 μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.1.3 回收率实验 分别称取处方量的盐酸巴尼地平和β-CD，溶解在混合溶剂(10%甲醇)中，得低、中、高 3 个浓度(2.00，25.00，48.00 μg·mL-1)的盐酸巴尼地平溶液，每个浓度平行3份，按“标准曲线的绘制”项下方法测定，求得浓度与实际浓度相比得到相对回收率。低、中、高浓度的回收率分别为99.3%，101.8% 和 100.5%，RSD 分别为 0.08%，0.12% 和0.15%(n=5)。

2.1.4 精密度实验 分别配制低、中、高三个浓度(2.00，25.00，48.00 μg·mL-1)的盐酸巴尼地平溶液，分别测定日内及日间精密度。测得日内精密度RSD分别为1.51%，0.96% 和 0.88%(n=5)，日间精密度RSD 分别为 1.78%，1.02%和 0.81%(n=5)。

2.2 载药量和包合率的测定 精密称量制备的包合物冻干粉(约50 mg)置于25 mL的量瓶中，用纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀。取上述溶液5 mL，0.22μm微孔滤膜过滤，精密吸取续滤液，用纯化水稀释一定倍数，作为供试品溶液。以含处方量的辅料溶液为空白，按“标准曲线的绘制”项下方法测定，代入标准曲线计算盐酸巴尼地平的含量(W包)。包合物的包合率和载药量按照下列公式计算:包合率(%)=W包/W投×100%，载药量(%)=W包/W总×100%，W总表示称量的包合物质量，W投表示盐酸巴尼地平的投入量。

2.3 包合物的制备 根据相关文献［3-7］，采用饱和水溶液法制备BN-β-CD包合物。步骤如下:精密称取适量β-CD加纯化水置于烧杯中，加热溶解，制成饱和溶液。将盐酸巴尼地平缓慢加入饱和的β-CD溶液中，恒温搅拌一定时间后，取出，置冰箱中冷藏24 h，抽滤分离包合物，置真空干燥器中干燥24 h，即得BN-β-CD包合物。

2.4 正交实验设计 根据前期预实验结果，影响BN-β-CD包合物制备的主要因素有:盐酸巴尼地平与β-CD的投料摩尔比(A)，搅拌速度(B)、包合温度(C)和包合时间(D)。按照L9(34)正交实验设计方案，对载药量和包合率加权综合评分，赋予包合物载药量的权重因子为0.7，包合率为0.3进行综合评分计算。将包合物载药量中最大值(18.31)设定为100，包合率中最大值(80.81)设定为100，计算公式为:Y=(Y1+100－18.02619)×0.7+(Y2+100-81.34055)×0.3。因素水平表结果见表1，正交实验结果见表2。

表1 正交实验因素水平表Tab.1 Factors and levels of orthogonal experiment

表2 正交实验结果Tab.2 Results of orthogonal experiment

表3 方差分析结果Tab.3 Results of ANOVA

由正交实验表结果可知，A、C为主要影响因素，最佳制备工艺为A2B3C3D2，即盐酸巴尼地平与β-CD的投料摩尔比为1:2，搅拌速度为200 r·min-1，包合温度为70℃，包合时间为2 h。由方差分析结果可知，因素A(主客分子投料摩尔比)对包合物的载药量和包合率有显著性影响(P＜0.05)。

2.4 验证性实验 根据最佳工艺处方，采用饱和水溶液法制备BN-β-CD包合物样品3批，依法测定包合物的包合率和载药量，考察制备工艺的重现性。3批样品的平均包合率80.57%，RSD=0.92%;平均载药量为17.66%，RSD=0.67%，结果表明该制备工艺重现性好，稳定可行。

2.5 包合物的确证

2.5.1 红外光谱测定 采用溴化钾压片法，对BN原料药、β-CD，BN-β-CD 包合物、BN 和 β-CD 的物理混合物分别进行红外光谱测定。由光谱图可知，BN物理混合物的图谱基本为BN与β-CD两组份图谱的叠加，在1 696 cm-1有强羰基吸收峰，而在BN-β-CD包合物的图谱中，1 696 cm-1处的羰基峰完全消失，说明BN分子已经被包埋于β-CD的空腔内，形成新的物相。

2.5.2 差示扫描量热法(differential scanning calorimetry，DSC) 将 β-CD、BN 原料药、BN-β-CD 包合物及物理混合物置于空铝坩埚样品池中进行扫描，结果BN约235出现一个尖锐的熔融峰，在物理混合物的DSC图谱中，该峰仍然存在，而在BN-β-CD包合物的DSC图谱中，该峰消失，与药物的图谱有明显的差异，说明β-CD已经包合药物。

2.5.3 溶出度的测定 精密称取一定量的BN以及相应含药量的物理混合物、BN-β-CD包合物各3份，根据《中华人民共和国药典》2010年版二部附录溶出度浆法测定溶出度，分别考察了水、0.1 ol·L-1盐酸和pH 6.8的磷酸盐缓冲液的 BN-β-CD包合物溶出情况，结果表明:BN-β-CD 包合物在水中和0.1 ol·L-1盐酸中溶出较好，溶出结果相似，笔者在本研究选择最常用的纯化水作为溶出介质。测定条件为:溶出介质为经脱气处理的纯化水 900mL，调节转速为100 r·min-1，水温恒定在(37.0±0.5)℃，于 5，10，15，20，30，45，60，90，120，180 min 取样 5 mL，经 0.22μm微孔滤膜过滤后，弃去初虑液，取续滤液做为供试品，在自取样至滤过均须在30 s内完成，同时立即补加同温等量的溶出介质5 mL。样液于分光光度计测定A值，代入标准曲线计算浓度，累积溶出百分率(%)=(已溶出的 BN的量/样品中药物的实际含量)×100%。实验结果表明，药物BN在180 min内仅溶出15.56%，BN与β-CD物理混合物在水中的溶出度为32.60%，该结果表明β-CD对药物BN具有一定的增溶作用。而包合物在15 min能溶出98.52%，溶出速率得到显著提高。

3 讨论

笔者在本研究利用正交实验设计，采用饱和水溶液法优化盐酸巴尼地平β-CD包合物的制备工艺，得出最佳工艺条件为:即盐酸巴尼地平与β-CD的投料摩尔比为1∶2，搅拌速度为200 r·min-1，包合温度为70℃，包合时间为2 h。同时对包合物物相进行了鉴定，红外光图谱证实在包合物的形成的过程中，β-CD与盐酸巴尼地平发生了作用，形成了新的物相。同时，示差扫描量热法也验证β-CD包合了药物盐酸巴尼地平。为了进一步考察盐酸巴尼地平经β-CD包合后，对盐酸巴尼地平溶出行为的影响。本研究平行测定原料药、包合物和物理混合物的溶出速率。结果表明，药物BN在180 min内仅溶出15.56%，物理混合物在水中的溶出度为32.60%，而包合物在15 min能溶出98.52%，结果表明β-CD对药物BN具有一定的增溶作用，而制备的包合物溶出速率显著提高。

目前，盐酸巴尼地平只有胶囊和片剂上市，剂型比较单一，国内有关盐酸巴尼地平新型给药系统开发报道也不多［8］，笔者拟以提高盐酸巴尼地平的溶解度和溶出速率为目的，为盐酸巴尼地平新制剂的开发提供一定的思路和基础。

［1］LIAU C S.Barnidipine:a new calcium channel blocker for hypertension treatment［J］.Expert Rev Cardiovasc Ther，2005，3(2):207－213.

［2］陆彬.药物新剂型与新技术［M］.2版.北京:人民卫生出版社，1998:36－40.

［3］陈寅生，陈洪轩，马莉.吡罗昔康-β-环糊精包合物的制备研究［J］.中国药业，2008，17(15):49－50.

［4］廖昌军，吴敏，尤思路，等.岩白菜素β－环糊精包合物的制备［J］.医药导报，2010，29(10):1337－1339.

［5］管清香，林天慕，丁志英，等.尼群地平-β-环糊精包合物的制备［J］.吉林大学学报:医学版，2005，31(5):811－813.

［6］李菲，郝吉福，王建筑，等.吲哚美辛-β-环糊精包合物制备工艺优化［J］.医药导报，2010，29(3):350－352.

［7］张梨，谭群友，陈亮，等.溴吡斯的明－β－环糊精包合物的研制［J］.中国医院药学杂志，2010，30(6):466－470.

［8］何艳，李高，吴笑春，等.星点设计-效应面法优化盐酸巴尼地平自微乳化释药系统［J］.中国药师，2010，13(1):11－13.