吲哚-2,3-二酮抗阴道炎研究*

毛晓红 牟群芳 徐 敏 王 珏 张婷婷 张继国

(1. 河北医科大学第一医院，河北 石家庄 050031； 2.青岛大学医学院，山东 青岛 266021；3.泰山医学院，山东 泰安 271016)

吲哚-2,3-二酮是来自于龙虾并维持其生存所必需的一种天然海洋活性物质，现已证明也是存在于海洋生物、中药青黛和人体内的天然活性物质[1]。吲哚-2,3-二酮是成分单一的紫红色有机天然物质，化学结构明确，其单体己可合成。研究表明，作为一种结构明确的天然海洋活性物质，吲哚-2,3-二酮具有抗病毒[2,3]、抗真菌[4]、抗肿瘤[5]、抗炎和免疫调节作用[6]且毒性较小[7]，阴道炎是妇科常见病，白色念珠菌也是感染源之一，为开发其新的药用价值，对吲哚-2,3-二酮用于制备治疗阴道炎外用制剂进行研究。

1 材料与方法

1.1试剂和仪器 吲哚-2,3-二酮明胶栓剂：由青岛医学院药理组提供。双唑泰栓：双唑泰栓由锦州市制药五厂生产，主要成分：克霉唑、甲硝唑、醋酸氯已定。

1.2实验动物 雌性SD大鼠100只，体重160～180 g,未交配，由青岛市药检所实验动物中心提供，置于室温(19±2)℃,24小时昼夜循环光照条件下生活，自由饮水及进食，于实验前适应实验室1周。

1.3实验方法

1.3.1造模 将50只大鼠从阴道口注入浓度为5.6×107/ml的白色念珠菌液0.1 ml，每天1次，连续2次，10 d后取大鼠阴道分泌物做菌培养，培养出现阳性结果即表明真菌性阴道炎造模成功。按同样的方法，将浓度为5×108/ml脆弱拟杆菌液0.1 ml注入其余50只大鼠阴道内，连续2次，10 d后取大鼠阴道分泌物做菌培养，细菌培养阳性，说明厌氧菌性阴道炎造模成功。

1.3.2给药，结果统计 将40只感染白色念珠菌大鼠随机分成5组，每组8只，设置不给药的模型组、阳性对照组(双唑泰栓剂，每天阴道塞入含50 mg/kg的栓剂，连续7d)和吲哚-2,3-二酮明胶栓剂高、中、低剂量组(剂量分别为50，25，10 mg/kg，每天阴道塞入受试栓剂1次，连续7 d)，各组动物分别在给药前，给药后4 d、8 d取阴道分泌物，然后置沙氏培养基上培养，进行菌落计数。

取40只脆弱拟杆菌感染SD大鼠模型，用上述方法以相同分组、剂量给药、相同时间取阴道分泌物在厌氧菌专用培养基上培养，置37℃厌氧箱内培养48 h，做菌落计数。

根据菌落数和阴道分泌物的多少进行量化评分，再根据评分进行治疗效果的评价。菌落数(CFU/ml)小于5，计为0分；菌落数在5～10之间，计为1分；菌落数在10～100之间，计为2分；菌落数在100～1000之间，计为3分；菌落数大于1000，计为4分。阴道分泌物极少、正常，计为0分；阴道分泌物明显减少、基质样粘稠，计为1分；阴道分泌物脓样、粘稠，计为2分；阴道分泌物较多，采脓样性分泌物，计为3分。各实验组给药结束以后取阴道组织置10%甲醛中固定，石蜡切片，HE染色，光镜下观察。

1.4统计学处理 数据采用单因素方差分析，用SPSS17.0统计软件进行统计处理。

2 结 果

高、中、低剂量组吲哚-2,3-二酮明胶栓剂对白色念珠菌、脆弱拟杆菌感染的菌落计数疗效均优于模型对照组，给药后4 d显效，8 d菌落数继续下降(P<0.01或P<0.05)；高、中、低剂量组吲哚-2,3-二酮明胶栓剂对白色念珠菌、脆弱拟杆菌感染的阴道分泌物计数疗效均优于模型对照组，给药后4 d显效，8 d分泌物继续减少(P<0.01或P<0.05)。见表1，2。

白色念珠菌阴道炎和脆弱拟杆菌阴道炎模型经过治疗后阴道组织病理学检查结果显示：模型组阴道壁三层结构完好，粘膜下层、肌层见多量散在广泛分布的中性粒细胞、单核细胞浸润，细小血管扩张充血，粘膜下层疏松水肿。吲哚-2,3-二酮明胶栓剂高剂量组阴道三层结构完整，粘膜下层、肌层见少量炎细胞浸润，细小血管轻度扩张充血，中、小剂量组粘膜下层、肌层见中量中性白细胞、单核细胞等浸润，细小血管扩张充血。双唑泰栓阳性对照组阴道壁结构完整，粘膜下层见少许中性白细胞、单核细胞浸润。此结果表明双唑泰栓阳性药与吲哚-2,3-二酮明胶栓剂治疗实验性阴道炎后，感染炎症显著好转，与给药前相比病变明显减轻。

表1 吲哚-2,3-二酮明胶栓剂对大鼠实验性阴道炎分泌物菌落的影响

注：与模型组比较，*P<0．05，**P<0．01。

表2 吲哚-2,3-二酮明胶栓剂治疗大鼠实验性阴道炎对其分泌物的影响

注：与模型组比较，*P<0．05，**P<0．01。

3 讨 论

阴道炎是常见的妇科疾病，为女性阴道及其周围的结缔组织发生炎症的一类疾病，主要表现为外阴搔痒，阴道分泌物增多，发病率高，且易反复发作，其发病机制涉及真菌、病毒、感染、免疫低下，或在妇科小手术和计划生育手术中无菌操作观念淡漠等原因，使阴道炎的发病率增高。临床上阴道炎的治疗现多采用局部或全身使用抗菌消炎药的方法，我们已知临床长期使用抗菌消炎药等西药，可引起阴道的菌群失调，而炎症及其继发炎性反应并未得到有效的控制，且毒副作用较大，并可能损害卵细胞和生殖健康。天然产物毒性小，从中筛选并制定出抗阴道炎的药物研究，可能是解决阴道炎疾病的重要途径。

现已证明，吲哚-2,3-二酮不仅存在于海洋生物中，也存在于清热解毒中药大青叶、板蓝根、青黛中和人尿中[9]，研究已经证实了吲哚-2,3-二酮的毒性低，具有保护神经、抗病毒[2-3]、抗真菌[4]、抗肿瘤[5]、抗炎和免疫调节[6]等作用，在离体和活体证明了其抗衰老、抗氧化作用机制等活性，对吲哚-2,3-二酮的进行动物急性、慢性毒理实验，结果证实吲哚-2,3-二酮长期大量口服用药，对动物无明显损害，未发现因蓄积而对机体产生的毒性反应，是一种安全可靠的药物[7,9]。

本研究结果表明，吲哚-2,3-二酮明胶栓剂对大鼠白色念珠菌和脆弱拟杆菌造成的实验性阴道炎具有治疗作用，为开发天然低毒的控制阴道炎药物提供了实验基础。

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