斑蝥炮制前后脂肪酸成分的GC-MS分析Δ

刘沁，陈建伟，武露凌，李祥

（1.南京中医药大学药学院，南京市 210046；2.江苏省中药炮制重点实验室，南京市 210029；3.江苏省体育科学研究所，南京市 210014）

斑蝥炮制前后脂肪酸成分的GC-MS分析Δ

刘沁1＊，陈建伟1，2#，武露凌3，李祥1，2

（1.南京中医药大学药学院，南京市 210046；2.江苏省中药炮制重点实验室，南京市 210029；3.江苏省体育科学研究所，南京市 210014）

目的：分析斑蝥炮制前后脂肪酸组成。方法：石油醚提取斑蝥脂肪油，甲酯化处理后采用气相色谱-质谱联用技术分析化合物组成，用峰面积归一化法确定各成分相对含量。结果：从炮制前后的斑蝥脂肪油中共分离鉴定出10种脂肪酸成分，脂肪酸组成以油酸、硬脂酸、亚油酸为主。结论：炮制对斑蝥脂肪酸组成影响不大。本试验可为斑蝥炮制前后的成分研究提供理论依据。

斑蝥；炮制；脂肪酸；气相色谱-质谱联用技术

斑蝥（Mylabris）为昆虫纲鞘翅目芫菁科昆虫南方大斑蝥Mylabris phalerataPallas或黄黑小斑蝥Mylabris cichoriiLinnaeus的干燥体，为临床常用中药[1]。斑蝥具有破血消蝥、攻毒蚀疮、引赤发泡的功效，近年来广泛用于肿瘤病、肝炎及皮肤病的治疗。其临床上内服需经米炒炮制。现代研究证明，斑蝥的主要化学成分为斑蝥素（Cantharidin，C10H12O4），此外尚含脂肪、多种微量元素及蚁酸等。目前，斑蝥化学成分的研究主要集中在斑蝥素含量测定及其衍生物的合成上，本课题组曾报道斑蝥的种属药用资源、南方大斑蝥化学成分及其不同产地化学成分比较[2～4]。本文首次对斑蝥炮制前后脂肪酸成分进行气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）分析鉴定，观察炮制前后成分变化情况，以为斑蝥脂肪油资源合理开发应用提供试验依据。

1 仪器与试药

HP6890GC/5973MS气-质联用仪、HP 7683自动进样器（美国惠普公司）；AY220电子天平（日本岛津公司）。

石油醚（30～60℃）、氢氧化钠、甲醇、三氟化硼-乙醚溶液、甲醇、正己烷、氯化钠等均为分析纯，水为去离子蒸馏水；生斑蝥购自湖北，经南京中医药大学药学院陈建伟教授鉴定为南方大斑蝥M.phalerataPallas的干燥体；炒斑蝥按《中国药典》斑蝥炮制项下[1]方法自制，经含量测定符合标准。生品与米炒品药材于60℃烘干粉碎，过100目筛，置干燥器中备用。

2 方法与结果

2.1 脂肪油的制备

精密称定生、炒斑蝥粉末各5.0g，置于索氏提取器中，适量石油醚50℃水浴回流提取6h，减压回收溶剂至干，低温烘干至恒重，得斑蝥油脂。生、炒品得率分别为18.6%、23.0%。

2.2 脂肪油的甲酯化[5]

取上述2种脂肪油各0.1g，精密称定。加入0.5mol·L-1氢氧化钠-甲醇溶液4mL，置60℃水浴皂化至油珠完全消失，加入14%三氟化硼-甲醇5mL，继续水浴5min，加入正己烷2mL，冷却后加入饱和氯化钠溶液20mL，分液漏斗萃取，取上清液适量离心，过0.45μm滤膜，取续滤液备用。

2.3 分析条件

2.3.1 GC条件 色谱柱：HP-5（5%PH ME Silloxane，30m×0.25mm×0.25μm）；载气：高纯He（99.99%）；流速：1.0mL·min-1；进样口温度：270℃；程序升温：初始温度100℃，以10℃·min-1升至180℃，保持10min，再以2℃·min-1升至220℃，以10℃·min-1升至260℃；分流比：50∶1，进样量：1μL。2.3.2MS条件 离子源（EI）温度：230℃；四级杆温度：150℃；倍增电压：1424V；电子能量：70eV；接口温度：290℃；溶剂延迟时间：2min；扫描范围：50～550amu。

2.4 结果

按照上述测定条件，得到生、炒斑蝥脂肪油中脂肪酸的总离子流图。斑蝥GC-MS总离子流色谱见图1。

图1 斑蝥GC-MS总离子流色谱图A.生斑蝥；B.炒斑蝥Fig1 Total ion chromatogram of Mylabris by GC-MSA.pre-processed Mylabris；B.post-processed Mylabris

各色谱峰相应的MS图经人工解析及NIST 02MS库检索定性，并根据数据处理系统对色谱峰的峰面积进行归一化处理。斑蝥脂肪酸GC-MS分析结果见表1。

由表1可知，斑蝥炮制前、后脂肪酸种类与相对含量均未发生明显变化，生品和米炒品中共分离鉴定出10种脂肪酸，分别占总提物含量的95.18%、97.87%，其余组分为柱流失。其中饱和脂肪酸7种，分别占脂肪酸总含量的32.75%、32.73%，以棕榈酸、硬脂酸、花生酸为主；不饱和脂肪酸3种，分别占脂肪酸总含量的67.25%、67.27%，为油酸、亚油酸和棕榈油酸，其中油酸含量高达50%左右。

表1 斑蝥脂肪酸GC-MS分析结果Tab1 GC-MS analysis of the fatty acids from Mylabris

3 讨论

脂肪酸的沸点高、极性强，一般需经甲酯化衍生后进样。甲酯化方法有多种，本试验所使用的三氟化硼法为2009年国家标准（GB-T17376-2008）方法，此法能利用快速皂化使脂肪酸盐直接转化为脂肪酸甲酯，减少酸化提取手续，并且可以防止常规皂化时所引起的异构化，提高了试验的稳定性。试验中还考察了衍生化试剂的量以及衍生化时间对结果的影响，最终确定了甲酯化的条件。

本试验斑蝥脂肪油样品浓度均为10mg·mL-1，从GC-MS分析结果看出，炮制对斑蝥中脂肪酸组成影响不大；另一方面也表明辅料米在炮制过程中并未起到吸附油脂的作用，与文献[6]报道一致。

现代研究表明，不饱和脂肪酸具有降血脂、降血压、软化血管、促进免疫以及抗炎、抗肿瘤等生理活性[7]。斑蝥中不饱和脂肪酸的含量高达60%以上，并存在着自然界中较为少见的奇数碳链脂肪酸（C17∶0、C19∶0）。有报道表明，奇数碳链脂肪酸有较强的抗癌活性[8]。有关斑蝥中脂肪油是否具有抗癌活性尚待进一步研究。

很多昆虫中脂肪酸比例十分趋近于营养学推荐比例标准，具有较合理的脂肪酸组成，有很高的营养价值。斑蝥富含脂肪酸，作为斑蝥药材提取斑蝥素的副产物可加以开发利用。

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：311.

[2] 张建辉，陈建伟，李 祥.斑蝥及其近缘种属药用资源研究进展[J].中国中药杂志，2009，34（6）：647.

[3] 张建辉，陈建伟，武露凌，等.南方大斑蝥酸水解-丙酮提取物成分的GC/MS分析[J].中国药房，2009，20（30）：2363.

[4] 张建辉，陈建伟，许金国，等.不同产地南方大斑蝥水解产物化学成分的比较分析[J].天然产物研究与开发，2009，21（3）：449.

[5] GB/T 17376-2008，动植物油脂脂肪酸甲酯制备[S].

[6] 王正益，张振凌，田志圣，等.斑蝥烘法新工艺刍探[J].中药通报，1986，11（7）：406.

[7] 毛 峰，秦振华.长链多不饱和脂肪酸与人体健康[J].中国医药导报，2006，3（3）：40.

[8] Hou CT，Shaw Jei-Fu.Biocatalysis and Agricultural Biotechnology[M].New York：CRC Press，2009：260.

GC-MS Analysis of Fatty Acids fromMylabrisbefore and after Processing

LIU Qin，CHEN Jian-wei，LI Xiang
（College of Pharmacy，Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Nanjing 210046，China）
CHEN Jian-wei，LI Xiang
（Jiangsu Key Laboratory for Chinese Materia Medica Processing，Nanjing 210029，China）
WU Lu-ling
（Jiangsu Institute of Sports Science Research，Nanjing 210014，China）

OBJECTIVE：To analyze the chemical constituents of the fatty acids fromMylabrisbefore and after processing.METHODS：The fatty oil ofMylabriswas extracted by petroleum ether and analyzed by GC-MS after methyl esterifying.The content of chemical components was determined by peak area normalization method.RESULTS：10kinds of fatty acid were isolated from preprocessedMylabrisfatty oil and processedMylabrisfatty oil.Main chemical constituents of fatty acid were oleic acid，oleic acid and linoleic acid.CONCLUSION：Processing has little effect onMylabrisfatty acid composition.The study provides theoretical basis for chemical constituent study ofMylabrisbefore and after processing.

Mylabris；Processing；Fatty acids；GC-MS

R284.1；R931.74

A

1001-0408（2011）19-1788-02

Δ江苏省中药炮制重点实验室开放式课题（ZYPZ006）；江苏省高校自然科学研究计划项目（02KJB360004）

＊硕士研究生。研究方向：中药活性成分与品质评价。E-mail：liuqin_sy@126.com

#通讯作者：教授，博士研究生导师。研究方向：中药活性成分与品质评价。电话：025-85811695。E-mail：chenjw695@126.com

2010-07-02

2010-09-15）