RP-HPLC法测定复方酪萨维口腔速崩片中酪萨维和红景天苷的含量Δ

周晓明，姚敏娜，曹金一，丁愉，赵美，汤海峰#

（1.第四军医大学西京医院药剂科，西安市 710032；2.解放军第 94162部队，西安市 710614）

RP-HPLC法测定复方酪萨维口腔速崩片中酪萨维和红景天苷的含量Δ

周晓明1，2＊，姚敏娜1，曹金一1，丁愉1，赵美1，汤海峰1#

（1.第四军医大学西京医院药剂科，西安市 710032；2.解放军第 94162部队，西安市 710614）

目的：建立测定复方酪萨维口腔速崩片中酪萨维和红景天苷含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Agilent TC-C18（250mm×4.6mm，5μm），流动相分别为0.2%磷酸溶液-乙腈＝86∶14（酪萨维）、甲醇-水＝15∶85（红景天苷），柱温为35℃，流速为1.0mL·min-1，检测波长分别为254nm（酪萨维）、275nm（红景天苷）。结果：酪萨维和红景天苷进样量的线性范围分别为0.08～1.60μg（r＝0.9998）、0.80～8.00μg（r＝0.9993）；平均加样回收率分别为100.22%（RSD＝1.58%，n＝6）、99.37%（RSD＝1.35%，n＝6）。结论：本方法操作简便、结果准确、专属性强、重复性好，可用于复方酪萨维口腔速崩片的质量控制。

复方酪萨维口腔速崩片；酪萨维；红景天苷；反相高效液相色谱法；含量测定

景天科红景天属（Rhodiola）为多年生草本或亚灌木植物，全世界共有90多种，其中我国约70余种[1]。国内、外研究表明，红景天具有抗缺氧、抗疲劳、抗辐射、抗衰老及增强脑力、体力机能等方面的特殊功效[2，3]，其抗缺氧、抗疲劳作用已通过大量实验证实和临床验证。其主要有效成分是苯乙基苷类的红景天苷（Salidroside）及其苷元酪醇，因此目前红景天药材及其制剂均将红景天苷作为质控指标，并以它的含量来区分药材优劣。但本属的蔷薇红景天不仅具有优于其他红景天品种的抗疲劳和抗缺氧作用，还具有独特的双向调节功效。酪萨维（Rosavin）为蔷薇红景天中的特有成分，因此推断其显著的药效和独特的双向调节功效可能与酪萨维有关[4]。目前开发的红景天制剂多为胶囊剂、片剂、口服液等口服剂型，均具有起效慢、携带不便等缺点，不能适应突发应急的需要。笔者经过反复试验，最终以蔷薇红景天提取物为主药，配以冰片、低取代羟丙基纤维素等辅料，采用粉末直接压片技术，研制了复方酪萨维口腔速崩片，这种技术在红景天制剂中首次应用。笔者以酪萨维和红景天苷为指标，采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定复方酪萨维口腔速崩片中这2种成分的含量，以为进一步制定该制剂的质量标准提供试验依据。

1 仪器与试药

LC10A型HPLC仪、SPD10A型紫外检测器（日本岛津公司）；BS110S型电子分析天平（北京赛多利斯天平有限公司）；DL-360A超声波清洗器（上海之信仪器有限公司，功率：200W，频率：40kHz）。

酪萨维（批号：200412）、红景天苷（批号：200404）对照品均购自中国药品生物制品检定所；复方酪萨维口腔速崩片（第四军医大学西京医院药剂科自制，批号：091101、091102、091103）；乙腈为色谱纯，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent TC-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流速：1.0mL·min-1；柱温：35℃；测定酪萨维的流动相为0.2%磷酸溶液-乙腈（86∶14），检测波长为254nm；测定红景天苷的流动相为甲醇-水（15∶85），检测波长为275nm。酪萨维和红景天苷的HPLC分别见图1、图2。

图1 酪萨维的HPLC图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；a.酪萨维Fig1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；C.negative control；a.rosavin

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取酪萨维对照品4mg，用甲醇定容于50mL容量瓶中，加入甲醇超声溶解，放冷至室温，定容，制成0.08mg·mL-1的酪萨维对照品溶液。另精密称取红景天苷对照品4mg，置10mL容量瓶中，加入甲醇超声溶解，放冷至室温，定容，制成0.4mg·mL-1的红景天苷对照品溶液。

图2 红景天苷的HPLC图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；a.红景天苷Fig2 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；C.negative control；a.rosavin

2.2.2 供试品溶液 取本品5片（片重为0.6g），精密称定，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，摇匀，称重，超声处理45min，放冷至室温，称重，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得酪萨维的供试品溶液。另取本品10片（片重为0.6g），精密称定，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，摇匀，称重，超声处理30min，放冷至室温，称重，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得红景天苷的供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液 取不含蔷薇红景天提取物处方同法制备的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 精密称取酪萨维对照品8mg，用甲醇定容于50mL容量瓶中，分别精密移取该溶液0.5、2、4、6、8、10mL，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得浓度分别为8、32、64、96、128、160μg·mL-1的对照品溶液。按上述色谱条件分别进样10μL，测定峰面积。以进样量（X，μg）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，制备标准曲线，得酪萨维的回归方程为Y＝574697X+9680.8（r＝0.9998，n＝6）。结果表明，酪萨维进样量在0.08～1.60μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。另精密称取红景天苷对照品20mg，用甲醇定容于25mL容量瓶中，分别精密移取该溶液0.5、1、2、3、4、5mL，置于5mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，分别进样10μL，计算峰面积。以进样量（X，μg）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，制备标准曲线，得红景天苷的回归方程为Y＝468863X+17546（r＝0.9993，n＝6）。结果表明，红景天苷进样量在0.80～8.00μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.3.2 精密度试验 精密吸取酪萨维和红景天苷对照品溶液各10μL，重复进样6次，记录峰面积。结果，二者的RSD分别为0.83%和0.64%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.3.3 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别于制备完成后0、2、4、8、12、24h按上述色谱条件进样10μL，记录酪萨维和红景天苷的峰面积。结果，二者的RSD分别为1.26%和1.65%（n＝6），表明供试品溶液在24h内稳定。

2.3.4 重复性试验 精密称取复方酪萨维口腔速崩片（批号：091102）适量，共6份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样10μL，测定酪萨维和红景天苷的含量。结果，二者的RSD分别为1.10%和1.47%（n＝6），表明方法重复性良好。

2.3.5 加样回收率试验 取同一批复方酪萨维口腔速崩片（批号：091102）适量，共6份，精密称定，分别加入一定量的酪萨维和红景天苷对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述方法测定，计算加样回收率，结果分别见表1、表2。

表1 酪萨维的加样回收率试验结果（n＝6）Tab1 Results of recovery test of rosavin（n＝6）

表2 红景天苷的加样回收率试验结果（n＝6）Tab2 Results of recovery test of salidroside（n＝6）

2.4 样品含量测定

取3个批号的样品，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下分别进样10μL，测定样品中酪萨维和红景天苷的含量，结果见表3。

表3 样品中酪萨维和红景天苷的含量测定结果（n＝3）Tab3 Content determination of rosavin and salidroside in samples（n＝3）

从表3中结果可看出，复方酪萨维口腔速崩片平均每片含酪萨维0.823mg（0.140%），含红景天苷0.390mg（0.065%）。

3 讨论

为了达到口腔速崩制剂所规定的崩解时限与口感要求，笔者在研制复方酪萨维口腔速崩片的过程中加入了多种药用辅料，但在含量测定中，该制剂经过超声法提取后在HPLC图中未出现过多杂质峰，尤其是在检测成分峰周围未见有杂质峰影响，说明这种超声提取的方法适用于此种制剂。

红景天苷为红景天属植物的活性成分，且2010年版《中国药典》[5]规定以红景天苷的含量作为红景天药材的质量控制标准，红景天制剂[6，7]也多采用红景天苷作为含量测定标准。但本制剂中主要原料药为蔷薇红景天提取物，而酪萨维又是其特有的成分，如果仅选用红景天苷的含量作为其质量控制的标准就略显不足，所以笔者将酪萨维和红景天苷的含量测定共同作为复方酪萨维口腔速崩片的质量标准。

试验过程中，笔者一直致力于寻找一种更适合的方法可以同时测定红景天苷和酪萨维2种成分的含量，但由于酪萨维的化学结构中含有更长的共轭结构，紫外吸收有明显的红移，二者没有共同的最大吸收波长，若测定过程中以一种成分的最大吸收波长为检测波长，则另一种成分的吸收峰会很低，不利于测定值的准确；若兼顾二者，采取折中的吸收波长，则会使二者测定值均有所降低；而且2种成分的极性比较大，如果侧重于测定红景天苷的含量，采用其洗脱比例，则酪萨维在此条件下的出峰时间会大大延长，甚至达3h以上，使试验效率降低。虽然梯度洗脱可以解决这一问题，但很多基层单位使用的是单泵液相色谱仪，仪器达不到要求，不利于制剂的常规检验。综合考虑，本试验采用了2种制备方法和液相色谱条件分别测定复方酪萨维口腔速崩片中酪萨维和红景天苷的含量。此种方法操作简便、结果准确、专属性强、重复性好、适用性强，可用于复方酪萨维口腔速崩片的质量控制。

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].第1版.北京：科学出版社，1984：161.

[2] 赵 慧，贾凌云，孙长山，等.RP-HPLC法测定复方红景天片剂中红景天苷的含量[J].沈阳药科大学学报，2005，22（1）：23.

[3] 戚志华，王庆伟，王四旺，等.HPLC法测定不同生长期女贞子中红景天苷的含量[J].中国药房，2010，21（11）：997.

[4] A Panossian，N Nikoyan，N Ohanyan，et al.Comparative study ofRhodiolapreparations on behavioral despair of rats[J].Phytomedicine，2008，15（1-2）：84.

[5] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：144.

[6] 孙成宏，邓虹珠，易延逵.复方红景天片质量标准的研究[J].山西医科大学学报，2009，40（1）：64.

[7] 宋兴发，尚 强，高 山.红景天养生片中红景天苷的含量测定[J].医药导报，2009，28（12）：1629.

Content Determination of Rosavin and Salidroside in Compound Rosavin Rapidly Disintegrating Oral Tablets by RP-HPLC

ZHOU Xiao-ming，YAO Min-na，CAO Jin-yi，DING Yu，ZHAO Mei，TANG Hai-feng
（Dept.of Pharmacy，Xijing Hospital of Fourth Military Medical University，Xi’an 710032，China）
ZHOU Xiao-ming
（No.94162of Chinese People’s Liberation Army，Xi’an 710614，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of rosavin and salidroside in Compound rosavin rapidly disintegrating oral tablets.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The determination was performed on Agilent TC-C18（250mm×4.6mm，5μm）column with mobile phases consisted of 0.2%phosphoric acid-acetonitrile（86∶14）for rosavin and methanol-water（15∶85）for salidroside at flow rate of 1.0mL·min-1.The detection wavelength was set at 254nm and 275nm，and the column temperature was 35℃.RESULTS：The linear ranges of rosavin and salidroside were 0.08～1.60μg（r＝0.9998）and 0.80～8.00μg（r＝0.9993）.The average recoveries were 100.22%（RSD＝1.58%，n＝6）and 99.37%（RSD＝1.35%，n＝6），respectively.CONCLUSION：The method is simple，accurate specific and reproducible，and it is applicable for the quality control of Compound rosavin rapidly disintegrating oral tablets.

Compound rosavin rapidly disintegrating oral tablets；Rosavin；Salidroside；RP-HPLC；Content determination

#通讯作者：教授，博士。研究方向：天然药化和新药研发。电话：029-84775471。E-mail：natprod@163.com

R283.64；R927.2

A

1001-0408（2011）19-1780-03

Δ国家重大新药创制基金专项课题（2009ZXJ09004-082）

＊硕士研究生。研究方向：天然药化和新药研发。电话：029-84775471-8036。E-mail：zhouming820405@gmail.com

2010-11-22

2011-03-14）