金橘胆胃丸质量标准研究

2011-01-24张艳

中国药业 2011年2期

关键词：金橘橙皮木香

张艳

(江苏省连云港药品检验所，江苏连云港 222006)

金橘胆胃丸质量标准研究

张艳

(江苏省连云港药品检验所，江苏连云港 222006)

目的探讨金橘胆胃丸的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别金橘胆胃丸中柴胡、木香、香附，用高效液相色谱法对制剂中橙皮苷进行定量分析。结果薄层色谱图中，供试品溶液色谱在与对照药材溶液色谱相应位置上出现相同颜色的斑点。在选定的色谱条件下，橙皮苷进样质量浓度在19.84～158.72 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好，r=0.999 7，平均回收率为99.45%，RSD为0.64%(n=6)。结论所用方法可靠、准确，专属性强，可有效控制金橘胆胃丸的质量。

金橘胆胃丸;薄层色谱法;高效液相色谱法;质量标准

金橘胆胃丸为连云港中医院制剂，由生鸡内金、橘皮、柴胡、木香、香附等13味中药组方，具有利胆和胃、消食化石的作用，临床上主要用于治疗胆囊炎、慢性胃炎、胆囊结石、肝内外胆管结石等，效果显著。本研究提高并完善了该药的质量标准[1]，增加了柴胡、木香、香附的薄层色谱鉴别和橘皮中橙皮苷的含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪。橙皮苷对照品(批号为110721－200613)、柴胡对照药材(批号为 120992－200504)、木香对照药材(批号为120921－200506)均来自中国药品生物制品检定所;金橘胆胃丸(批号为20091113，由连云港市中医院制剂室提供);薄层层析用硅胶G板;乙腈(色谱纯)，水(重蒸水)，其他试剂(分析纯)。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别(薄层色谱法)

柴胡[2]:取本品3 g，研细，加甲醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，加2%NaOH溶液10 mL，置水浴上加热30 min，放冷，加正丁醇10 mL，振摇提取，分取正丁醇溶液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。按处方配制除去柴胡制成阴性对照品，按照供试品溶液的制备方法制备，作为阴性对照品溶液。吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水(30∶10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加热约5 min。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照品溶液色谱则无此斑点，见图1 A。

木香:取本品3 g，研细，加乙醚30 mL，加热回流30 min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取木香对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。按处方配制除去木香制成阴性对照品，按照供试品溶液的制备方法制备，作为阴性对照品溶液。吸取上述3种溶液各3 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷－丙酮(10∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照品溶液色谱则无此斑点，见图1 B。

图1 薄层色谱图

2.2 含量测定(高效液相色谱法)

2.2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Eclipse XDB C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流速:1.0 mL/min;柱温:25 ℃;流动相:乙腈－0.3%磷酸溶液(17∶83);检测波长:284 nm;进样量:10 μL。在此条件下，色谱图见图2。

2.2.2 溶液制备[3]

精密称取橙皮苷对照品9.92 mg，置 50 mL 量瓶中，用甲醇溶解(必要时超声处理)并定容至刻度，制成质量浓度为 198.4 μg/mL的贮备液;分别精密量取 1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，各置 10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别制成质量浓度为 19.84，39.68，79.36，119.04，158.72 μg/mL 的溶液，即得对照品溶液。取本品适量，研细，取约2 g，精密称定，精密加入甲醇50 mL，称定质量，置水浴上加热回流1 h，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。按处方比例配制缺橘皮的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备，即得阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

标准曲线绘制:分别精密量取2.2.2项下的对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪测定峰面积。以对照品质量浓度(μg)为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，回归方程为Y=27.777+14.803X，r=0.999 7(n=5)。结果表明橙皮苷质量浓度在19.84 ～158.72 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定峰面积。结果的RSD=0.72%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:吸取同一供试品溶液，每隔2 h测定1次，12 h内连续测定6次。结果橙皮苷含量的RSD=0.51%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

图2 高效液相色谱图

重现性试验:取同一批(批号为20091113)样品，按样品含量测定项下方法平行操作6份，依法测定。结果橙皮苷平均含量为4.52 mg/g，RSD=1.1% ，表明方法重现性较好。

加样回收试验:取已知含量的样品6份，每份1 g，分别加入橙皮苷对照品适量，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 橙皮苷加样回收试验结果(n=6)

2.2.4 样品含量测定

取3批不同批号的金橘胆胃丸，依法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品试液10 μL，按拟订的色谱条件测定并计算含量。结果见表2。

3 讨论

2005年版《中国药典(一部)》中，柴胡薄层色谱鉴别中采用的展开剂为乙酸乙酯－乙醇－水(8∶2∶1)，木香采用的展开剂为三氯甲烷－环己烷(5∶1)，对于该制剂，展开速度均较慢，且分离度较小;而柴胡改用三氯甲烷－甲醇－水(30∶10∶1)、木香改用环己烷－丙酮(10∶3)后展开速度快，分离度好。供试品溶液在与对照药材溶液色谱对应位置上显相同颜色的斑点;该制剂在与柴胡对照药材溶液色谱相应的位置上至少显5个相同颜色的斑点，与木香对照药材溶液色谱相应的位置上至少显2个相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰，表明方法可行。

为取得更好的分离效果，对色谱柱和流动相进行了选择，分别比较了 Agilent Eclipse XDB －C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，Lichrospher C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm)，Water C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，发现前一种流动相效果较好。分别比较了流动相乙腈－0.3%磷酸溶液(21 ∶79)[4]、乙腈－0.3%磷酸溶液(19 ∶81)、乙腈－0.3%磷酸溶液(17∶83)、结果发现乙腈－0.3%磷酸溶液(21∶79)未使橙皮苷达到完全分离，乙腈－0.3%磷酸溶液(19∶81)虽使橙皮苷完全分离但效果不是很好，而乙腈－0.3%磷酸溶液(17∶83)能使橙皮苷达到充分完全的基线分离，与其他成分之间也能达到完全的基线分离，且色谱峰形较对称。故选择乙腈－0.3%磷酸溶液(17∶83)为流动相。