HPLC法测定杠板归不同药用部位槲皮素的含量

2011-01-09李元宏杨务彬湖北医药学院附属太和医院药学部十堰市442000

中国药房 2011年39期

李元宏，杨务彬，兰鸿（湖北医药学院附属太和医院药学部，十堰市 442000）

杠板归为蓼科蓼属植物贯叶蓼Polygonum perfoliatum L.的全草，别名蛇倒退、梨头刺、河白草、蛇不过、穿叶蓼等[1]，具有清热解毒、利水消肿的作用，主治水肿、小便不利、痢疾、腹泻、百日咳、痈疖疮毒、皮炎、湿疹、毒蛇咬伤等，是一种具有很高药用价值的传统中草药。在实际应用中，笔者发现其不同药用部位的治疗效果不同，故本文以其主要活性成分槲皮素作为定量指标，采用高效液相色谱（HPLC）法对杠板归不同药用部位槲皮素含量进行测定。

1 仪器与试药

LC-10A型HPLC仪、SPD-10A型紫外检测器（日本岛津公司）；HW-2000型色谱工作站（南京千谱软件有限公司）；FA2004型电子分析天平（上海精科公司）。

槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100081-200406）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯；杠板归采自武当山八仙观3个不同地点，经湖北医药学院生药学教研室陈吉炎教授鉴定为贯叶蓼P.perfoliatum L.。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DiamonsilTMC-18（200 mm×4.6 mm，5 μm），加装Phenomenex保护柱；流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：360 nm[2]；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.槲皮素对照品；B.供试品Fig 1 HPLC chromatogramsA.quercetin control；B.test sample

2.2 对照品溶液的制备

精密称取经真空干燥至恒重的槲皮素对照品适量，用甲醇配成每1 mL含槲皮素0.50 mg的对照品贮备液。精密量取该贮备液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL含槲皮素0.050 mg的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取杠板归药材粉末（过三号筛）约2.0 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足失重，摇匀，滤过。精密量取续滤液20 mL，加入盐酸10 mL，置水浴中加热水解3 h[3]，取出，迅速冷却，转移至50 mL量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系考察

精密量取上述对照品贮备液0.1、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，分置6支10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪，每一浓度重复进样3次，求平均峰面积。以平均峰面积积分值（Y）为纵坐标，槲皮素进样量（X，μg）为横坐标，进行线性回归，得回归方程为Y＝3.679×103X+19.746（r＝0.999 8，n＝18）。结果表明，槲皮素进样量在0.05～1.00 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。