婴幼儿配方食品中阪崎肠杆菌检验方法的比较、优化和研究

廖连英 罗 琳 郑晓冰

(汕头质量计量监督检测所，汕头 515041)

婴幼儿配方食品中阪崎肠杆菌检验方法的比较、优化和研究

廖连英 罗 琳 郑晓冰

(汕头质量计量监督检测所，汕头 515041)

阪崎肠杆菌是乳制品中近几年发现的一种致病菌，属于革兰氏阴性杆菌，适宜生长温度为37～43℃，它能引起严重的新生儿脑膜炎，小肠结肠炎和茵血症，死亡率高达50%以上［1］。目前，微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源，但许多病例报告表明婴儿配方食品是目前发现的主要感染渠道［2］。目前，阪崎肠杆菌的检测方法主要有常规的生化检测鉴定法［2，3］、DFI法 (druggan-forsytheiversen 法 )［4］、DNA 环介导等恒扩增法［5］、普通PCR法和荧光定量PCR法。其中最常见的是普通生化鉴定法［6］(GB 4789.40-2010)和荧光定量PCR法［7］(SN／T 1632.3-2005)。笔者对这两种方法进行了研究和比较，得到一种简易可行的阪崎肠杆菌检测方法，便于各检验机构和企业掌握以加强原料和产品的质量控制。对相关企业进行了调查，分析阪崎肠杆菌的污染原因，以获得控制污染的监督重点，有效降低阪崎肠杆菌的污染，确保婴幼儿群体的健康与安全。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

荧光PCR仪：StepOne型，美国ABI公司；

恒温培养箱：25℃±1℃，LRH-250型（上海一恒科学仪器公司），36℃±1℃，HG303-4A型（南京实验仪器厂），44℃±0.5℃，LHS-250HC-1型（上海一恒科学仪器公司）；

恒温水浴箱：HH-60型，44℃±0.5℃，金坛市科兴仪器厂；

天平：JJ3000型，感量0.1 g，常熟双杰测试仪器公司；

无缓冲蛋白胨水（BPW）：广东环凯微生物科技有限公司；

肠杆菌增菌肉汤（EE肉汤）：广东环凯微生物科技有限公司；

结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂（VRBGA）：广东环凯微生物科技有限公司；

改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤：研域（上海）化学试剂有限公司；

万古霉素：广东环凯微生物科技有限公司；阪崎肠杆菌显色培养基：M160591,广东环凯微生物科技有限公司；

胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）：250 g，广东环凯微生物科技有限公司；

生化鉴定试剂盒：M160591,中西远大科技有限公司；

氧化酶试纸：广东环凯微生物科技有限公司；

阪崎肠杆菌质控菌株：广东环凯微生物科技有限公司。

1.2 检验程序

(1)GB 4789.40-2010法

GB 4789.40-2010方法流程如图1所示。

(2)SN／T 1632.3-2005法

SN／T 1632.3-2005方法流程如图2所示。

2 结果比较

2.1 检验方法比较

(1)GB 4789.40-2010法

①无特殊设备要求，方法经典可行；

②阴性检样3 d可出结果，阳性检样4～5 d可出结果；

③在结晶紫中性红胆盐琼脂平板上或阪崎显色培养基上会产生假阳性菌，必须经生物鉴定方可证实是阴性还是阳性结果。

(2)SN／T1632.3-2005法

①荧光PCR检测设备一次性投入大，后续的消耗品成本较多，同时还涉及到标准阳性菌株的管理与更新换代，对检验人员的技术要求较高；

②一般两天可出检验结果，虽然灵敏度高，检测周期短，但也会产生假阳性结果。对于Ct值在35～40的检样，需经生化鉴定方可证实是阴性结果还是阳性结果。

2.2 检验结果比较

经过对两种检验方法的增菌法进行比较，阳性样品最终在阪崎肠杆菌显色培养基上的菌落形态相同(均为蓝绿色菌落)和生化鉴定试剂盒鉴定结果一致(氧化酶阴性、L-赖氨酸脱羧酶阴性、L-鸟氨酸脱羧酶阳性、L-精氨酸双水解酶阳性、柠檬酸水解阳性、D-山梨醇阴性、L-鼠李糖阳性、D-蔗糖阳性、D-蜜二糖阳性)。

2.3 方法可行性

经过反复试验得出，对一般检验机构和普通企业可采用图3推荐的方法进行实验。

此检验程序对检验设备无特殊要求，方法可靠，所有检验试剂均方便购买，对检验人员的技术要求低，一般的检验机构和食品生产企业均能做到。

3 对检出阪崎肠杆菌企业的调查分析和建议

3.1 调查分析结果

经过一年的跟踪监测，发现婴幼儿米粉中阪崎肠杆菌检出率高于婴幼儿奶粉。通过对检出阪崎肠杆菌企业的调查分析，发现感染阪崎肠杆菌的原因主要是(1)生产环境的卫生管理。婴幼儿配方食品生产环境要求严格，企业虽然采用洁净车间进行生产，但是对洁净车间空气净化系统的维护、清理和保养不够重视，造成空气净化系统成为污染源之一，另外对生产后的管道清理不干净也是污染源之一(如有蟑螂出没和霉变结块)。(2)操作人员的个人卫生不严格，如没有严格按规定洗手、更衣、戴帽，穿专用工作鞋进入生产车间。

3.2 建议

(1)生产婴幼儿配方食品的企业应定期对生产车间的环境、空气净化系统、管道进行清扫、消毒，并严格监督生产操作人员的卫生习惯。

(2)因阪崎肠杆菌是存在于环境中的一种生物，常见于生产婴幼儿配方食品的设施和家居环境中，因此，为防止开封后的产品受到家居环境的污染，开封后的产品应密封保存于阴凉干燥处。

(3)要安全冲调婴幼儿配方食品，首先必须把喂哺或冲调器具加以清洗和消毒。应使用不低于70度的开水来冲调婴幼儿配方食品，以杀死阪崎肠杆菌。冲调好的食品应冷却至可喂哺的温度，然后立即饮用，若冲调后2 h内仍未被饮用就应该倒掉。

(4)为保证我国广大婴幼儿群体的健康与安全，建议加大监管力度，在婴幼儿谷类辅助食品和较大婴儿和幼儿配方食品标准中也应增加阪崎肠杆菌指标。

［1］徐文杰，张娟，戴峰，等.阴沟肠杆菌所致食品中毒细菌学及防治对策研究［J］.中国卫生检验杂志，2006，16(9)：132.

［2］高建新，卢兆芸，肖菊珍.奶粉中阪崎肠杆菌检测方法［J］.中国乳品工业，2009，37(5)：40-43.

［3］高建新，陈海婴，卢兆芸.奶粉中一株阪崎肠杆菌的分离鉴定［J］.现代预防医学，2010，37(1)：105-106.

［4］张爱霞，生庆海，张涛.食品中阪崎肠杆菌分析及检测［J］.中国乳品工业，2005，33(10)：42-44.

［5］鲁曦，师宝忠，王彬，等.LAMP法检测乳粉中的阪崎肠杆菌［J］.现代食品科技，2010，26(5)：540-543.

［6］GB 4789.40-2010 食品微生物检验阪崎肠杆菌检验［S］.

［7］SN／T 1632.3-2005 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法［S］.

郑晓冰，E-mail：narcissus.b@163.com

2011-08-12