调制乳中8种合成色素的快速测定

张春艳，卢华卫，郑书展，刘来俊,白国涛，李红

（内蒙古出入境检验检疫局，呼和浩特 010020）

调制乳中8种合成色素的快速测定

张春艳，卢华卫，郑书展，刘来俊,白国涛，李红

（内蒙古出入境检验检疫局，呼和浩特 010020）

以乙腈溶液沉降蛋白并提取样品中人工合成色素，应用反相高效液相色谱—多波长紫外检测器，外标法定量，测定了调制乳中8种人工合成色素的质量浓度。8种人工合成色素质量浓度在0.1～10.0 mg/L范围内呈良好线性关系，r=0.9999,平均加标回收率为81.7%～106.0%，CV=0.77%～8.97%。该方法简便,准确，重现性好，可用于调制乳中8种合成色素质量浓度的测定。

高效液相色谱法；调制乳；色素；测定

0 引 言

人工合成色素是由人工合成的、含有一定苯胺的有机色素。该类色素色泽鲜艳、染色稳定，在我国饮料生产中允许限量使用。但事实上，企业为追求巨大的经济利益，使食品中合成色素的超标现象时有发生。为了加强调制乳合成色素的监管，需研制相应测试方法。目前文献报道的色素测定方法有高效液相色谱法[1-3]、分光光度法[4]等。其样品处理有的采用吸附与解吸附法，步骤繁琐，不适合调制乳快速测定，有的采用直接用水定容，由于调制乳含有较多蛋白和脂肪，也不适合调制乳。本实验用乙腈沉淀样品蛋白、离心并去除乙腈后，用快速分离柱分离、高效液相色谱仪进行测定，建立了调制乳中8种合成色素的测定方法，具有方法简便、快捷、回收率高、准确性好等特点。

1 材料和方法

1.1 仪器与设备

快速液相色谱仪（1260型），配紫外可见多波长检测器和在线脱气机；超声波清洗仪（KQ-250E）；离心机（3K-15型）；氮吹仪（EFGC-11250）；漩涡混匀器；0.45 μm针式滤膜。

1.2 试剂和材料

除另有规定外，试剂均为分析纯，水为去离子水。乙腈（色谱级）；乙酸铵（分析纯）；8种标准储备液（1 000 mg/L）：称柠檬黄、新红、苋菜黄、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、亮蓝各0.025 g，分别用水定容于25 mL容量瓶；标准混和使用液（100 mg/L）：分取上述8种标准储备液1.0 mL标准储备液于10.0 mL容量瓶，用水定容。

1.3 色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB-C18柱，50 mm×4.6 mm i.d，1.8-Micron。 流动相为乙腈︰乙酸铵初始浓度5%：95%，梯度洗脱，0～2 min,5%乙腈；2～10 min，5%～60%乙腈；10～10.5；60%～5%乙腈；10.5～13min,5%乙腈。,流速为0.5 mL/min；柱温为30℃；进样量为10 L；测定波长柠檬黄410 nm，新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、赤藓红、酸性红520 nm、亮蓝630 nm。

1.4 操作步骤

1.4.1 样品提取

准确称取10 g（精确至0.01 g）调制乳，置于25 mL容量瓶中，加入15 mL乙腈，混匀，用水定容后，超声提取10 min，以10 000 r/min离心10 min，移取2 mL上清液于带刻度试管，于40℃下氮吹至乙腈全部除净,用水定容至2 mL，过0.45 μm针式滤膜，上机测定。

2 结果与讨论

2.1 样品提取、衍生条件的选择

据文献报道[3]，食品中如碳酸饮料、果汁等，可采用直接赶二氧化碳，用水提取，离心，定容。通过实验发现，由于调制乳本身含有较多蛋白质、脂肪，直接提取不适合该类产品。也有文献报道[1]，复杂的食品样品采用尼龙66吸附-解附的方法提取色素，该种前处理时间长，不适于快速测定。本法利用乙腈、三氯乙酸溶液能够沉降蛋白的作用，使干扰物质快速沉降，达到快速处理样品。在实验中，分别试验了在10 g调制乳中加入15 mL、10 mL、5mL乙腈、1 mL乙腈及用1%三氯乙酸等方式沉降蛋白，通过超声提取，发现采用15mL乙腈沉降蛋白效果最佳，溶液澄清，且色素回收率最高，而用三氯乙酸提取，色素回收率几乎为零。同时在实验中发现，样品溶液中含有乙腈会导致色素峰在色谱柱分离上存在较大位移，因此采用在样品中蛋白被乙腈沉降色素被提取后，用氮吹将乙腈除去，再进行检测效果最佳。

2.2 分析条件的选择

2.2.1 色谱柱的选择

目前通常采用的色谱柱均为普通C18柱，本研究针对ZORBAX SB-C18柱，250 mm×4.6 mm i.d，5-Micron柱和50 mm×4.6 mm i.d，1.8-Micron柱测试进行比较，发现采用50 mm×4.6 mm i.d，1.8-Micron柱，可达到较好分离，且分析时间短的特点，测试一个样品只需13分。，而250 mm柱则每测试一个样品需25 min左右，因此，采用50 mm×4.6 mm i.d，1.8-Micron柱可达到快速测试作用。

2.2.2 流动相的选择

乙酸铵溶液和乙腈、乙酸铵溶液和甲醇体系是应用于色素测定较为广泛的流动相，据文献报道[1-3]，测定色素通常采用甲醇︰0.02 mol/L乙酸铵，也有用乙腈︰0.1 mol/L乙酸铵,流动相体系，本研究通过对上述流动相体系实验对比，发现乙腈-乙酸铵体系可使各组分较快分离，达到快速检测，而甲醇-乙酸铵体系要慢近3 min作用。同时本实验也对乙腈与不同浓度的乙酸铵体系 （0.01,0.02,0.05,0.1 mol/L）进行实验，发现，当乙酸铵浓度增加时，各色素出峰时间向后推移，通过综合比较，采用乙腈︰浓度为0.05 mol/L乙酸铵溶液=5%︰95%作为流动相，梯度洗脱0～2 min,5%乙腈，2～10 min：5%～60%乙腈，最佳。

2.2.3 检测波长的选择

文献报道，色素测试多数采用250 nm,但也有采用410,520，630 nm,本法经采用质量浓度为1mg/L标液，通过多波长监测，对各种色素波长吸收进行监测。试验发现，所有色素在250 nm处均有吸收，但样品杂质在其相应处同样有吸收，干扰极大，甚至会导致误识，影响测试。而在410,520，630 nm处，样品中干扰峰极少,通过比较，确定柠檬黄采用410 nm，新红、苋菜黄、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、赤藓红采用520 nm,亮蓝采用630 nm可获得较好的测试值。

3.1 方法的线性范围和检出限

分别配制质量 浓度为0.1，0.25，0.5，1.0，2.50，5.0，10.0 mg/L的8种色素系列混合标准溶液，在选定的色谱条件下进行测定，进样量10 μL，用峰面积与标准工作溶液对各组分的绝对量做图。发现标液在0.1～10.0 mg/L的范围内呈线性关系，8种合成色素0.1 mg/L吸收峰的信噪比（S/N）、检出限结果如表1所示。8种合成色素标准色谱图如图1所示。

表1 方法的线性范围和检出限

表2 调制奶样品添加回收率和精密度结果（n=6）%

3.2 方法的精密度和回收率

为了评价方法的准确度及精密度，用不含色素的调制奶样品中分别进行0.25，1.25，2.5 mg/kg（均为质量分数，下同）3个水平的添加回收率和6次平行测定精密度实验。结果如表2所示。由表2可以看出，本方法的平均回收率为81.7%～106.0%，变异系数为0.77%～8.97%。

[1]李娜.快速液相色谱法测定食品中11种合成着色剂[J].分析检测，2009，30（01）：313-312.

[2]食品中合成着色剂的测定（GB/T 5009.35-2003）[S].

[3]食品中的诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的测定（SN/T 1743-2006）[S].

[4]许路贵.多波长分光光度法测定食品中的合成色素[J].现代预防医学，2002，29（5）：715-716

Quickly determination of eight kinds of synthetical pigmentsin blend milk

ZHANG Chun-yan,LU Hua-wei,ZHENG Shu-zhan,LIU Lai-jun,BAI Guo-tao,LI Hong
（Inner Mongolia Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Huhhot 010020，China）

Protein in blend milk was coagulated by CH3CN and eight kinds of synthetical pigments in blend milk was purified,the solution was determined by HPLC-DAD.Results showed the linearity of eight kind of synthetical pigments was in the range of 0.1～10.0 mg/L,r=0.9999.The average recovery was in the range of 81.7%～106.0%,CV was between 0.77%and 8.97%.This method was quickly and accurate with good reproducibility and can be used for the determination of eight kinds of synthetical pigments in blend milk.

HPLC；blend milk；synthetical pigment；determintion

TS252.7

A

1001-2230（2011）10-0048-02

2011-07-04

张春艳（1969-），女，高级工程师，从事食品、乳制品的检验与研究工作。