高效液相色谱法同时测定安神补脑液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的含量

王 伟,许 祺,杜秀芳,王春英,刘西哲,张小幸

(河北医科大学药学院,河北石家庄 050017)

高效液相色谱法同时测定安神补脑液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的含量

王 伟,许 祺,杜秀芳,王春英,刘西哲,张小幸

(河北医科大学药学院,河北石家庄 050017)

建立了同时测定安神补脑液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷含量的方法。采用高效液相色谱法(HPLC),迪马DiamonsilTMC18色谱柱(4.5 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,检测波长为350 nm,流速为1.0 m L/min,柱温为30℃。淫羊藿苷质量浓度为1.07～9.63μg/m L范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 5);平均加样回收率为102.2%,RSD为2.7%。二苯乙烯苷质量浓度为10～90μg/m L时与峰面积线性关系良好(r=0.999 8);平均加样回收率为99.72%,RSD为2.3%。该方法精密度高,重复性好,可用于安神补脑液的质量控制。

安神补脑液;淫羊藿苷;二苯乙烯苷;高效液相色谱法

安神补脑液是由鹿茸、何首乌、干姜、甘草、大枣、淫羊藿苷6味中药和维生素B1组成的复方制剂,具有生精补髓、增强脑力的功效,用于神经衰弱、失眠、健忘、头痛等症的治疗[1-2]。《中华人民共和国药典》(2005年版)以淫羊藿苷含量作为安神补脑液的定量质控指标,以二苯乙烯苷作为定性鉴别指标[3]。相关文献[4-6]也主要是以淫羊藿苷、大黄素、维生素B1等单一化学成分作为该药的质控指标。为了能更有效地对安神补脑液进行质量控制,笔者把单一指标定量控制提高到同时控制多个有效成分的含量,建立了用HPLC同时测定安神补脑液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷含量的方法。

1 仪器与材料

Agilent Technologies 1200 series高效液相色谱仪,DAD检测器。

淫羊藿苷和二苯乙烯苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号分别为0737-9709和0844-200003,供含量测定用);乙腈(色谱纯,美国迪马公司提供);安神补脑液(吉林敖东延边药业股份有限公司提供,批号分别为0808113,0806125,0902326);水为二次重蒸水;其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

迪马DiamonsilTMC18色谱柱(4.5 mm×250 mm,5μm);乙腈-水为流动相,梯度洗脱(0～10 m in,乙腈体积分数为30%～50%;10～11 min,乙腈体积分数为50%～80%;11～15 min,乙腈体积分数为80%～100%;15～20 min,乙腈体积分数为100%);流速为1.0 m L/min;检测波长为350 nm;柱温为30℃;进样量为25μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取淫羊藿苷和二苯乙烯苷对照品适量,加甲醇制成质量浓度分别为10.74μg/m L和100μg/m L的溶液,即得。

2.2.2 样品溶液的制备

精密量取本品1 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇至10 mL刻度线,摇匀,离心(12 000 r/min)20 min,取上清液,即得。

2.3 专属性试验

按处方量分别制备不含淫羊藿苷和何首乌药材的阴性样品,按2.2.2所述方法制成淫羊藿苷阴性对照溶液和何首乌阴性对照溶液进行测定。结果表明,在淫羊藿苷和二苯乙烯苷相应的保留时间范围内无干扰色谱峰出现。HPLC色谱图见图1。

2.4 线性关系

精密量取淫羊藿苷和二苯乙烯苷对照品溶液适量,加甲醇制成含淫羊藿苷质量浓度分别为1.07,3. 21,5.37,7.49,9.63μg/m L及二苯乙烯苷质量浓度分别为10,30,50,70,90μg/m L的混合对照品溶液,摇匀。在上述色谱条件下,分别进行测定,记录色谱图,以对照品质量浓度与其对应的峰面积进行线性回归。淫羊藿苷的回归方程为y=23 934 x+ 1.975 2,r=0.999 5,表明淫羊藿苷在1.07～9.63 μg/m L范围内与峰面积的线性关系良好;二苯乙烯苷的回归方程为y=15 149x+131.7,r=0.999 8,表明二苯乙烯苷在10～90μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 回收率试验

精密量取含淫羊藿苷、二苯乙烯苷质量浓度分别为62.2μg/m L和388μg/mL的样品(批号为0808113)0.5 mL,置于10 mL量瓶中,分别加入10.74μg/mL的淫羊藿苷对照品溶液3.0 mL及100μg/mL的二苯乙烯苷对照品溶液2.0 m L。加甲醇稀释到刻度,摇匀,离心分离(12 000 r/m in)20 m in。取上清液进行测定,平行测定6次,计算加样回收率。淫羊藿苷的平均加样回收率为102.2%,RSD值为2.7%;二苯乙烯苷的平均加样回收率为99.72%,RSD值为2.3%。

A—淫羊藿苷和二苯乙烯苷混合溶液;B—样品溶液;C—样品溶液加淫羊藿苷和二苯乙烯苷;D—淫羊藿苷阴性对照溶液;E—何首乌阴性对照溶液;1—二苯乙烯苷;2—淫羊藿苷

2.6 精密度试验

取同一样品溶液,连续进样6次,测得淫羊藿苷和二苯乙烯苷峰面积的RSD值分别为0.3%和0.4%。

2.7 重复性试验

取同一批(批号为0808113)样品,按2.2.2所述方法平行制备6份溶液,测得峰面积,淫羊藿苷和二苯乙烯苷质量浓度的RSD值分别为0.6%和0.9%。

2.8 稳定性试验

按2.2.2所述方法制备样品溶液,分别放置0,1,2,4,6,8 h后进行测定。计算得淫羊藿苷和二苯乙烯苷质量浓度的RSD值分别为1.1%和1.4%。结果表明,淫羊藿苷和二苯乙烯苷在样品溶液中放置8 h稳定。

3 样品测定

取安神补脑液样品3批(批号为0808113,0806125,0902326),分别计算样品中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的质量浓度。结果见表1。

表1 淫羊藿苷和二苯乙烯苷的质量浓度(n=3)Tab.1 Contents of icariin and stilbene glycoside(n=3)

4 讨 论

测定波长选择时发现,淫羊藿苷和二苯乙烯苷的λmax分别在260 nm和320 nm处,但是在260 nm和320 nm下的色谱图中二者对应的保留时间处均有干扰峰存在。试验表明,在350 nm处2种组分均有良好吸收,且相应在保留时间处无杂质峰出现,故选择在350 nm处同时测定淫羊藿苷和二苯乙烯苷的质量浓度。

样品前处理采用直接甲醇稀释、离心后测定的方法,避免了有可能使待测成分造成损失的提取和浓缩操作,简化了样品处理过程,方便快速。结果表明,该方法灵敏度高,重现性好,能准确测定安神补脑液中二苯乙烯苷和淫羊藿苷的质量浓度,可用于评价该制剂的质量。

[1] 魏海峰,叶翠飞,李春阳,等.安神补脑液对睡眠剥夺模型大鼠学习记忆及脑源性神经营养因子表达的影响[J].中国临床药理学与治疗学(Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics),2006,11(11):1 230-1 232.

[2] 温富春,许家洁,王玉红,等.安神补脑液对小鼠学习记忆能力及脑内蛋白质合成的影响[J].中国中医药信息杂志(Chinese Journal of Information on Traditional Chinese Medicine),2007,14(8):30-31.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:中国医药科技出版社,2005.

[4] 冯胜民,朱山寅.RP-HPLC测定安神补脑液中淫羊藿苷的含量[J].中国新药杂志(Chinese New Drugs Journal),2006,15(7):544-575.

[5] 王传祥,姜文凯,魏年美.安神补脑液中大黄素含量测定[J].山东医药工业(Shandong Medical Industry),2003,22(3):24-25.

[6] 梁丽梅,庞小雄.固相萃取-高效液相色谱法测定安神补脑液中维生素B1的含量[J].广东药学院学报(Academic Journal of Guangdong College of Pharmacy),2006,22(2):149-173.

[7] 吴雪萍,孙凤霞,苏为科,等.截短侧耳素的HPLC测定[J].河北科技大学学报(Journal of Hebei University of Science and Technology), 2008,29(1):30-32.

[8] 武 彤,李朝阳,李巧玲,等.三唑类手性农药高效液相色谱分离的研究[J].河北科技大学学报(Journal of Hebei University of Science and Technology),2008,29(4):279-291.

Determination of icariin and stilbene glycoside in anshenbunaoye by HPLC

WANGWei,XU Qi,DU Xiu-fang,WANG Chun-ying,L IU Xi-zhe,ZHANG Xiao-xing
(School of Pharmacy,Hebei Medical University,Shijiazhuang Hebei 050017,China)

The method fo r simultaneously determining icariin and stilbene glycoside in anshenbunaoye was established.The method is based on the HPLC separation w ith DAD detection.The chromatography analysis was performed on D IKMA DiamonsilTMC18column(4.5 mm×250 mm,5μm)by gradient elution w ith acetonitrile and water at a flow-rate of 1.0 mL· min-1.Detection was done by spectrophotometry at 350 nm and the column temperature was 30℃.The linear range of icariin was 1.07～9.63μg·m L-1(r=0.999 5),and themean recovery was102.2%w ith RSD of 2.7%.The linear rangeof stilbene glycoside was 10～90μg·mL-1(r=0.999 8),and themean recovery was 99.72%w ith RSD of 2.3%.Themethod was accurate,reliable w ith good repeatability and can be used fo r the quality control of anshenbunaoye.

anshenbunaoye;icariin;stilbene glycoside;HPLC

R917

A

1008-1542(2010)05-0403-03

2010-04-26;

2010-05-27;责任编辑:张士莹

河北省教育厅自然科学基金资助项目(2009147)

王 伟(1972-),女,河北新河人,高级实验师,主要从事药物分析方面的研究。

王春英副教授,E-mail:wangcy730301@163.com