牡蛎中牛磺酸含量测定方法的建立

李秀娟 鲁 曾 黄贤刚

（日照职业技术学院食品工程学院，山东 日照 276800）

牡蛎中牛磺酸含量测定方法的建立

李秀娟 鲁 曾 黄贤刚

（日照职业技术学院食品工程学院，山东 日照 276800）

确定分光光度法测定牛磺酸含量的条件，其最佳测定条件为：8mL 1mol/L的醋酸钠，0.6mL乙酰丙酮，2mL 37%甲醛作为显示剂，在60℃下进行显色反应，显色20min后在350nm下进行测定，并对该试验方法进行验证性实验，结果显示该方法测定牛磺酸成本低，干扰少，重现性好，为测定的最佳方法。

分光光度法；牡蛎；牛磺酸

牛磺酸（lyium cortex taurine）又称牛胆碱、牛胆素，化学名2－氨基乙磺酸，结构式为NH2CH2CH2SO3H，因从牛胆汁（bovine bile）中首次分离而得名［1］。牛磺酸具有多种生物药物功能，对心脏、肝脏、内分泌机能等起着一定的作用，并有促进人体细胞代谢、调节生理功能、治疗疾病的作用［2］。

目前国内外牛磺酸大多采用化学方法合成，但该方法环境污染较为严重；而提取天然牛磺酸的工艺虽简单且无污染，但价格远高于化学合成的牛磺酸。因此，从海洋低值产品中提取牛磺酸具有较高的经济、实用和环保价值［3］。目前国家标准食品中牛磺酸的测定方法为液相色谱法，该法在应用时，所需设备较为昂贵，成本较高。使得该提取方法的研究进展较为缓慢。因此，急需找到一种简便、准确的牛磺酸测定方法，以促进海洋低值产品中牛磺酸提取方法的研究。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂

1.1.1 原料与试剂

牡蛎：日照水产品市场；

乙醇、乙酰丙酮、甲醛、醋酸钠：AR，天津市科密欧化学试剂有限公司；

牛磺酸样品（BC）：湖州生物化学有限公司。

1.1.2 试验仪器

高速组织捣碎机：DS－1，上海标本模型厂制造；

电热恒温水浴锅：HH－2，龙口市先科仪器公司；

实验室台式精密PH计：KE1106/KE1106B型，武汉科易科技有限公司；

旋转蒸发仪：N－1001型，上海兰科仪器；

紫外可见分光光度计：752型，上海光谱仪器有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 显色原理 牛磺酸是一种氨基酸，本身无紫外吸收。在醋酸钠存在下，牛磺酸与乙酰丙酮和甲醛经过加热反应生成 N－取代基－2，6－二甲基－3，5－二乙酰基－1，4－二氢吡啶。该配合物显黄色，在400nm左右有一肩峰，其吸收值与牛磺酸在一定浓度范围内呈线性。

1.2.2 分光光度计条件的确定 分别对影响吸光度的波长、显色温度、显色时间、乙酰丙酮、甲醛、醋酸钠用量进行确定，最终确定采用分光光度计法测定牛磺酸的最佳试验条件。在进行试验时，除所需确定的因素外，其他因素的试验条件如下：10mL 1mol/L的 醋 酸 钠，1mL 乙 酰 丙 酮，1mL 37%甲醛作为显示剂，在50℃下进行显色反应，显色10min后测定。

1.2.3 牡蛎中牛磺酸的提取 采用水提法对牡蛎中的牛磺酸进行提取，并最终通过分光光度计对其中的牛磺酸含量进行测定。

2 结果与讨论

2.1 测定条件的确定

2.1.1 波长的确定 采用1.2.2所述方法，从340～510nm每隔10nm测量1次吸光度，结果见图1。

图1 吸光度与波长的关系图Figure 1 Effect of wavelength on absorbance

由图1可知，吸光度在350nm时达到最高，这与文献［4］所采用的吸光度有所不同，这可能是由于在进行试验方法的确定时未对最大吸收波长进行确定，从而造成了最大吸收波长的偏差。

2.1.2 显色温度的确定 在350nm下，对不同显色温度下的显色试验，进行吸光度的测定，结果见图2。

图2 吸光度与温度的关系图Figure 2 Effect of temperature on absorbance

由图2可知，温度在60℃时，其吸光度达到最高。因此采用60℃作为其显色温度。

2.1.3 显色时间的确定 在350nm下，60℃温度下进行显色反应，对不同显色时间的吸光度进行测定，结果见图3。

图3 吸光度与显色时间关系图Figure 3 Effect of the time of developer on absorbance

由图3可知，吸光度在25min时达到最高，在20～40min内无显著差异（P＞0.1），20min与15min相比存在显著差异（P＜0.05）。因此采用显色时间20min后的进行测定，并在显色40min内测定完毕。

2.1.4 醋酸钠用量的确定 在350nm下，60℃温度下加入不同量的1mol/L的醋酸钠进行显色反应，反应至20min时进行测定，结果见图4。

图4 吸光度与醋酸钠用量关系图Figure 4 Effect of the amount of sodium acetate on absorbance

由图4可知，醋酸钠用量在8mL时达到最大，随着醋酸钠用量的加大，其吸光度反而呈下降趋势，说明醋酸钠对此试验有较大的影响。

2.1.5 乙酰丙酮用量的确定 在350nm下，60℃温度下加入不同量的乙酰丙酮进行显色反应，反应至20min时进行测定，结果见图5。

图5 吸光度与乙酰丙酮用量关系图Figure 5 Effect of the amount of acetyl acetone on absorbance

由图5可知，乙酰丙酮用量在0.6mL时达到最高，随着乙酰丙酮用量的加大，其吸光度反而呈下降趋势。

2.1.6 甲醛用量的确定 在350nm下，60℃温度下加入不同量的37%甲醛进行显色反应，反应至20min时进行测定，结果见图6。

由图6可知，37%甲醛用量在2mL时吸光度达到最高，随着甲醛加入量的加大其吸光度呈下降趋势。

2.2 标准曲线回归方程的确定

采用上述所确定的试验方法，即：8mL 1mol/L的醋酸钠，0.6mL乙酰丙酮，2mL 37%的甲醛作为显示剂，60℃下进行显色反应，显色20min后在350nm下进行测定，其标准曲线见图7。

图6 吸光度与甲醛用量关系图Figure 6 Effect of the amount of formaldehyde on absorbance

图7 牛磺酸标准工作曲线Figure 7 Standard working curve of taurine

由图7可知，分光光度法测定牛磺酸在200mg之内具有较好的线性关系，其相关系数为0.997 5。

2.3 牡蛎中牛磺酸测定的添加回收率试验

在牡蛎中精确添加一定量的牛磺酸标准样品，然后采用水提法对牡蛎中的牛磺酸进行提取，并用阳离子交换树脂进行纯净处理，最终得到的添加率试验结果见表1。

由表1可知，水提法提取的牛磺酸，用分光光度法进行测定时其他物质对吸光度的影响较小；该测定方法准确度高，重现性好；此方法与液相色谱法相比所需设备投入较小，成本较低，为一种简单实用的测定方法。

表1 牛磺酸测定的添加回收率试验Table 1 Recovery of taurine added sample

3 结论

本试验确定了分光光度法测定牛磺酸含量的条件，其最佳测定条件为：8mL 1mol/L的醋酸钠，0.6mL乙酰丙酮，2mL 37%甲醛作为显示剂，在60℃下进行显色反应，显色20min后在350nm下进行测定，该试验方法测定牛磺酸在200mg内具有较好的线性相关，该方法准确度高，重现性好，不失为一种简单实用的牛磺酸测定方法。

1 Hayes K C.Myocardial failure in cats associated with low plasma taurine：A versible cardiomy pathy［J］.Science，1987（14）：237.

2 丁力，万华印.牛磺酸对心肌细胞的保护作用及机理［J］.广州医药，1995（1）：3～5.

3 何丽华，申晓辉.食品中牛磺酸对人体的影响［J］.现代预防医学，2003，30（1）：768～772.

4 杨涓，魏智清，庞伟.分光光度法测定宁夏枸杞中牛磺酸含量［J］.农业科学研究，2005，26（2）：28～30.

The determination of taurine in ostrea rivularis by spectophotometry

LI Xiu－juan LU ZengHUANG Xian－gang

（College of Food Engineering，Rizhao polytechnic，Rizhao，Shandong276826，China）

This article determined the conditions of taurine for content spectrop－hotometer.The result showed that the amount of 1mol/L sodium acetate is 8mL，acetyl acetone is 0.6mL，37%formaldehyde is 2mL.The experiment only under 60℃ develop 20min，can obtained accurate results under 350nm wavelength.

spectmphotometer；oyster；lyium cortex taurine

10.3969 /j.issn.1003－5788.2010.05.023

李秀娟（1967－），女，日照职业技术学院副教授，硕士。E－mail：lxj818＠163.com

2010－06－01