酸美酵素在改善小中猪生产性能和免疫调节上的应用

张超峰,沈建军

(浙江美保龙生物工程有限公司,浙江金华321017)

酸美酵素是由α-甘露聚糖肽、复合醋酸杆菌、酵母、芽孢杆菌益生菌、小肽和酶等组成。主要成分α-甘露聚糖肽是从经基因修饰的α-溶血性链球菌33#菌株的深层发酵培养液中提取的具有多种生物活性的一种多糖物质。主要作用于骨髓、脾脏等免疫器官和实质性器官,在人医上多用来抗肿瘤以及增强免疫力,在畜、禽上主要用来提高免疫力,促进消化吸收等。

2008年4～7月,笔者在福建某3 000头母猪规模猪场专门针对保育阶段的40日龄小猪,添加不同剂量的酸美酵素,通过测定试验周期末始个体均重差、料肉比、发病率等研究生长性能的改善;通过测定免疫球蛋白(IgG)、红细胞数、超氧化物歧化酶(SOD)活性、猪瘟抗体水平来分析酸美酵素在提高小中猪免疫力方面的作用。

1 材料

1.1 试验地点 福建某生产状况正常的3 000头母猪规模猪场。

1.2 试验材料 酸美酵素是由浙江美保龙生物工程有限公司提供,批次20080319,主要成分α-甘露聚糖肽含量为5%。所有参与试验的小中猪均为“杜×长×大”三元杂交的起始个体均重在11.3～12.3 kg之间的小猪,由猪场提供。

试验所需药品、器材除猪瘟正向间接血凝抗原、阴性和阳性血清购自中国农业科学院兰州兽医研究所外,其余由美保龙生物研究所提供。

1.3 试验饲粮 所有参与试验的小中猪饲粮根据试验要求统一配制,均参照美国NRC(1998版)猪营养需要配合而成。其中,6%龙卷风小中猪系列预混料由浙江大飞龙动保集团提供,饲粮配方见表1。

表1 试验饲粮配方

2 方法

选取960头个体健康、生长良好、发育整齐的健康“杜×长×大”小猪,个体均重 11.3～12.3 kg之间。疫苗免疫程序试验组与对照组相同,试验分为4组,每组 240头,即试验 A组、试验B组、试验 C组和对照组。

试验开始前预喂5 d,试验周期为40 d。在预试验的基础上,各组分别饲喂含酸美酵素0.2%(试验A 组)、0.4%(试验B组)、0.6%(试验C 组)比例的饲料,所有组均为自由采食饮水。试验初末称重、记录饲料使用量、发病情况,同时在试验起始、中期、末期前腔静脉窦采血,进行相关检测。

2.1 实验室检测地点 浙江美保龙生物新技术研究所。

2.2 生长性能测定 试验小猪均在试验正式开始的第1天随机分组,并称重,到第40天再次称重。同时记录饲养过程中的饲料使用量,试验周期内的各组发病率和死亡率。

2.3 免疫力测定 在第1天、第20天、第40天随机抽样采血,每组 30头,每头 5mL,其中 2.5 mL全血,2.5mL用来制备血清。利用免疫比浊法测定猪的免疫球蛋白。红细胞计数采用试管稀释法：用沙利氏吸血管吸取20μL全血吹入含有4mL红细胞稀释液的试管底部,吸、吹数次后混匀,用血细胞计数板在显微镜下计数并计算。

2.4 猪瘟抗体水平的测定 所以参与试验猪在出生后25日龄首免猪瘟弱毒活疫苗,60日龄进行二免。试验开始时(40日龄)、20 d时(60日龄)前、40 d时(80日龄)分别检测,采用正向血凝试验。具体操作步骤如下：即在96孔血凝板上,每孔加入50 μL稀释液,每排第1孔加入待检血清50μL,递比稀释待检血清至血清浓度为1∶512,最后50μL丢弃。再在每孔加入抗原诊断液25μL,置于湿盒中25℃孵育1.5～3 h,判定结果。

2.5 血清超氧化物歧化酶活性测定 利用黄嘌呤氧化酶法测定,SOD检测试剂盒和紫外分光光度计测定SOD活性,参照试剂盒使用说明进行。

2.6 数据分析 试验结果使用SPSS 15.0软件进行统计分析。

3 结果与分析

3.1 生长性能测定结果 从表2可以看出,添加不同剂量的酸美酵素,试验B、C组的日增重分别比对照组提高59.46 g(P＜0.05)和81.98 g(P＜0.01),但B、C组间差异不明显;料肉比和发病率分别降低0.19(P＜0.05)和0.27(P＜0.05)、12.5(P＜0.01)和12.92(P＜0.01),B、C组间差异不明显。不同试验组与对照组相比,各组间的日均耗料量未见明显差异(P＞0.05)。添加酸美酵素的各组死亡率均明显低于对照组。考虑到使用成本,试验B组0.4%的酸美酵素添加量较为合适。

表2 添加不同剂量酸美酵素对仔猪生长性能影响的测定结果

3.2 免疫调节因子测定结果 见表3。

表3 添加不同剂量酸美酵素对仔猪免疫调节因子的测定结果

从表3可以看出,试验初始测定的免疫球蛋白水平并无差异,当试验进行到20 d时,试验B组与对照组相比IgG水平较高,差异明显(P＜0.05),但其他各组间未见明显差异。到试验进行的第40天,试验组免疫球蛋白的测定水平均比对照组的要高,差异明显(P＜0.05)。可见,短期使用酸美酵素的免疫效果并不明显,连续使用1个月以上,对仔猪的免疫力提升见到明显效果。

从不同采血时间测得的红细胞数目来看,试验进行到20 d时试验组与对照组相比较红细胞数均有显著提高(P＜0.05),但试验组间差异不明显(P＞0.05)。这表明酸美酵素有增加红细胞,提高免疫容量的作用[1],但是0.2%～0.6%的添加量没有差异。当试验进行到40 d时,试验组红细胞数虽然仍有增加,试验组间仍不明显(P＞0.05),与对照组相比差异极显著(P＜0.01)。40 d时试验组所测得的红细胞水平与20 d时相比未见明显差异,这表明当酸美酵素使用一段时间后能够稳定机体免疫系统,自体调节免疫容量的平衡,防止免疫紊乱现象的发生。

试验进行到第20天时,各试验组间的超氧化物歧化酶活性与对照组相比变化差异显著(P＜0.05);试验进行到第40天时,各试验组间的超氧化物歧化酶活性与对照组相比变化差异显著(P＜0.05);试验组间20 d时与40 d时相比较差异显著。这表明随着使用酸美酵素时间的延长,SOD活性在进一步增强,从而刺激机体器官的生长发育,迅速进行代谢。

3.3 猪瘟抗体水平的测定结果 见表4。

表4 猪瘟抗体水平的测定合格率 (%)

从试验检测结果来看,25日龄仔猪猪瘟弱毒苗首免效果并不好,试验组与对照组均在43%左右波动。当试验进行到20 d时(60日龄2免前),发现试验组的猪瘟抗体水平均有提升;对照组猪瘟抗体水平在下降(P＞0.05),试验组与对照组相比差异显著(P＜0.05)。当试验进行到40 d时,试验组与对照组相比差异极显著(P＜0.01)。

4 讨论

4.1 试验结果表明,酸美酵素在改善仔猪生产性能方面的效果明显。0.4%和0.6%的添加量对提高仔猪日增重、降低死亡率和发病率比0.2%的添加量有更为明显的效果,同时降低了料肉比,提高了饲料报酬。

4.2 酸美酵素在提升免疫力方面需要时间较长,实验结果表明,提升免疫球蛋白水平至少需要1个月以上。要连续使用不少于40 d,才能有效降低死淘率,控制在5%左右。当然,科学合理的饲养管理操作对猪群整体水平的影响不可忽略,即使使用再好的药物,但管理跟不上依然不会取得较好的效果。

4.3 红细胞自身具有携氧、运输气体的功能外,还具有识别、粘附、杀伤抗原、清除循环免疫复合物和病原体、参与免疫调控等多种重要免疫功能。本试验进行20 d和40 d时,试验A、B、C组的红细胞数均比对照组高,差异明显。这表明酸美酵素通过提升红细胞数量增加了机体免疫容量,间接提升了组织器官的免疫功能。

超氧化物歧化酶就是正常组织细胞中存在的抗氧化酶,它能够灭活自由基,具有保护细胞的功能。

试验结果表明：40日龄仔猪饲喂不同剂量的酸美酵素,在试验0～40 d过程中,猪血清内SOD含量一直在不断升高,与对照组相比,试验经20 d时差异显著(P＜0.05),达到40 d时差异极显著(P＜0.01),但试验组间差异不明显。从外观上看,试验猪只精神活跃,主要是因为体内各器官组织的细胞在α-甘露聚糖肽作用下活化能力加强,组织代谢旺盛引起的,这也是试验组死淘率较低(5%左右)的原因,而对照组仔猪的精神状况一般,死淘率超过10%。

4.4 在笔者实际工作过程中,发现很多规模场猪瘟抗体实际检测水平均达不到合格标准。免疫不合格产生的原因可能是兽医操作不规范、疫苗使用不合理以及应激和饲养管理不善造成的。使用酸美酵素以后发现不仅提高了猪瘟免疫合格率(74%～85%),而且延缓了抗体水平下降速度,对保证猪群的稳定,提高猪群有效生产力发挥出重要作用。

5 结语

添加不同剂量的酸美酵素对仔猪的生长性能和免疫调节有明显的改善作用,其中0.4%～0.6%的添加量比0.2%的添加量效果更好。

[1] 樊福好.继承免疫学与现代猪病的发展[J].广东养猪业,2009(1)：45-51.

[2] 汪敬武,王兆喜,杨伟平.流动注射免疫比浊法测定血清中免疫球蛋白A[J].分析化学,2004,32(6)：724-728.

[3] Kaw ai K,Kuauda R,Itam i T.Mechanism s of proctection in ayuorally vaccinated for vib risis[J].Fish Path,1981,15(3/4)：257-262.