替硝唑氯己定洗剂的制备和质量控制

黄德光

（湖南省安仁县人民医院，湖南安仁 423600）

替硝唑氯己定洗剂的制备和质量控制

黄德光

（湖南省安仁县人民医院，湖南安仁 423600）

目的：建立制备替硝唑氯己定洗剂及含量测定方法。方法：以替硝唑和氯己定为主药制备替硝唑氯己定洗剂，采用高效液相色谱法直接测定两主药含量。结果：替硝唑氯己定洗剂配伍合理，质量可控。结论：该洗剂制备工艺简单、质量稳定、含量测定方法准确。

替硝唑；氯己定；洗剂；高效液相色谱法

替硝唑氯己定是临床使用较广的药物，常与头孢类抗生素交替使用。其是对厌氧菌和原虫感染有较高活性的药物，是继甲硝唑后的硝基咪唑类衍生物。它不仅克服了甲硝唑的不良反应，而且具有在体内分布广、耐药性低、疗效高的特点。其作用原理是硝基被还原成一种细胞毒，从而作用于细菌的DNA代谢过程，促使细菌死亡。氯己定的机制为抑制其氧化还原反应，使原虫的氮链发生断裂，从而杀死。但在替硝唑氯己定制剂中，由于替硝唑、氯己定紫外线吸收光谱相互重叠，干扰含量测定。因此，笔者建立了以高效液相色谱法（HPLC）同时测定替硝唑氯己定溶液中两主药含量的方法。

1 材料与方法

1.1 材料

本组实验采用LC-1OATvp液相色谱仪：日本岛津。N2010色谱工作站 （中国科学院生产）。微型旋涡振荡器（WH-1，上海沪西分析仪器厂），离心机（80-2上海手术器械厂）。2010 A紫外检测器，2010 A柱温箱，2010 A工作站。Milli-labo纯水仪，sartorius BP211 D电子天平。

1.2 制备方法

替硝唑对照品 （中国药品生物制品检定所，批号100336-200402），氯己定（上海人民制药厂）。替硝唑200mg，氯己定 1 200mg，甘油 5 g，三乙醇胺 2.0 g，95%乙醇 25 g，水加到1 000 ml。加适量水使其充分溶胀，放置1～2 d后搅拌溶解，用三乙醇胺调pH至6左右；将替硝唑溶于95%乙醇，加甘油混合；然后合并两液，加入溶解的透明质酸钠，再加水至100 g搅拌均匀。标准使用液：取一定量上述标准储备液混合，用超纯水逐级稀释，配成替硝唑氯己定浓度为1.0mg/m l的混合标准使用液。

1.3 实验条件

C18色谱柱 5 μm，（250mm×4.6mm），i.d； 柱温：40℃；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.025mol/L磷酸溶液[取磷酸 0.7ml，置1 000ml量瓶中，加水约 800m l、三乙胺1.8ml，再加水至刻度，摇匀]（20∶80）为流动相；紫外可见检测器，检测波长250 nm。

1.4 实验方法

取本品1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，密塞，称翼定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取样液与标准应用液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

替硝唑氯己定中待测组分计算公式：Xy=Cs×Va

Xy为样品中替硝唑氯己定的含量（μg）；Cs为由标准曲线查出的样液中替硝唑氯己定浓度（pg/ml）；Va为样品体积（ml）。

2 结果

2.1 色谱柱的平衡

待测组分与流动相中的缓冲溶液生成的离子对化合物易在色谱柱上产生吸附，可造成柱压的变化，对色谱柱的柱效影响非常明显。为防止压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力，需对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。通常采用5～10倍柱容积或者与分析周期等长时间的流动相流经色谱柱，使固定相与流动相达到完全平衡。本实验在一次色谱分离之后先用有较大洗脱能力的甲醇冲柱5 min，再用流动相冲柱10min使色谱柱达到平衡。在完成色谱分析之后，采用超纯水、甲醇冲够足够的时间以充分冲掉色谱柱上的吸附物，保护色谱柱，延长其使用寿命。笔者比较含相同比例的不同有机相的流动相体系，甲醇更合适本实验的分离体系，故选择甲醇与缓冲溶液作为流动相进行优化。

2.2 柱温的选择

固定其他条件，控制色谱柱柱温分别为20℃、40℃、60℃、80℃进行实验。实验结果表明，当色谱柱温为60℃和65℃时，替硝唑及氯己定的色谱峰发生拖尾或者重叠；柱温为40℃时，两种组分的分离度均＞1.5、有较好的峰形和响应值。故本实验选择色谱柱温为40℃。

2.3 精密度实验

本组实验按选定的HPLC色谱条件，在同一天内连续8次测定混合标准溶液，以各组分的峰面积，计算日内精密度（以相对标准偏差RSD表示）。本法变异系数为1.02%～1.16%，符合测定要求的2%以内。具体情况见表1。

表1 批内精密度实验（mg/m l）

2.4 准确度实验

本组实验还同时使用了己知含量的样品进行了加标回收实验。分别加入高、低两种浓度水平的混和标准溶液，根据样品含量和加标后测定值计算加标回收率，由实验结果可知，替硝唑、氯己定的回收率分别为102.4%和98.6%，均有较好的回收率。具体情况见表2。

表2 批内准确度实验（m g/m l）

2.5 稳定性实验

按中药稳定性实验要求 ，本品室温存放，温度15～30℃，相对湿度50%～90%，对不同批号的3批替硝唑氯己定洗剂进行3个月、1年的稳定性考察，检验项目包括性状、鉴别、均匀度、水分及菌检。结果表明，检品1年内均无明显变化，符合质量标准规定。

3 讨论

替硝唑是一种新型的抗厌氧菌药物，效果较甲硝唑好，副作用小[1]。根据文献报道，感染根管的细菌主要是厌氧菌。因此替硝唑已为治疗口腔疾病首选抗生素药物[2]。研究证明，感染根管及根尖周炎是以厌氧菌为主要并有需氧菌的混合感染[3]。除厌氧菌外，尚有一些革兰阳性菌。替硝唑对各种厌氧菌有明显杀菌作用，能杀灭根管内及根尖周的厌氧菌。氯己定为广谱抗菌药。与替硝唑有协同作用，增强了抗菌能力，扩大了抗菌谱。当前越来越多研究证明厌氧菌在牙髓病及根尖病感染中有着重要意义[4]。牙髓病及根尖周病虽经根管制备、消毒、冲洗，但仍有部分细菌存留，易在适当条件下复发。替硝唑粉+氯己定混合调成糊状充填根管能继续抑制和消灭存留在根管及根尖周的厌氧菌，防止再感染，从而取得良好效果[5]。

HPLC是发展较快也较成熟的分析方法，具有高效、高速、高灵敏度及高度自动化等特点，尤其适用于高沸点、不能气化、热稳定性差的有机物及各种离子的分离分析。它是一种非破坏性的技术手段，可以达到制备、定性、定量的目的[6]。包括以紫外、紫外联合示差折光、二极管阵列、荧光检测器以及质谱为检测器的几种方法。不同的检测器采用不同的样本处理方式。有文献报道对辣椒样本用0.08 mol/L磷酸盐缓冲液-乙醇（1∶1）直接匀质后超声波处理，定容过滤后加一定量溴化四丁基胺和磷酸缓冲液，pH 3.0，再以水定容后用真空萃取装置Sep-pakVac C18柱进行萃取。本实验选择甲醇-水作为流动相，并通过紫外线扫描，替硝唑在317 nm处有最大吸收度，氯己定在278 nm处有最大吸收度。兼顾二者吸收度的大小，故选择250 nm作为检测波长。研究结果表明，本方法简单可行，重现性好，能同时测定替硝唑氯己定洗剂中替硝唑、氯己定的含量。

本文所建立的方法能同时分离测定替硝唑、氯己定，该方法具有重现性好，灵敏度及准确度较高且操作简便、快速，被测组分损失少，试剂用量亦少的特点，在药物检验中具有实际应用价值。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社,2005.

[2]陈树声,俞蒙.乳酸左氧氟沙星葡萄糖注射液细菌内霉素的测定[J].中国医院药学杂志,2003,23(7):447.

[3]周谦,张春惠,张丽丽.应用替硝唑治疗细菌性阴道炎体会[J].中华中西医杂志,2004,5(3):118.

[4]李方实,俞斌.无机与分析化学实验[M].南京:东南大学出版社,2002.

[5]高素莲,周宁国.现代分离纯化与分析技术-在高分子材料研究中的应用[M].合肥:中国科学技术大学出版社,2004.

[6]曹绍聪,李钢洪,欧阳丽英.复方替硝唑洗液的制备及质量控制[J].中国药房,2005,16(9):673.

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1673-7210（2010）05（a）-229-02

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