清瘟败毒饮对温病暑热证大鼠基本生命体征的影响*

于征淼 许庆文 庞增园 周信杰 黎兴键

静脉注射脂多糖是一种常用的炎症动物模型制作方法，常用于制作全身炎症反应综合征、内毒素休克等重症模型[1，2]。本研究采用高温环境、醋酸铅致敏和静脉注射脂多糖制作大鼠温病暑热证模型。清瘟败毒饮由清代温疫学家余霖创立，具有清气泻火、泄热保阴、凉血解毒之功，方中石膏用量极大。本研究观察含有不同剂量生石膏的清瘟败毒饮对暑热证大鼠生命体征的影响。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 （1）试验药物：清瘟败毒饮，组方为生石膏小剂量15g、大剂量 100g，生地黄 7.5g，水牛角 15g，黄连 2.5g，栀子 5g，桔梗 5g，黄芩 5g，知母 5g，赤芍 5g，玄参 5g，连翘 5g，甘草 5g，丹皮5g，竹叶5g。药材均购自广州中医药大学第一附属医院药房。生石膏、水牛角加入300mL水中，同时以250mL水浸泡余药，先煎生石膏、水牛角，以武火将药煮沸后再以文火煎40min，然后加入余药及浸泡水，再次先武后文煎40min，约得75mL药液（小剂量清瘟败毒饮含生药1.20g/mL，其中含生石膏0.20g/mL；大剂量清蕴败毒饮含生药2.33g/mL，其中含生石膏1.33g/mL），置入4℃冰箱保存（≤3d），实验前加热至40℃。（2）动物：雄性SD大鼠86只（合格证号：SCXK粤2008-0020，粤监证字：2008A002），SPF级，购自广州中医药大学实验动物中心，饲养于广州中医药大学第一附属医院SPF动物实验室内，恒温（26±2）℃。实验前2d，每日将动物置于人工气候箱内6h，设定温度（32±0.5）℃，湿度（80±5）％，每日其余18h置于室温（30±2）℃，湿度（70±15）％的实验室中饲养，实验前8h禁止动物进食，实验前动物体质量（325±31）g。（3）试剂：脂多糖O55：B5（Sigma公司），使用生理盐水配置成 10mg/mL。（4）仪器：LRH-550-GSI智能型人工气候箱（韶关市泰宏医疗器械公司），RM-6000型生理多导仪（日本光电公司）。

1.2 方法 将86只大鼠随机分为空白对照组、休克对照组、小剂量清瘟败毒饮组各21只，大剂量清瘟败毒饮组23只。空白对照组、休克对照组予以生理盐水灌胃（13mL/kg），小剂量组、大剂量组分别予含有小、大剂量生石膏的清瘟败毒饮灌胃（13mL/kg）。灌胃后15min腹腔注射10％水合氯醛（3.5mL/kg）麻醉，2h后追加1/3剂量以延长麻醉效果。颈部正中切口，逐层分离暴露左侧颈总动脉，剥离迷走神经，左颈总动脉插动脉导管，接肝素帽，肝素盐水（125U/mL）抗凝，连接压力换能器与生理多导仪，监测血压、脉搏。动物麻醉和插管操作完毕后，尾静脉注射25mg/mL醋酸铅1mL/kg（空白对照组为等量生理盐水），静置稳定30min后，再由尾静脉注射10mg/mL脂多糖15mg/kg（空白对照组为等量生理盐水）。

1.3 检测指标 注射脂多糖前35、5min和注射脂多糖后30min、1h分别测量大鼠的肛温、脉搏、呼吸、收缩压、舒张压和脉压差；注射脂多糖后5、10、20min分别测量大鼠的脉搏、收缩压、舒张压和脉压差。实验完毕后处死动物，取肺脏和肝脏标本进行病理检查。

1.4 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件。计量资料以（±s）表示，采用方差分析。

2 结果

2.1 各组生命体征比较 见表1～表6。结果示不同组别之间肛温差异无统计学意义（P＞0.05），不同时点肛温差别明显（P＜0.01）。不同组别之间脉搏相近（P＞0.05），不同时点脉搏的差异有统计学意义（P＜0.01）。不同组别之间呼吸频率差异有统计学意义（P＜0.01），其中大剂量清瘟败毒饮组与其余3组在不同时点间呼吸频率差异具有统计学意义，且以与休克对照组之间为著（P＜0.05）。不同组别之间收缩压、舒张压相近（P＞0.05），不同时点间收缩压、舒张压的差异具有统计学意义（P＜0.01）。不同组别之间脉压差相近（P＞0.05）；不同时点间脉压差的差异具有统计学意义（P＜0.01）。

表1 各组肛温比较（℃± s）

表1 各组肛温比较（℃± s）

与注射脂多糖前35min相比，*P＜0.01；与注射脂多糖前5min相比，△P＜0.01；与注射脂多糖后30min相比，▲P＜0.01。下同

组 别空白对照组休克对照组小剂量清瘟败毒饮组大剂量清瘟败毒饮组n 21 21 21 23-35min 36.6±0.5 36.7±0.6 36.6±0.6 37.1±0.7-5min 35.7±0.6*35.9±0.6*35.8±0.7*36.3±0.9*▲30min 35.3±0.7*35.5±1.1*35.1±0.8*△35.7±0.9*1h 35.1±0.7*△35.2±0.8*△35.1±0.8*△35.6±1.0*△▲

2.2 各组病理检查结果比较 休克对照组动物可见肺急性炎症反应，肺泡间隔增厚，血管充血，炎细胞及红细胞渗出，部分肺泡扩张，肝细胞轻度水肿，见较多脂肪空泡，肝窦及肝索结构基本清晰；小剂量清瘟败毒饮组可见肺泡间隔增厚，血管充血，见炎细胞及红细胞渗出，肝组织结构基本正常，肝窦及肝索结构清晰，未见细胞水肿、脂肪变及坏死；大剂量清瘟败毒饮组的肺泡大小一致，间隔均匀，肺组织结构基本正常，肝窦及肝索结构清晰，未见细胞水肿、脂肪变及坏死。

表2 各组脉搏比较（次/min，±s）

表2 各组脉搏比较（次/min，±s）

与注射脂多糖后5min相比，○P＜0.01；与注射脂多糖后10min相比，●P＜0.01；与注射脂多糖后20min相比，□P ＜0.01。下同

组 别空白对照组休克对照组小剂量清瘟败毒饮组大剂量清瘟败毒饮组n 21 21 21 23-35min 421±50 418±47 425±74 433±54-5min 411±49*421±40*420±56*435±45 5min 430±50*△432±29*△413±34*△439±35*△10min 420±39△○426±23*△○413±35*△439±36*△20min 417±43*△○●424±24*△○●415±37*△○●435±35*○●30min 420±38△○●425±30*△○415±39*△○●440±38*△□1h 424±40*△○●□▲455±19*△○●□▲433±30*△○●□▲456±32*△○●□▲

3 讨论

清瘟败毒饮是气血两清法的代表方剂。余霖用其治疗瘟疫，“每每投之，百发百中”。该方在历史上为王孟英、张锡纯等多位医家所推崇。近年临床研究证明该方治疗流行性出血热、流行性脑脊髓膜炎、重症流感及传染性非典型肺炎等疾病效果良好[3～6]。清瘟败毒饮可以通过拮抗血小板降低及高黏综合征，调整cAMP、cGMP的比值，减轻脏器组织病理损害等途径治疗内毒素所诱发的家兔气血两燔证[7]。

为了探明清瘟败毒饮的作用机制，本研究对动物模型进行改良，通过高温环境、醋酸铅致敏和静脉注射脂多糖的综合方法制作了温病暑热证模型，通过颈总动脉置入导管，全面系统地观察了清瘟败毒饮对模型大鼠基本生命体征的动态影响。结果表明，大剂量清瘟败毒饮能够增快温病暑热证大鼠模型的呼吸频率，但对肛温、脉搏、收缩压、舒张压和脉压差影响不大。各组模型大鼠不同时点生命体征之间差异显著，随着时间的推移，肛温逐渐下降，注射脂多糖1h时脉搏较初始值增快，空白对照组的呼吸逐渐减慢，其他3组的呼吸则趋于增快，收缩压、舒张压和脉压差在注射醋酸铅（空白对照组为等量生理盐水）后多呈增高趋势，而在注射脂多糖（空白对照组为等量生理盐水）后多进一步增高。对于所有的生命体征来说，组别与时间之间均无交互效应。

表6 各组脉压差比较（mmHg，± s）

表6 各组脉压差比较（mmHg，± s）

组 别空白对照组休克对照组小剂量清瘟败毒饮组大剂量清瘟败毒饮组n 21 21 21 23 35min 20±7 22±7 24±11 21±7-5min 22±7*25±10*27±13*23±7*5min 23±7*24±8*27±15*21±7△10min 22±6*25±10*27±14*22±7 20min 24±6*△●25±10*26±12*24±8*○●30min 24±6*△●24±6*28±11*□25±8*△○●1h 26±6*△○●□▲27±8*△○●□▲28±10*□28±8*△○●□▲

表5 各组舒张压的动态影响（mmHg，±s）

表5 各组舒张压的动态影响（mmHg，±s）

组 别空白对照组休克对照组小剂量清瘟败毒饮组大剂量清瘟败毒饮组n 21 21 21 23-35min 76±19 73±14 70±12 76±15-5min 74±15*75±16*71±15 77±15 5min 77±16△78±17*△69±16△78±16*10min 78±16*△80±13*△○71±14○79±17*△20min 75±15○●77±15*△●70±12 75±17△○●30min 74±14*○●74±14○●□68±13*△●□75±16△○●1h 76±13△●▲79±15*△□▲72±14*○□▲75±15△○●

表4 各组收缩压的动态影响（mmHg，± s）

表4 各组收缩压的动态影响（mmHg，± s）

组 别空白对照组休克对照组小剂量清瘟败毒饮组大剂量清瘟败毒饮组n 21 21 21 23-35min 96±17 95±14 94±12 97±15-5min 96±14 101±15*98±13*100±16*5min 100±15*△102±16*96±18*△○100±15*10min 101±17*△105±15*△○99±14*100±17*20min 99±16*△○102±17*●95±12△○●99±17*30min 98±14*△○●□98±15*△○●□96±10*△○●100±16*1h 102±14*△○□▲105±20*△○□▲100±15*△○□▲103±15*△○●□▲

表3 各组呼吸频率比较（次/min，±s）

表3 各组呼吸频率比较（次/min，±s）

与大剂量清瘟败毒饮组相比，◇P＜0.05，◆P＜0.01

组别空白对照组休克对照组小剂量清瘟败毒饮组大剂量清瘟败毒饮组n 21 21 21 23-35min 77±10◇71±10◆73±11◇79±12-5min 76±8◇72±11◆78±15*◇85±15*30min 74±7*△◇70±9△◆76±14*△◇80±11△1h 74±9*△◆74±9*△▲◆77±13*◇85±15*▲

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