血清HBVDNA定量与肝组织病理的相关性研究

蒋忠胜,温小凤,陈 念,柯 柳,张 鹏,覃 川,李敏基,韦静彬,莫胜林

(广西医科大学第五附属医院(柳州市人民医院)感染病科,广西柳州545006)

血清HBV DNA是乙型肝炎病毒复制和传染性的直接指标,乙型肝炎病毒的持续复制可以刺激机体产生免疫反应,使肝组织的病变加重。为明确慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者血清HBV DNA定量与肝组织炎症活动度及肝纤维化程度之间的关系,本研究入选CHB患者223例,将其分为HBeAg阴性和阳性两组,同时行肝组织病理检查及血清HBV DNA定量检测,并对结果进行对比分析,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 病例资料 入选柳州市人民医院2007年10月-2009年10月期间住院的CHB患者223例,诊断符合2000年9月西安会议修订的《病毒性肝炎防治方案》标准[1],排除标准:(1)合并有人类免疫缺陷病毒者;(2)合并有肝外纤维化相关性疾病:风湿病、系统性红斑狼疮、慢性阻塞性肺病、肾功能衰竭、肿瘤等;(3)肝活组织检查前6个月接受过干扰素、核苷(酸)类似物抗病毒治疗者;(4)有肝活组织检查禁忌证者。按《慢性乙型肝炎防治指南》标准[2]将其分为HBeAg阴性组和HBeAg阳性组。HBeAg阴性组89例,其中男性76例,女性 13例;年龄 17-75岁;血清HBVDNA定量(5.18±1.79)log10IU/ml;HBeAg阳性组134例,其中男性89例,女性45例;年龄15-64岁;血清HBVDNA定量(7.13±1.01)log10IU/ml。

1.2 血清HBV DNA定量检测 应用聚合酶链反应(PCR)(罗氏公司Roche Light Cycler荧光定量PCR分析仪)检测HBV DNA,试剂盒购自深圳匹基生物工程股份有限公司,试剂灵敏度(正常值)为≤5.0×102IU/ml。

1.3 肝组织学检查 在B超多普勒定位引导下进行肝脏穿刺,用普通肝脏穿刺针进行常规1 s穿刺活检法抽吸活检,要求取材肝组织长度＞1.5 cm,10%甲醛固定,肝组织经固定、脱水、石蜡包埋、切片后按常规操作进行苏木素-伊红染色,由2位病理专科医生用显微镜盲法阅片。肝组织炎症活动度和肝纤维化分期诊断标准见表1[3]。

表1 慢性肝炎分级、分期标准

2 结果

2.1 基本情况 总共223例,男165例,女68例。年龄15-75岁,平均(32.9±12.4)岁。HBVDNA(3.0-9.27)log10IU/ml,平均(6.35±1.67)log10IU/ml。炎症活动度分级:G02例,G152例,G264例,G387例,G418例;肝纤维化分期:S025例,S136例,S262例,S377例,S423例。HBeAg阴性组89例,HBeAg阳性组134例。HBeAg阴性CHB组的HBVDNA为(5.18±1.798)log10IU/ml,HBeAg阳性CHB组的HBVDNA 为(7.13±1.01)log10IU/ml。

2.2 HBeAg阳性组HBVDNA与肝组织病理的关系 不同肝组织炎症活动度分级之间的HBVDNA无明显的差别(P＞0.05),而且二者无明显相关性(rs=-0.073,P＞0.05);不同肝纤维化分期之间的HBVDNA也无明显的差别(P＞0.05),而且二者也无相关性(rs=-0.113,P＞0.05);但随着肝组织炎症和肝纤维化分期的增加,HBVDNA有逐渐下降的趋势(见表2)。

2.3 HBeAg阴性组HBVDNA与肝组织病理的关系 不同肝组织炎症活动度分级之间的HBVDNA有明显的差别(P＜0.05),而且二者呈正相关(rs=0.327,P＜0.01);不同肝纤维化分期之间的HBVDNA也有明显的差别(P＜0.05),而且二者也呈正相关(rs=0.314,P＜0.01);随着肝组织炎症分级和肝纤维化分期的增加,HBVDNA进行性增高(见表3)。

表2 HBeAg阳性组的HBVDNA(log10IU/ml)与肝组织病理的关系

表3 HBeAg阴性组的HBVDNA(log10IU/ml)与肝组织病理的关系

3 讨论

血清HBV DNA定量检测反映了乙型肝炎病毒的感染状态和病毒复制水平,对于乙型肝炎的临床诊断、治疗方案的选择和疗效评价具有较重要的指导作用[4],但血清HBV DNA定量与肝组织学炎症活动度和肝纤维化分期的关系不明确,部分学者认为HBVDNA定量与肝组织病理损害之间无明显相关性[5];也有学者认为两者之间存在正相关[6]或负相关[7]。但是,以往的这些研究多未考虑到HBeAg的影响,由于HBeAg阴性和阳性CHB为两种不同类型,其在分子病毒学、流行病学、发病机制、自然进程和转归等方面都有着显著的不同[8]。因此研究血清HBV DNA定量与肝组织病理改变之间的关系,应将两者分开观察,研究结果将会更加客观、合理。

本研究结果显示HBeAg阳性CHB患者血清HBV DNA定量与肝组织炎症活动度和肝纤维化程度无关,其原因可能是HBeAg为HBV基因组的C区合成的可溶性多肽[3],为一种免疫调节因子,具有刺激不同细胞亚群、分泌不同细胞因子的作用,可抑制T细胞的细胞毒活性,形成对HBV的免疫耐受。血液中HBeAg含量高时,分泌性HBeAg对免疫细胞识别感染肝细胞进行负调节,使肝细胞损伤较轻[9];同时结果也显示随着肝组织炎症和肝纤维化分期的增加,HBVDNA有逐渐下降的趋势,其原因可能是随着机体免疫系统的健全,部分患者的免疫耐受期逐渐被打破,诱发机体的免疫应答,开始清除部分病毒,同时引起肝组织的炎症和肝纤维化。因此,对于部分HBeAg阳性 CHB患者来说,尽管其血清HBV DNA载量偏低,但其肝组织的炎症和纤维化程度可能较重,应该建议行肝组织学病理检查,明确其肝组织的炎症和纤维化程度,以指导抗病毒治疗。

本研究结果还显示HBeAg阴性CHB患者血清HBV DNA定量与肝组织炎症分级和肝纤维化分期之间存在明显正相关(相关系数分别为0.327和0.314),而且,随着肝组织炎症的加重和肝纤维化分期的增加,HBVDNA进行性增高。以往的研究大多认为HBeAg阳性是病毒在体内复制旺盛的一个重要指标,而HBeAg由阳性转为阴性是部分病毒被清除以及病情缓解的结果。但实际上并非所有的HBeAg阳性转阴性的感染者病情都趋于好转,相反,相当部分的慢性肝病患者为HBeAg阴性,仍具有较高的HBV DNA复制活力。其原因是HBV基因组前C区可出现nt1896位点变异,1896位核苷酸鸟嘌呤(G)→腺嘌呤(A)点突变,使28位密码子上的色氨酸(UGG)变异为终止密码子(UAG),从而使前C区启动的编码终止,病毒无法表达HBeAg,在血清学上表现为HBeAg阴性,而此时病毒复制并未停止。HBeAg阴性CHB患者中前C区A1896变异可能增强HBV DNA的复制,其原因可能为:①HBeAg前体蛋白有抗病毒复制的作用,而病毒变异使HBeAg前体蛋白合成障碍,使机体对HBV的抑制作用减弱;②HBV前基因组mRNA的已装信号主要集中在1 847-1 917 nt之间,该区序列可形成一茎袢结构,当发生nt1896变异,该茎袢结构更具强的热力学稳定性,从而增强HBV DNA的复制[10]。还有,HBeAg阴性CHB患者血液中由于缺乏HBeAg的干扰或抑制,致敏T细胞更容易识别肝细胞膜上的HBcAg靶位,对其进行较强的免疫攻击,引起较重的肝细胞损伤和HBV清除[10]。HBeAg阴性CHB大多经过了较长时期的病毒感染,经历过免疫较活跃的血清学转换,HBeAg消失,免疫耐受性降低,故病毒复制水平与肝组织病变程度较一致。因此,对于HBeAg阴性CHB患者来说,如其血清HBV DNA载量增高,提示其肝组织的炎症和肝纤维化程度加重,应该及时考虑抗病毒治疗,以延缓或阻止病情的进展。

综上所述,HBeAg阴性CHB患者的血清HBV DNA定量与肝组织病理损伤程度具有良好的一致性;HBeAg阳性CHB患者的HBV DNA定量不能反映肝组织病理情况,对此类患者应定期检查肝功能,有条件者及早行肝组织病理检查,以及早明确诊断。

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