朱鹮沙门菌感染的诊断

赵光明,杨光敏,张朝鹏,杨增岐

(1.西北农林科技大学动物医学院,陕西杨陵 712100;2.陕西省动物疫病预防控制中心,陕西西安 710016;3.西安市未央区动物卫生监督所,陕西西安 710016)

朱鹮(Nipponia nip pon)属鹳形目,鹮科,朱鹮属,是我国一级保护野生动物,世界一级濒危物种。近年来,通过人工繁殖,朱鹮种群数量不断扩大。目前,我国已解决了朱鹮人工饲养繁殖等方面的难题,但关于疾病方面的研究较少[1]。2009年4月27日,陕西省珍稀动物抢救饲养研究中心存栏的朱鹮发生不明原因死亡,截至4月30日,陆续死亡5只,发病死亡朱鹮均无典型临床症状。为查明死因,该中心将环号分别为335号和586号的2只病死朱鹮送陕西省动物疫病预防控制中心进行诊断。经实验室诊断,确诊为沙门菌感染[2]。通过本试验,为朱鹮人工饲养繁殖过程中疾病的研究与诊断提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 陕西省珍稀动物抢救饲养研究中心病死朱鹮2只,环号分别为335号和586号。

1.1.2 主要试剂 高致病性禽流感RT-PCR试剂盒(中国流行病学中心提供,批号20090317);新城疫RT-PCR试剂盒,北京世纪元亨动物防疫技术公司产品,批号ND 20090313;麦康凯平板,普通营养平板,营养肉汤,细菌生化鉴定用糖发酵管,革兰染液[3]。

1.1.3 主要仪器 Biometra PCR扩增仪,Wealtc凝胶成像系统,生化培养箱。

1.2 方法

1.2.1 病理剖检及样品采集 对送检的2只病死朱鹮进行病理剖检,同时无菌采集肺脏、肝脏、肾脏以及胸腔渗出液。

1.2.2 病原学鉴定 取病死朱鹮肺脏、肝脏和肾脏分别触片,进行美蓝染色,镜检;采集腺胃溃疡处虫体压片,镜检。

取病死朱鹮肺脏、肾脏以及胸腔渗出液按照试剂盒提供的方法和步骤,分别进行高致病性禽流感和新城疫病原的RT-PCR检测。

取无菌采集的病死朱鹮肺脏、肝脏和肾脏,分别接种于营养肉汤中进行增菌培养,经24 h后,取肉汤培养物分别接种于营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板,37℃培养24 h,观察菌落特征,选取典型菌落接种到营养肉汤进行纯培养,取培养24 h的纯培养物接种于糖发酵管中,37℃培养24 h～48 h,观察发酵情况[4]。

1.2.3 药敏试验 无菌条件下取分离纯化的细菌接种于整个营养琼脂平板,将氟苯尼考等6种常用药品的药敏片均匀贴放到平板上。将平板倒置于37℃温箱培养24 h,观察药物的抑菌情况,判定各种药物的敏感程度。

2 结果

2.1 病理剖检变化

经剖检,病死朱鹮肝脏呈土黄色,肿大,边缘不清,有出血斑,体腔有血凝块;肾脏肿胀发黑;腺胃有大小不一溃疡灶,溃疡灶可见暗黑色线状虫体;十二指肠和泄殖腔有不同程度出血;肺脏颜色正常,无出血和充血;喉头气管基本正常,无出血和黏性分泌物。

2.2 病原学鉴定结果

2.2.1 细菌分离鉴定

2.2.1.1 镜检 内脏触片,经美蓝染色镜检可见多量无芽孢短小杆菌。

2.2.1.2 细菌培养 病料接种于营养肉汤37℃培养24 h后,肉汤呈均匀混浊,于管底生成黏稠沉淀物,培养液顶层形成菌环;营养琼脂培养24 h后,可见淡灰白色、湿润、圆形,直径约1 mm～3 mm菌落,麦康凯琼脂培养基上形成淡黄色小菌落。

2.2.1.3 生化试验 经糖发酵等生化培养试验,分离菌能发酵葡萄糖、麦芽糖等,不发酵乳糖、蔗糖等,其生化特性与沙门菌相同(表1)。

表1 生化试验结果Table1 Results of biochem icalassay

2.2.1.4 药敏试验 分离菌对庆大霉素、氟苯尼考高度敏感,对卡那霉素、新霉素中度敏感。

2.2.2 高致病性禽流感和新城疫病原的检测 采集的肺脏、肾脏、胸腔渗出液等病料经RT-PCR检测,高致病性禽流感和新城疫均为阴性(图1和图2)。

图1 高致病性禽流感病毒RT-PCR电泳图Fig.1 RT-PCR Gel electrophoresisof HPA IV

图2 新城疫病毒RT-PCR电泳图 Fig.2 RT-PCR Gel electrophoresis of NDV

2.2.3 寄生虫鉴定 腺胃溃疡处压片镜检可见15 mm左右线虫虫体,初步鉴定为禽胃线虫。

2.3 处理措施

经过对死亡病鸟进行无害化深埋处理,对病鸟隔离饲养,选择敏感药物对症治疗,同群鸟加强饲养管理,对饲养环境、用具物品进行全面严格消毒,在饲料中添加敏感药物进行全群预防性给药等措施,经1周左右治疗后,取得良好效果,无新病例发生。

3 讨论

朱鹮属我国一级保护野生动物,在野外生存条件下抵抗力较强,不容易感染疾病,但是在人工饲养条件下,当在饲养管理不当、环境变化等时,机体抵抗力下降[5],容易发病。我中心曾于2006年诊断一起朱鹮新城疫与大肠埃希菌混合感染的病例[6]。

在剖检过程中,发现死鸟肌胃内有多量线虫虫体,经显微镜检,初步诊断为禽胃线虫。禽胃腺虫严重感染时,可导致患病鸟消瘦、贫血、抵抗力下降,有其他疾病混合感染时,可加重感染程度[7]。

沙门菌病是一种重要的人兽共患病,具有广泛的动物宿主。当环境卫生不良、过度拥挤、气候恶劣、发生其它病毒或者寄生虫感染时,可导致易感动物发病死亡。目前正处于朱鹮发情求偶季节,群体之间的争斗、饲养管理不当等均可引起或加重朱鹮的发病和死亡。

现已报道的朱鹮疾病有大肠埃希菌病、新城疫、结核病、瘤胃线虫等[8-9],加上本次确诊因沙门菌感染引起死亡,说明人工饲养环境下朱鹮疾病种类越来越复杂,在大力开展朱鹮人工繁殖过程中,疾病因素引起的死亡应引起足够的重视,建议在人工饲养繁殖以及保护工作中采取积极预防措施,确保朱鹮种群的健康。

[1]丁长青.朱鹮研究[M].上海:上海科技教育出版社,2004:32-50.

[2]何玉龙,杨增岐,阿依木古丽,等.人工饲养朱鹮沙门氏菌感染致死的病理学观察[J].中国农学通报,2005,21(6):15-17.

[3]任建设,黄治学,高更更,等.雏朱鹮大肠杆菌病的临床诊断及治疗[J].动物医学进展,2004,25(2):121.

[4]陆承平.兽医微生物学[M].3版.北京:中国农业出版社,2001:223-231.

[5]马军权,贾康胜,赵鹏鹏,等.朱鹮的应激反应及其防治[J].畜牧兽医杂志,2007,26(2):73.

[6]贾文孝,赵合平,赵光明,等.朱鹮新城疫与大肠杆菌混合感染[J].中国兽医杂志,2007,43(3):63.

[7]孔繁瑶.家畜寄生虫学[M].2版.北京:中国农业大学出版社,1997:208-215.

[8]张军风,常秀云,任建设,等.朱鹮新城疫病毒与大肠埃希菌混合感染的诊治[J].动物医学进展,2007,28(1):116-117.

[9]周宏超,范光丽,林 青,等.朱鹮胃瘤线虫病的病理学观察[J].西北农林科技大学学报,2001,29(5):27-29.