穿琥宁注射液对大鼠的长期毒性试验*

曾 艳,陈 薇,贺月林,缪 东

(湖南省微生物研究所,湖南长沙 410009)

穿心莲性寒、味苦,能清热解毒、消炎止痛,可用于急性细菌性痢疾、急性胃肠炎、扁桃体炎、咽喉炎等[1]。穿心莲提取物有效成分为二萜类内酯化合物。二萜类内酯化合物均难溶于水,故通过在内酯结构中引入不同的亲水基团,增加内酯的水溶性[2]。穿琥宁是由清热解毒中药穿心莲的提取物穿心莲内酯与琥珀酸酐脱水、酯化、成盐而形成的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐,具有解热、抗菌、抗病毒、抗炎及镇静作用。穿琥宁在穿心连内酯针剂中其抗炎解热作用是最强的。目前穿琥宁的临床使用效果已得到国内外医学专家的认可,但在兽医临床上末见使用报道。而且国内外对穿琥宁注射液长期服用有关毒理学方面报道较少。本课题组通过穿琥宁注射液急性毒性实验,测得其 LD50为 757 mg/kg体重[3]。穿琥宁注射液临床疗程为7 d,中药新药长期毒性试验的给药周期应是临床疗程的2倍～4倍[4-5]。故设计为期28 d的穿琥宁注射液长期毒性试验,现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物 20 mg/mL穿琥宁注射液,由湖南省微生物研究所兽药研究室配制。

1.1.2 实验动物 SD大鼠,雌雄各半,由湖南省疾病控制实验动物中心提供,许可证号:scxk(湘)2006-0002。

1.2 方法

取SD大鼠 80只,体重180 g～220 g。观察饲养1周,随机分为4组,每组20只,雌雄各半。给药剂量如下:①对照组(同体积生理盐水);②高剂量组:75.7 mg/kg(LD50的 1/10);③中剂量组:15.14m g/kg(LD50的 1/50);④低剂量组:7.57m g/kg(LD50的1/100)[6-7]。注射用水配制试验药物成所需浓度,腹腔注射给药,给药体积均为3.8 mL/kg,每天给药1次,连续给药28 d,每周称体重1次,每周根据体重调整给药量,并观察动物活动、毛发、粪便情况。给药28 d及停止给药后14 d(恢复期)时,每组每次随机各取10只大鼠(雌性各半)腹主动脉采血检测血常规、血液生化指标,而后放血致死,解剖取心 、肝 、脾、肺 、胃 、肾、睾丸(卵巢)称湿重以计算脏器指数。数据处理应用SAS 8.1统计学软件,统计学处理采用方差分析。

2 结果

2.1 临床症状及对体重的影响

2.1.1 临床症状 大鼠一般状况:各组大鼠给药期间行为、步态、毛色、粪便性状与空白对照组相比,未见异常变化,偶有拉稀症状,第2天停止拉稀,毛色白且有光泽,停药观察14 d亦未出现迟发性不良反应。说明穿琥宁注射液对SD大鼠一般状况无明显不良影响。

2.1.2 对大鼠体重的影响 试验期间每周称体重1次,计算第14天、28天以及恢复期各组大鼠的平均增重量,体重增长情况见表1。从表1中可知,各组大鼠在试验期间体重均有增加,各给药组大鼠体重增长略低于对照组,但与对照组比较无显著性差异(P＞0.05),可见长期腹腔注射穿琥宁注射液对SD大鼠体重无不良影响。

表1 穿琥宁注射液对SD大鼠体重增重的影响Table1 The effect of injection potassium dehyd roandrograpolide succinate on w eight gain in SD rats g

2.2 对血液学指标的影响

连续给大鼠腹腔注射穿琥宁注射液28 d以及停药饲喂14 d后,各实验组每次随机取大鼠10只(雌雄各半)腹主动脉采血,检测血红蛋白、白细胞、红细胞以及白细胞分类数。经统计处理各给药组与对照组比较无显著性差异(P＞0.05),停药14 d后各给药组与对照组比较也无显著性差异(P＞0.05)。表明本品对正常大鼠外周血象无显著影响,恢复期未见延迟性损害(表2,表3)。

表2 穿琥宁注射液对SD大鼠长期毒性试验28 d血常规指标的影响Table2 The effect of in jection potassium dehydroand rog rapolide succinate on indexes of hematology for 28 day s in SD rats

2.3 血液生化学指标的影响

给大鼠连续用药4周,测定穿琥宁注射液高、中、低剂量组和空白对照组大鼠在末次给药24 h后的血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(A LT)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(A LB)、球蛋白(GLB)、白/球比值、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、谷丙/谷草转氨酶的结果,各剂量组的各项指标与对照组比较,均无显著性差异(P＞0.05)。停药14 d的测定结果,各剂量组的各项指标与对照组比较,均无显著性差异(P ＞0.05)(表4,表5)。

表3 穿琥宁注射液对SD大鼠长期毒性试验恢复期血常规指标的影响Table3 The effect of injection potassium dehydroand rog rapolide succinate on indexes of hematology during recovery in SD rats %

表4 穿琥宁注射液对SD大鼠长期毒性试验28 d血清生化指标的影响Table4 The effect of in jection potassium dehydroand rog rapolide succinate on indexes of blood biochem istry for 28 day s in SD rats %

2.4 对脏器指数的影响

连续给大鼠腹腔注射穿琥宁注射液28 d以及停药饲喂14 d后,每次每组随机取10只(雌雄各半)大鼠腹主动脉采血后,取心、肝、肾、肺、脾、胃、睾丸和卵巢在滤纸上除去血迹,称湿重,计算脏器指数。结果表明各给药组的心、肝、肾、脾、肺、睾丸或卵巢的脏器系数与对照组比较差异不显著(P＞0.05)(表6,表 7)。

表5 穿琥宁注射液对SD大鼠长期毒性试验恢复期血清生化指标的影响Table5 The effect of injection potassium dehydroandrograpolide succinate on indexesof b lood biochemistry du ring recovery in SD rats

表6 穿琥宁注射液对SD大鼠长期毒性试验28 d脏器指数的影响Table6 The effect of injection potassium dehyd roandrograpolide su ccinate on indexes of organ for 28 days in SD rats

表7 穿琥宁注射液对SD大鼠长期毒性试验恢复期脏器指数的影响Table7 The effect of injection potassium dehydroandrograpolide succinate on indexes of organ du ring recovery in SD rats

3 讨论

穿琥宁为抗菌抗病毒类药物,主要用于肠道、呼吸道感染,具有解热、抗菌、抗炎、抗病毒、镇静作用。穿琥宁注射液抗病毒机制是脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐占据病毒复制过程中DNA与蛋白质结合位点,阻止蛋白质对DNA片段的包裹从而使病毒不能正常复制,最终达到抑制和杀灭病毒的作用[9]。本试验表明,穿琥宁注射液分别按 LD50的1/10、1/50、1/100对SD大鼠连续给药28 d,各剂量组大鼠状态良好,生长正常,未出现中毒症状及死亡,体重、血液学指标、血液生化学指标、脏器指数与对照组相比均无明显差异。本试验结果表明穿琥宁注射液连续给药28 d大鼠无不良反应,停药14 d后,亦未出现迟发性不良反应。王秀珍等[9]对穿琥宁注射液治疗急性支气管炎的临床研究表明,穿琥宁治疗前后血小板、BUN、A LT、AST均无明显改变,此结论与本试验结论一致。

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