四种抗菌药物对鲫鱼苗的急性毒性试验

2010-09-21刘晓强刘海侠梁欣欣

动物医学进展 2010年1期

刘晓强,刘海侠,梁拓,梁欣欣

(1.西北农林科技大学动物医学院,陕西杨陵 712100;2.西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨陵 712100)

鲫鱼(Carassius auratus)俗称鲫瓜子、喜头、鲋鱼、寒鲋等,隶属于鲤形目(Cyprininae)、鲤科(Cyprinidae)、鲤亚科(Cyprinidae)、鲫属 (Carassius),是我国分布广泛的优质经济鱼类之一。鲫鱼肉质细嫩、肉味甜美、价格低廉、营养价值很高,深受广大人民的喜爱[1]。鲫鱼性味甘、平、温,入胃、肾,具有和中补虚、除湿利水、补虚赢、温胃进食、补中生气之功效,药用价值很高。鲫鱼分布很广,除西部高原地区外,广泛分布于全国各地。鲫鱼的适应性非常强,不论是深水或浅水、流水或静水、高温水(32℃)或低温水(0℃)均能生存。即使在pH为9的强碱性水域,盐度高达4.5%的达里湖,仍然能生长繁殖。

长期以来,在水产养殖中,鱼类作为数量和种类最为庞大的经济动物,不可避免的在养殖过程中受到各种致病菌的侵袭。为此,人们采用各种抗菌药物抑制病菌对水产生产的影响,其中,甲砜霉素、痢菌净、培氟沙星和氟苯尼考属于常见药物。但这4种药物用于鱼病治疗的有效剂量和鱼类的安全性问题尚不清楚,因而往往在使用时感到难以掌握。为此,进行了甲砜霉素、痢菌净、培氟沙星和氟苯尼考对鲫鱼苗的急性毒性试验,以期为鲫鱼的健康养殖和病害防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用鱼试验用鲫鱼苗购自陕西省宝鸡市某渔场,平均体长2.4 cm±0.2 cm,体重4 g±0.2 g。试验前先在室内常规饲喂1周,然后挑选大小基本一致,体表完整,健康活泼、无病无伤的个体用于试验。在整个试验期间不投饵。

1.1.2 试验药物痢菌净,中国农业科学院中兽医研究所药厂,含量 98.9%,批号:20051014;甲磺酸培氟沙星,新昌县永兴化工有限公司,含量99.7%,批号:20050302;甲砜霉素,浙江海翔药业股份有限公司,含量 99.45%,批号:P-047-2005031;氟苯尼考,西安汉宝公司,含量 99.7%,批号:20060812。试验前用适当溶剂将各试验药物配成一定浓度的母液,正式试验时按适当比例稀释为所需浓度,将鱼苗从低浓度向高浓度逐渐放入。

1.1.3 试验条件试验期间水温为22℃～25℃,预试验及正式试验用水为曝晒3 d以上的自来水,pH为 7.36,溶解氧为 5.83 mg/L,硬度为6.62 mmol/L,试验容器为容积约5 L的塑料盆,每盆加水3 L,试验期间不投饵,不充气。

1.2 方法

为了确定药物浓度的大概范围,正式试验前先进行24 h的预试验,确定0～100%死亡的药物浓度范围[2-4]。正式试验按照改良寇氏法进行,以预试验所得全死浓度和全不死浓度为基础,按照等对数间距法选择一定的浓度梯度作正式急性毒性实验。分别设置5个质量浓度梯度,同时设1个对照组及3个平行组,数据取平均值(见表1)。试验开始后连续观察中毒症状、死亡时间、数量,并及时用吸管捞出死鱼,记录24、48、96 h各浓度鱼苗的存活和死亡情况。试验期间不投饵,每24 h更换试验液1次,换水量100%,以使实验期间药物的浓度尽量保持一致。试验对死鱼的判断标准为:以呼吸停止及对外界刺激无反应作为死亡的判断依据,即当试验鱼中毒后鳃盖完全停止活动,用玻璃棒轻轻刺激鱼体5 min无反应,即确定为死亡[5-10]。

根据急性毒性试验结果,采用改良寇氏法计算得出氟苯尼考、培氟沙星、甲砜霉素、痢菌净对鲫鱼在24 h、48 h、96 h接触时间内的半数致死浓度(LC50)和安全浓度(SC)。

LC50的计算按综合计算法公式计算

式中xm为最大死亡率组剂量对数;d为组距(相邻两组剂量比值的对数);p为各组死亡率,∑P为各组死亡率总和。

安全浓度估算公式[5-6]:SC=48 h LC50×0.3/(24 h LC50/48 h LC50)2mg/L

表1 试验药物浓度Table 1 The concentrations of experimental drugs

2 结果

2.1 培氟沙星对鲫鱼苗的急性毒性试验结果

由表达式可知,培氟沙星对鲫鱼毒性相对较小。当培氟沙星浓度为2 499.87 mg/L和2 200.21 mg/L时,鱼的游动稍显迟缓,并且随着时间的延长这种情况加剧,2 499.87 mg/L浓度组5 h时出现死亡现象,14 h时死亡达到50%,21 h时全部死亡。2 200.21 mg/L浓度组24 h死亡率为80%,48 h的死亡率为100%,以后再无死亡。1 936.46 mg/L浓度组24 h死亡率为50%,48 h的死亡率为60%,以后再无死亡。1 704.33 mg/L浓度组和1 500.00 mg/L浓度组鱼苗的活动状况与对照组基本相似,死亡率较低(表2)。

表2 培氟沙星对鲫鱼苗的急性毒性试验结果Table 2 Acute toxicity experimental results of pefloxacin to Carassius auratus fries

2.2 氟苯尼考对鲫鱼的急性毒性试验结果

氟苯尼考对鲫鱼的急性试验结果见表3。由表3可知,当氟苯尼考的浓度为1 898.11 mg/L时,鲫鱼苗表现不安,警觉,游动缓慢,偶尔有浮头、贴壁现象,4.5 h时出现死亡,19.5 h时死亡率达50%,23 h时全部死亡。1 528.99 mg/L浓度组24 h死亡率为80%,48 h的死亡率为 90%,以后再无死亡。1 232.47、993.13 、800.00 mg/L 3 个浓度组死亡率均在50%以内。

表3 氟苯尼考对鲫鱼苗的急性毒性试验结果Table 3 Acute toxicity experimental results of florfenicol to Carassius auratus fries

2.3 甲砜霉素对鲫鱼的急性毒性试验结果

甲砚霉素对鲫鱼的急性毒性结果见表4。从试验结果来看,使用甲砜霉素和氟苯尼考后从高浓度到低浓度鱼的表现相似,只是3个较高浓度组浮头现象相对严重。

另外,由表3和表4可知,氟苯尼考和甲砜霉素对鲫鱼苗的半致死质量浓度48 h后处于稳定值,即48 h后存活的鱼很少再随时间的延长而出现新的死亡。说明鲫鱼苗对漂白粉的适应性和耐受性较强且毒性积累较小。

表4 甲砜霉素对鲫鱼苗的急性毒性试验结果T able 4 Acute toxicity experimental results of thiamphenicol to Carassius auratus fries

2.4 痢菌净对鲫鱼的急性毒性试验结果

由表5可知,鲫鱼苗对痢菌净较为敏感,只有125.00 mg/L浓度组的鱼苗活动相对正常,其他浓度组的鲫鱼苗均出现浮头,兴奋不安、惊厥,鱼体弯曲等神经症状,且随浓度的增加而逐渐严重。在短时间内(24 h)死亡率较高,说明痢菌净在短时间对鲫鱼苗的毒性较大。同时也发现,鲫鱼苗在高浓度组中即使未死亡,但也出现游动缓慢、翻肚倒挂等现象,说明痢菌净的毒性较大。

表5 痢菌净对鲫鱼苗的急性毒性试验结果Table 5 Acute toxicity ex perimental results of equindox toCarassius auratusfries

2.5 4种抗菌药物对鲫鱼的毒性试验结果分析

由表6可知,鲫鱼苗对痢菌净最为敏感,其在24、48、96 h的半数致死浓度与其他3种药物的相应半数致死浓度均存在极显著差异(P＜0.01)。甲砜霉素与氟苯尼考在不同时间的相应半数致死浓度差异不显著(P＞0.05),这可能是由于二者均属于氯霉素类药物,结构及抗菌机理等相似。培氟沙星与甲砜霉素和氟苯尼考之间的半数致死浓度存在显著差异(P＜0.05)。根据测定的结果,参照鱼类急性毒性试验毒性分级标准可以判定,甲砜霉素、氟苯尼考、培氟沙星对鱼类均属于低毒化合物,培氟沙星的毒性最小,而痢菌净属于中等毒性,安全范围较小,所以在应用时应予以足够重视。

表6 各种药物的半致死浓度和安全浓度Table 6 The half lethal concentrations and safe concentrations of four drugs

3 讨论

试验结果表明,所选择的培氟沙星、氟苯尼考、甲砜霉素和痢菌净均对鲫鱼有一定的致死性,且致死率和浓度及接触时间呈一定相关性,随着浓度的增加及处理时间的延长,鲫鱼的死亡率均呈上升趋势,只是在48 h后除痢菌净外,其余3种药物的死亡率减少或不死亡。而痢菌净对鲫鱼的毒性较大,短时间(24 h)死亡率较高,且与接触时间呈正相关。

3.1 培氟沙星对鲫鱼苗的毒性

培氟沙星属于第3代喹诺酮类药物,是一种新的甲-4-哌嗪喹诺酮类衍生物,具有广谱、高效、低毒的特点,吸收快、生物利用度好、组织药物浓度高、体内分布广、维持时间长,且其抗菌机理独特,不易产生耐药性。李军等[11]报道培氟沙星对荧光假单胞菌和肠型点状产气单胞菌的MIC为1.25 mg/L。试验结果表明,4种抗菌药物中培氟沙星对鲫鱼苗的毒性最小。

3.2 氟苯尼考和甲砜霉素对鲫鱼苗的毒性

氟苯尼考和甲砜霉素都属于氯霉素的同类物,都具有广谱抗菌作用,且都克服了氯霉素的一些不足,在临床上使用广泛。特别是氟苯尼考作为一种动物专用抗生素,近年在水产养殖业中的应用越来越广泛。吴万红[12]报道其在治疗虹鳟鱼体表感染时仅用4 mg/L～8 mg/L即可获得满意效果。而本试验得到的其安全浓度是304.13 mg/L,因此,其在水产养殖当中可安全使用。