HPLC法测定儿炎消栓剂中连翘苷的含量
2010-09-21杨飞雪
杨飞雪 陈 滨
哈尔滨市红十字中心医院（150076）
儿炎消栓剂是添加了金银花、连翘等中药材成分制成的儿童用药，主要作用为清热解毒，轻宣风热，临床效果较好。连翘为中国临床常用的传统中药之一，具有清热解毒，消肿散结，疏散风热等功效，连翘苷是连翘的主要有效成分之一，本研究采用高效液相色谱法检测连翘苷含量，与《中国药典》一部中连翘药材含量测定方法[1]对应，结果准确、重现性好,现将相关资料报道如下。
1 仪器与材料
1.1 仪器
高效液相色谱仪：美国Waters公司2695分离单元、2996二极管阵列检测器、EMPOWER32色谱工作站；紫外可见分光光度计：瓦里安公司CARY 100型。
1.2 材料
乙腈：（色谱级）上海迈瑞尔化学技术有限公司公司；连翘苷对照品（批号：110821-200610）：中国药品生物制品检定所。水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。
儿炎消栓剂为自制样品。
2 方法
2.1 色谱条件
色谱柱：迈瑞尔公司产DIAMONSIL C18柱 （5μ 200×4.6mm）；流动相：乙腈-水（35：65），柱温：35℃；流速：1mL/min；进样量：10μL。检测波长：取连翘苷对照品溶液，在230～320nm光谱扫描，其最大吸收波长为274nm，因此选用274nm为检测波长。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液
精密称取减压干燥至恒重的连翘苷对照品，加甲醇制成每1mL含35ug的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2 待测品溶液
精密称取样品约1g，置小研钵中，加少量50%甲醇充分研磨，使分散均匀，再移至50mL容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，置高速离心机中3000r/min，10min，放至室温，上清液以0.45μm滤膜过滤，即得。
2.2.3 阴性空白溶液
按处方称取除连翘外的其他药材，制备为空白样本，同时制备阴性空白溶液。
2.3 专属性检测
分别取阳性对照品溶液、检测品溶液及阴性空白溶液，在上述色谱条件下测定。
2.4 线性关系考察
称取连翘苷对照品15.8mg，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释至刻度并摇匀，吸取10～50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，精密量取连翘苷对照品溶液1mL、2mL、4mL、8mL、10mL、20分别定溶到10mL容量瓶中（6.32μg/mL、12.64μg/mL、25.28μg/mL、50.56μg/mL、63.2μg/mL、126.4μg/mL）摇匀，按上述色谱条件，依次进样，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，求算得回归方程。
2.5 稳定性试验
精密吸取待测品溶液10μL，按测定方法于室温放置0、1、2、4、8、10h后按上述色谱条件进样，含量变化以浓度计算相对标准方差。
2.6 精密度试验
用5.56μg/mL的连翘苷对照液按上述色谱条件连续进样8次，以峰面积计算相对标准方差。
图1 连翘苷的对照品溶液
2.7 回收率试验
采用加样回收测定法，按上述色谱条件测定。
2.8 样品的测定
按上述测定方法，对3个不同批次样品进行连翘苷含量测定。
3 结 果
在该色谱条件下，连翘苷峰形良好，其他成分对测定无干扰，结果见图1。
表1 回收率测定结果（n=9）
3.2 线性关系
以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，得回归方程：Y=2.41×104Χ+9.04×103，Y-峰面积 X-对照液浓度。线性关系系数r=0.9999，表明在6.32μg/ml～126.4μg/ml浓度间线性良好。
3.3 稳定性
根据上述色谱条件，浓度的含量变化的RSD为0.35%（n=6）,说明供试品溶液在10h内保持稳定。
3.4 精密度
按上述色谱条件连续进样8次，通过对连翘苷的精密度检测，RSD为0.21%（n=8）。结果表明：本法具有良好的精密度。
3.5 回收率
结果见表1。
此方法表明：本法回收率良好。
3.6 样品含量
连翘苷的平均含量为1.72mg/g，RSD为2.4%（n=3）。
4 讨 论
波长的选择，精密称取减压干燥至恒重的连翘苷对照品，用流动相溶解配成标准溶液，对连翘苷标准溶液进行全波长扫描，结果表明标准溶液在274nm处有最大吸收，故选择检测波长为274 nm。根据对3批样品的测定值，暂定儿炎消栓剂中的连翘苷含量为1.72mg/g。综上可见，测定方法准确、可靠、重现性好，可以控制儿炎消栓剂中连翘苷的质量。
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2005年版.一部[M].北京：化学工业出版社,2005：117.
[2]郭用庄,刘法锦,翟旭峰等.HPLC法测定连翘配方颗粒中连翘苷的含量[J].中药材,2003,26(06)：431-432.
[3]曹音,石琳,宋志华等. HPLC法测定连翘水提液中连翘苷的含量[J].广西中医学院学报,2008,11(1)：54-55.
