雏番鸭曲霉菌病的鉴别诊断与药敏试验
2010-09-20吴迂夫诸明涛许怀正
吴迂夫,诸明涛,许怀正,张 闻
(余姚市舜昌动物医院,浙江余姚 315400)
余姚市某养殖户饲养雏番鸭 500羽,10日龄开始出现发病,临床上以气喘、咳嗽等呼吸道症状为主要特征。先后发病 300多羽,发病率 60%,死亡 100多羽,死亡率 20%。经余姚市某动物医院剖检、实验室诊断为烟曲霉菌引起的雏番鸭曲霉菌病。现总结报告如下。
1 临床症状及剖检病变
病鸭主要表现为气喘、咳嗽等呼吸道症状,精神不振,食欲减退,绒毛松乱。剖检病死鸭可见肺瘀血、水肿,有散在粟粒至绿豆大小的黄白色或灰白色结节,质地较硬。气囊壁上可见大小不等的干酪样结节或斑块。气囊壁明显增厚,干酪样斑块增多。肝脏肿大、瘀血,表面可见黄白色或灰白色结节。肾脏肿大、瘀血。
2 实验室检查
2.1 触片镜检 无菌操作采集心、肝、脾、肺和肾组织触片,革兰氏染色镜检,未见致病菌存在。
2.2 细菌培养 无菌操作采集病死鸭肺、肝、脾、肾组织,分别接种于普通琼脂、麦康凯和血琼脂进行细菌培养,置 37℃恒温箱,培养 24~48h后观察,未见致病菌生长。
2.3 压滴标本法检查 采集结节置载玻片上,由切面刮取干酪样坏死组织,或由病变组织表面刮取霉菌斑,或用铂金针钩取纯培养物置载玻片中央,加乳酸酚棉蓝染色液或生理盐水 1~2滴,用大头针撕开组织块或菌团,加盖玻片(注意勿产生气泡),制成压滴标本。如果组织碎块较硬,可改用 20%氢氧化钾(KOH)溶液 1~2滴,经火焰微微加温后压片。可见染成蓝色的霉菌菌体。
2.4 分离培养法检查 取沙保劳(Sabouraud)氏培养基和马铃薯培养基 (PDA)培养皿若干个(通常每份样品各 2个),做好标记。无菌操作接种培养基后,将培养皿放入 37℃恒温箱内培养 36h,可见菌落出现。
马铃薯葡萄糖琼脂培养基培养结果:经培养 24 h后,在培养基上形成隆起、放射状、圆形、白色菌落;培养 48h后,在培养基上形成中间墨绿色,周围白色的放射状菌落,菌体背面中间成橘黄色;培养72h后,整个菌体呈墨绿色,菌体背面呈黄褐色;乳酸酚棉蓝染色液镜检结果可见蓝色菌体,放射状菌体带有菌丝,符合烟曲霉菌的形态特点。
2.5 染色镜检 用无菌手术刀割取小块单个真菌菌落置载玻片上,用 50%酒精湿润整个菌落,30s后,蒸馏水细心清洗 3次,稀释酒精后,用滤纸吸干,直接滴加乳酸酚棉蓝染色液数滴,覆盖整个菌落。2~3min后,盖上盖玻片,置显微镜下观察,可见分生孢子头短柱状,浅蓝绿色至暗绿色,菌体壁光滑,近顶端渐粗大,顶囊呈烧瓶状,绿色,小梗单层,较长布满顶囊表面 2/3,排列呈木栅状,无子囊(如图 1和 2)。
经分离培养和染色镜检,确诊为烟曲霉菌。
3 药敏试验
兽医临床应用的抗真菌药有灰黄霉素、制霉菌素及克霉唑等。制霉菌素抗真菌的体外最低抑菌浓度(MIC),详见表 1。
表1 制霉菌素抗真菌的体外抑菌浓度(MIC)
4 小结与讨论
禽曲霉病可分为急慢性两类:急性曲霉病的特点通常以幼禽群多发,发病率和死亡率较高;慢性曲霉病则主要发生于成年种禽,尤其是火鸡。
引起禽曲霉病的主要病原为烟曲霉和黄曲霉,可能涉及的曲霉还有土曲霉、灰绿曲霉和黑变曲霉等。曲霉分布广泛,常见于腐烂植物、土壤及谷粒饲料中。
根据病史及流行病学调查,引起雏番鸭气喘等呼吸道症状者大多数为曲霉菌感染所致。实验室诊断主要应用沙保劳(Sabouraud)氏培养基 (SDA)和马铃薯培养基 (PDA)分离真菌,根据生长特点、形态特征及染色镜检可见单层,较长,布满顶囊表面2/3,排列呈木栅状,绿色,鉴定为烟曲霉菌。绝大多数曲霉菌为空气污染菌系条件致病菌。临床上引起家禽感染曲霉菌病,其霉菌结节大部分出现在肺部、气囊、肠道和脑部,极少出现在内脏器官。
防制本病的关键在于加强饲养管理和卫生消毒,消除各种发病诱因。严禁使用发霉的垫料和饲料是预防曲霉菌病的主要措施;垫料要保持干燥,尤其是阴雨季节,防止霉菌生长繁殖,采用 1∶2000硫酸铜水溶液代替所有饮水有助于控制疾病的传播,也可用制霉菌素防治本病,剂量为每 100羽雏鸭每次使用 50IU,每日 2次,连用 2~4d。