甲胎蛋白异质体测定对原发性肝癌诊断的作用

龚玉华 王捷婷 高玉凤 张建军 王雪梅 熊 茜

镇江市第三人民医院检验科（212000）

20世纪70年代，Purves发现甲胎蛋白在凝胶电泳时有不同的迁移率，即存在不均一性的糖链异质性。而AFP分子糖链异质性与其组织器官来源有关，不同生理病理状况产生不同的糖链结构，且具有肿瘤特异性。其中，AFP-L1主要存在于良性肝病，AFP-L2来自孕妇，AFP-L3主要由肿瘤细胞产生[1]。本文利用微量离心柱法测定AFP-L3，探讨其在慢性肝炎、肝硬化及原发性肝癌诊断中的价值。

1 对象与方法

1.1 对象

本组患者共52例，分为4组。其中，肝癌23例，男18例，女5例，年龄36～74岁，平均57.1岁；肝硬化24例，男17例，女7例，年龄27～82岁，平均51.1岁；慢性肝炎21例，男16例，女5例，年龄36～67岁，平均47.6岁；肝癌手术后17例，男14例，女3例，年龄36～74岁，平均58.2岁。原发性肝癌病例为本院住院患者，慢性肝炎肝硬化为本院的门诊或住院患者，所有病例均经临床、B超或CT检查确诊，部分患者经手术后病理证实。

1.2 方法

清晨空腹抽取静脉血3～4mL，3000 r/min离心10min，分离血清置-20℃ 冰箱贮存待检。AFP-L3检测试剂由北京热景生物技术有限公司提供。按照试剂说明书的要求，在柱内预先装有耦联了小扁豆凝集素（1ens culi-naris lectin，LCA）的琼脂糖微量离心柱，加入待检稀释血清，可特异性地结合AFP-L3，经离心清洗洗去不结合的甲胎蛋白，然后加人洗脱液，经过离心后收集洗脱液中含有的AFP-L3，用化学发光法检测分离前血清中甲胎蛋白和洗脱液中AFP-L3的含量，计算AFP-L3占AFP总量的百分比，以AFP-L3超过10%作为阳性判断界限。

1.3 统计学分析

采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。计量资料比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

肝癌、肝硬化、慢性肝炎及肝癌术后患者AFP-L3测定结果，见表1。

表1 各组患者AFP-L3检测结果比较（±s，%）

表1 各组患者AFP-L3检测结果比较（±s，%）

注：各组间比较，P＞0.05

组别 例数 AFP-L3 阳性例数 阳性率（%）肝癌 23 29.89±20.67 17 73.9肝硬化 24 13.41±11.91 6 25.0慢性肝炎 21 7.39±5.89 3 14.3肝癌术后 17 7.38±6.58 2 11.8

3 讨 论

甲胎蛋白是一个单链糖蛋白，在凝胶电泳时AFP有不同的迁移率。随着生物化学及其相关分析技术的发展，发现AFP分子的糖链差异性与外源性凝集素的亲和力不同。目前检测AFP-L3的方法主要有植物凝集素亲和层析、亲和印迹法、免疫交叉电泳技术等，但上述这些方法操作繁琐，对技术要求高，限制了AFP-L3在临床的常规检测。本研究采用国产的微量离心柱法试剂，可以快速、简便地获得AFP-L3的含量，用化学发光免疫法进行定量检测，方法简便，利于临床推广，可以对肝癌的早期诊断发挥重要的作用。

肝癌起病常隐匿，是病死率仅次于胃癌、食管癌的第三大恶性肿瘤，癌细胞形成发展到有自觉症状，大约需要2年时间，在此期间，患者可无任何症状或体征，多在肝病随访中或体检普查中应用AFP及B超检查偶然发现肝癌，此时患者既无症状，体格检查亦缺乏肿瘤本身的体征。肝癌一旦出现症状，多数患者确诊时已进入中晚期。

我国是病毒性乙型肝炎高发区，乙肝的反复发作会导致正常肝细胞越来越少，发生肝脏纤维化最终发展为肝硬化，甚至肝癌。肝癌患者中约有1/3的患者有慢性肝炎史，肝癌患者中合并有肝硬化者50%～90%。因此，早期发现、定期检测肝硬化转为肝癌的预测指标尤为重要。近年来肝癌的发病率呈明显上升趋势，治疗肝癌的关键是强调早期发现、早期诊断、早期治疗。

甲胎蛋白作为肝癌的诊断标志物已在临床上应用多年，许多良性肝病中AFP也会升高，在病理状态下，AFP也可在胃癌、肺癌、胰腺癌、胆道肿瘤等患者的血清中升高，仅凭血清AFP升高和影像学检查，无法鉴别此AFP是来源于癌细胞，还是硬化增生结节，难于区分良恶性肝病，对原发性肝癌的早期诊断带来困难，从而延误病情。70年代，Purves发现不同来源的AFP由于其糖链差异与小扁豆凝集素LCA的亲和力不同，利用这种差异，将AFP分为AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3三类。AFP-L3又称甲胎蛋白异质体。临床研究发现AFP-L3与原发性肝癌（HCC）关系密切，有助于HCC的早期诊断和鉴别诊断[2,3]。

AFP-L3对于良恶性肝病的鉴别诊断及对原发性肝癌尤其是小肝癌诊断极有价值[4]。屠振兴等[5]对AFP 20～400＞µg/L、影像学检查阴性的慢性肝病患者进行AFP-L3的动态观察，发现AFP-L3在影像学诊断和临床确诊肝癌前3～28个月开始升高，而同时AFP浓度却没有较明显的变化。有文献报道，AFP-L3阳性预测肝癌发生的正确率高达94%，如果检测AFP-L3为阴性，就基本可以排除。

本文以AFP-L3（%）≥10为阳性判断界限，原发性肝癌血清检测的敏感性为73.9%，均值29.89，与肝硬化、慢性肝炎组的敏感性25%、14.3%，均值13.41、7.39相比，差异有统计学意义（P＜0.001）。在肝癌23例中，3例为低浓度AFP，但AFP-L3均异常。在肝硬化6例AFP-L3异常中，4例为低浓度AFP，在出院时未见有肝细胞癌的临床诊断。23例肝癌患者中，17例经过手术，术后1个月，15例肝癌患者AFP-L3＜10%，有2例AFP-L3仍然异常。在慢性肝炎21例中，有3例AFP-L3异常。

AFP-L3与原发性肝癌特征相关，因此，作者认为临床上检测AFP-L3对鉴别原发性肝癌与慢性肝炎、肝硬化是有帮助的。同时对影像学检查尚未发现肝癌的特征性占位性病变时，检测AFP-L3可以作为预测肝癌的预警的指标，对于肝癌术后的复发提供实验室诊断依据。由于本文研究的病例偏少，未能对AFP-L3＞10%的肝癌术后患者是否复发作出总结。对AFP-L3超过10%的这些高危的慢性肝炎、肝硬化、肝癌术后患者进行随访和动态观察，严密监测非常必要。

[1]Taketa K.A—Fetoprotein：reevaluation in hepatology[J].Hepa—tology,1990,12 (6)：1420-1432.

[2]殷正丰.甲胎蛋白异质体作为肝癌标志物的临床应用[J].实用肿瘤杂志,2004,19(1)：1-4.

[3]陈燕.甲胎蛋白异质体在肝癌诊疗中的临床应用[J].福建医药杂志,1999,21(6)：95-97.

[4]青柳丰.肿瘤标志物的临床诊断意义及展望——甲胎蛋白(AFP)L3组分[J].日本医学介绍,2005,26(12)：49-50.

[5]屠振兴,吴孟超,崔贞福.甲胎蛋白异质体对原发性肝癌早期诊断的研究[J].第二军医大学学报,1985,4 (6)：193-196.