2036灵芝孢子（全破壁）胶囊长期毒性试验报告

蔡 飒* 赵安东 孙圆媛 钟志强

1 深圳大学医学院组织学与胚胎学教研室（518060）

2 北京市药品检验所药物安全评价中心（100035）

3 Holistol有限公司

灵芝被公认为扶正固本，滋补强身作用的传统中药。灵芝孢子粉是灵芝的精华，其有效成分远远超过了灵芝[1]。孢子是灵芝发育后期弹射出来的种子，破壁灵芝孢子粉更有助于吸收。大量的研究表明灵芝孢子粉具有抗肿瘤、增强免疫功能、调节血脂以及对神经、心血管和呼吸系统有调节改善作用[2-5]。2036灵芝孢子（全破壁）胶囊作为知名度很高的保健产品，使用多年，确有明显治疗和保健效果且未见任何毒副作用，但是目前本品尚没有长期服用的毒性研究资料及完整的安全性评价数据。本研究对2036灵芝孢子（全破壁）胶囊进行了完整的现代毒理学评价。参照中药新药研究指南，进行了大鼠长期毒性试验，为本品安全性评价提供明确理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试品

2036灵芝孢子（全破壁）胶囊，批号：B061202，由香港活力健国际有限公司提供。

1.1.2 动物

SPF级5～6周龄SD大鼠120只，体质量100g～130g，雌雄各半，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物质量合格证号：SCXK（京）2007-0001。SPF级大鼠繁殖颗粒饲料和高压消毒饮用水自由饮食，按性别分笼，每笼3只，观察10d后用于试验。

1.2 方法[6,7]

1.2.1 试验分组和剂量设定

试验设2036灵芝孢子（全破壁）胶囊高、中、低剂量组和1个阴性对照组。根据本品人用推荐剂量，即成人每天最大用量为5.4g（按照60kg体质量计算，则为90mg/kg），以及本品最大灌胃浓度，设计高、中、低剂量分别为人日用最高剂量的60倍、30倍和15倍，即5.40g/kg、2.70g/kg和1.35g/kg。大鼠阴性对照组给予10mL/kg去离子水。每组雌雄各15只。

1.2.2 给药途径及方法

采用与人用相同的灌胃给药途径。每日按时对每只大鼠灌胃给药1次，给药周期为临床用药疗程的3倍。采用1周连续给药6d，休息1d的给药方式。

1.2.3 观察指标

1.2.3.1 一般症状情况观察

每天2次（给药前、后）观察动物的一般状态，包括外观、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便等；每周测定1次动物的体质量及7d进食量。

1.2.3.2 血液学和血清生化学检查

分别于给药12周、26周、停药4周后，进行血液学和血清生化学指标的检测。血液学指标包括白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白含量测定（HGB）、血小板计数（PLT）和白细胞分类（LY%、MO%、GR%）。血清生化学指标包括血清尿素（Urea）、肌酐（Crea）、总胆红素（T-BIL）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、丙氨酸氨基转换酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、总胆固醇（T-CHO）、三酰甘油（TG）。

1.2.3.3 解剖检查及组织病理学检查

全部实验组动物完全放血处死，大体观察后进行解剖，取心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、肾上腺、脑、睾丸、附睾、子宫、卵巢进行称量，计算相对脏器系数（以g/100g体质量或mg/100g体质量）并进行组织病理学检查。

1.3 统计学分析

病理组织学检查进行定性观察。体质量、摄食量、血液学、血清生化学和脏器系数均为计量资料，用均数±标准差（±s）表示，根据方差分析结果，进行t检验。选用SPSS统计软件，比较各给药组与阴性对照组均数的差异显著性。

2 结 果

2.1 对大鼠一般活动状况及死亡的影响

试验期间，没有发现明显的与受试物相关的动物异常活动，所有剂量组动物的饮食、饮水、粪便等均正常。未发生因给予受试物作用引起大鼠濒死和死亡的毒性反应。

2.2 对大鼠体质量的影响

大鼠连续灌胃给药26周，各给药组雄性动物的体质量与阴性对照组动物体质量比较，未见显著性差异（P＞0.05）；在给药第7周，高剂量组雌性动物的体质量与阴性对照组动物的体质量比较，增长较少，体质量差异有显著性（P＞0.05），其它各受试组雌性动物与阴性对照组动物体质量比较，未见显著性差异（P＞0.05）。停药4周内观察，各组动物体质量未见显著性差异（P＞0.05）。

2.3 对大鼠摄食量的影响

大鼠连续灌胃给药26周，高剂量组在给药第10、14周，其摄食量较阴性对照组有所减少，差异有显著性（P＜0.05）。其它各给药组动物在其它时间的摄食量与阴性对照组动物摄食量比较，差异均未见显著性（P＞0.05）。

2.4 对大鼠血液学指标的影响

大鼠灌胃给药12周、26周、停药4周后，检测动物的血液学指标，包括：WBC、RBC、HGB、PLT、LY%、MO%、GR%，各给药组动物血液学各项指标均与阴性对照组相近，差异无显著性（P＞0.05），见表1。

2.5 对大鼠血清生化学指标的影响

大鼠连续给药12周、停药4周后，测定血清生化学各项指标，包括：Urea、Crea、T-BIL、TP、ALB、GLU、ALT、ALP、AST、T-CHO、TG，与阴性对照组比较，未见显著性差异（P＞0.05）。给药26周后血液生化学指标检测结果表明：高剂量组能够引起大鼠血清中TG含量降低，与阴性对照组比较，差异有显著性（P＜0.05）；高、中、低剂量组大鼠血清中Crea含量均偏高，与阴性对照组比较，差异有显著性（P＜0.05，P＜0.01），见表2。

2.6 对大鼠脏器系数的影响

大鼠连续给药12周，各给药组大鼠的主要脏器系数与阴性对照组比较，差异未见显著性（P＞0.05）；大鼠连续给药26周后，中、高剂量组的肝脏系数降低，与阴性对照组比较，差异有显著性（P＜0.05，P＜0.01）；停药4周后，中剂量组的肝脏系数、肾系数均偏低，与阴性对照组比较，差异有显著性（P＜0.05），见表3，但其相关检查指标未见明显改变。

表1 2036灵芝孢子（全破壁）胶囊对大鼠血液学指标的影响（±s，n=10）

表1 2036灵芝孢子（全破壁）胶囊对大鼠血液学指标的影响（±s，n=10）

表2 2036灵芝孢子（全破壁）胶囊对大鼠血液生化学指标的影响（±s，n=10）

表2 2036灵芝孢子（全破壁）胶囊对大鼠血液生化学指标的影响（±s，n=10）

指标 阴性对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组12周 26周 停药4周 12周 26周 停药4周 12周 26周 停药4周 12周 26周 停药4周GLU(mmol/L) 9.56±1.1210.26±1.389.73±1.57 9.92±1.3911.25±2.529.25±1.4710.43±1.6610.63±2.409.96±1.80 9.63±1.5 8.60±1.08 9.45±1.44 TP(g/L) 80.7±10.7 63.8±5.6 62.5±4.0 79.7±8.0 63.9±4.7 61.8±6.4 81.3±8.6 63.1±6.9 62.9±5.1 78.6±7.0 61.8±6.1 63.2±5.5 TG(mmol/L) 0.83±0.73 0.98±0.50 0.67±0.24 0.74±0.26 0.93±0.26 0.68±0.21 0.49±0.22 0.67±0.21 0.98±0.72 0.57±0.190.56±0.19*0.79±0.36 T-Bil(μmol/L) 3.7±1.5 1.3±0.4 0.2±0.7 4.6±2.2 1.0±0.4 0.2±0.3 3.5±1.2 1.1±0.4 0.3±0.5 4.2±2.7 1.3±0.4 0.2±0.3 ALB g/L 35.1±3.5 35.1±2.2 36.0±2.3 34.5±2.4 35.2±1.8 35.7±3.7 34.4±2.1 34.5±3.5 35.7±4.1 33.9±2.5 33.3±3.5 36.4±3.2 T-CHO (mmol/L)1.76±0.58 1.81±0.34 1.75±0.47 1.91±0.71 1.69±0.30 1.63±0.48 1.64±0.34 1.95±0.70 1.56±0.60 1.58±0.45 1.46±0.41 1.67±0.38 ALT(U/L) 36.7±17.1 42.8±16.3 29.7±7.7 28.5±8.7 43.0±13.9 35.5±8.5 30.0±5.8 40.1±5.6 30.9±10.7 33.5±11.1 40.0±8.0 31.5±5.3 Urea(mmol/L) 6.04±0.97 5.87±0.74 5.89±1.12 5.21±0.79 5.90±0.66 6.10±0.84 5.52±0.88 6.37±1.25 5.76±0.97 5.66±0.78 5.98±0.97 6.23±1.14 AST(U/L) 83.9±24.3108.9±36.985.8±17.9 69.6±9.7 120.5±21.597.6±18.6 69.6±11.4103.3±17.299.7±28.7 78.9±28.7114.9±20.183.5±16.5 ALP(U/L) 65.5±25.5 82.7±26.7 58.4±15.9 70.0±27.4 77.8±15.0 68.1±26.0 71.6±29.1 67.4±37.4 94.8±80.7 88.0±44.5 77.6±36.0 70.3±25.0 Crea(μmol/L) 70.1±11.1 34.8±3.7 39.9±3.8 68.1±16.041.1±4.0** 40.4±4.0 70.6±12.0 40.5±4.5* 41.6±4.6 67.5±11.243.0±5.8** 40.6±5.1

表3 2036灵芝孢子（全破壁）胶囊对大鼠脏器系数的影响（±s，n=10）

表3 2036灵芝孢子（全破壁）胶囊对大鼠脏器系数的影响（±s，n=10）

指标 阴性对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组12周 26周 停药4周 12周 26周 停药4周 12周 26周 停药4周 12周 26周 停药4周心 0.32±0.03 0.30±0.04 0.29±0.03 0.31±0.03 0.28±0.03 0.31±0.04 0.31±0.05 0.30±0.03 0.26±0.03 0.30±0.02 0.30±0.02 0.29±0.05肝 2.43±0.22 2.61±0.21 2.57±0.33 2.51±0.17 2.46±0.29 2.38±0.28 2.42±0.19 2.24±0.20** 2.19±0.32* 2.49±0.10 2.30±0.23 2.38±0.29脾 0.17±0.02 0.15±0.03 0.16±0.03 0.19±0.05 0.15±0.02 0.14±0.02 0.17±0.02 0.14±0.02 0.15±0.02 0.18±0.04 0.17±0.03 0.14±0.03肺 0.33±0.05 0.30±0.07 0.31±0.06 0.34±0.06 0.29±0.05 0.30±0.06 0.34±0.05 0.32±0.05 0.29±0.04 0.35±0.07 0.35±0.08 0.31±0.07脑 0.53±0.12 0.44±0.14 0.44±0.15 0.53±0.13 0.45±0.13 0.45±0.14 0.53±0.14 0.47±30.11 0.40±0.10 0.55±0.14 0.50±0.15 0.44±0.14肾 0.30±0.03 0.29±0.03 0.29±0.03 0.29±0.03 0.27±0.03 0.28±0.03 0.29±0.02 0.30±0.03 0.25±0.02 0.30±0.02 0.30±0.03 0.28±0.03肾上腺 9.76±2.68 7.95±3.56 8.86±4.47 9.34±2.90 7.34±2.07 8.39±3.75 9.02±2.31 8.66±2.77 7.31±2.52 8.96±2.80 8.25±3.58 7.72±4.91子宫 0.18±0.03 0.19±0.09 0.16±0.05 0.18±0.05 0.19±0.03 0.16±0.03 0.20±0.07 0.19±0.05 0.12±0.04 0.18±0.06 0.21±0.05 0.15±0.04卵巢 13.34±2.6112.97±1.2014.61±4.8111.60±3.3212.11±3.2913.23±4.5012.52±3.05 10.11±2.21 12.80±1.9613.49±1.9511.29±3.7816.21±4.08睾丸 0.38±0.04 0.28±0.07 0.28±0.05 0.35±0.03 0.28±0.03 0.27±0.07 0.29±0.13 0.32±0.03 0.27±0.02 0.35±0.05 0.33±0.06 0.29±0.05附睾 0.14±0.01 0.11±0.02 0.11±0.02 0.12±0.02 0.10±0.02 0.10±0.02 0.11±10.04 0.12±0.01 0.10±0.00 0.13±0.02 0.12±0.03 0.12±0.02

2.7 病理解剖肉眼观察和组织病理学检查

给药12周、26周及停药4周，各组剖检后肉眼观察动物的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、睾丸、附睾、子宫、卵巢等，未见与受试物毒性作用相关的病理学改变。组织病理学检查未见受试物毒性作用相关的组织病理学改变。

3 讨 论

灵芝孢子粉（The spores from Ganoderma lucidum darst）是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出的微小孢子，具有灵芝的全部遗传活性物质，集中了灵芝的精华，具有比灵芝更好的药理作用。既往研究表明，灵芝孢子粉具有抑制肿瘤、调节免疫、调节神经、调节机能四大药理作用。现代药理进一步显示，灵芝孢子粉能保护神经细胞，修补细胞膜，对帕金森症等具有很好的预防和治疗功效[8,9]。

灵芝孢子是公认的具有很高知名度的中成药，在临床上和保健品市场使用多年，具有显著的保健和治疗功效。但市场上的灵芝孢子产品龙蛇混杂，对原料来源，加工成型过程，成品质量等控制不严，导致产品质量良莠不齐，长期服用劣质的灵芝孢子产品可能对消费者的身心产生不可估测的影响。并且，即使质量控制严格的灵芝孢子产品，对它们的长期毒性研究，服用剂量等，在国内外都没有相关的研究资料，缺乏长期大剂量服用的安全性评估数据。2036灵芝孢子（全破壁）胶囊从原料来源到生产工艺都经受严格的质量控制，保证了其产品质量及功效的稳定性。本研究对2036灵芝孢子（全破壁）胶囊进行了完整的现代毒理学评价。

2036灵芝孢子（全破壁）胶囊临床最大剂量为每人每日5.4g，本试验设置剂量分别相当于临床日用最大剂量的60倍、30倍和15倍；给药期为临床用药疗程的3倍。大鼠灌胃给药26周及停药恢复4周内，动物一般状态良好、摄食、饮水、粪便均正常，在全部试验周期中未发生因给予受试物引起的大鼠濒死和死亡的毒性反应；未发生与受试物明显相关的血液学、血清生化学和组织病理学的改变。在本试验条件下，2036灵芝孢子（全破壁）胶囊的无毒剂量为5.40g/kg（相当于临床拟定人用剂量60倍）。因此，临床上应用本品是安全的，可以长期大剂量服用。

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