前列通瘀片对前列腺蛋白所致 CPPS大鼠前列腺组织细胞因子的影响

赵子剑

(怀化学院化学系，民族药用植物资源研究与利用湖南省重点实验室湖南怀化418008)

前列通瘀片由黄芪、土鳖虫、冬葵子等十一味中药提取而成，具有活血化瘀，清热通淋之功效，主要用于慢性前列腺炎属瘀血阻滞兼湿热内蕴证，症见尿频尿急;余沥不尽，会阴、下腹或腰骶部坠胀疼痛，或尿道灼热，阴囊潮湿，舌紫暗或瘀斑，舌苔黄腻等症。本研究通过观察前列通瘀片干预CPPS大鼠前列腺组织中 IL-1β、COX-2、PGE2、β-EP 的含量，来探讨前列通瘀片防治慢性前列腺炎的可能作用机制。

1 材料

1.1 实验动物 Wistar大鼠，清洁级，3月龄，体重180～220 g，♂性。由西安交通大学医学院实验动物中心提供，动物合格证号:SCXK(陕)08-005。

1.2 实验材料及主要仪器 试剂盒来源:IL-1β、COX-2、PGE2、β-EP试剂盒，由美国 CeuautikineTmmurine公司提供，前列通瘀片(自制，批号20050908)。塞来昔布:国药准字J20030098，辉瑞制药有限公司(普强苏州制药有限公司)，200 mg×6粒。佐剂用卡介苗:购于陕西省生物制品研究所，批号20051102。百白破疫苗:购于咸阳市卫生防疫站，武汉生物制品研究所，批号20050307。0.5%tritonX-100(凯基生物发展有限公司)生理盐水溶液:取0.5 m L tritonX-100，加入100 mL生理盐水溶液中，高温灭菌。0.1 mol/L pH7.2的 PBS缓冲液:取 0.2 mol/L Na2HPO4360 mL，0.2 mol/L NaH2PO4140 mL，加入 NaCl 1.0 g，用蒸馏水补足至1000 mL。福氏完全佐剂(FCA):将液体石蜡与羊毛脂按2∶1比例共热至70℃，混匀。高温灭菌后按5 mg/mL加入佐剂用卡介苗，无菌乳化后使用。

1.3 实验方法

1.3.1 大鼠前列腺蛋白提纯液制作方法［1］取240～300 g♂性Wistar种大鼠，脱颈椎处死，在无菌条件下剥取前列腺组织，用冷生理盐水洗净。加入含0.5%tritonX-100生理盐水溶液，在冰水浴上用玻璃匀浆器使之成匀浆。10 000 r/min离心，离心30 min，取上清液，测定蛋白含量。最后用0.1 mol/L pH7.2的 PBS缓冲液稀释到15 mg/mL。

1.3.2 CPPS动物模型的制作方法［1］取180～220 g♂性Wistar种大鼠70只，随机分为正常组10只、实验组60只。实验组腹腔注射百白破疫苗各0.5mL，并多点皮下注射大鼠前列腺蛋白提纯液(剂量为15 mg/mL)和 FCA乳剂(比例1∶1)的混悬液1.0 mL，正常组分别腹腔注射、多点皮下注射PBS缓冲液0.5 mL、1.0 mL。以上各组分别在0、30 d各注射1次。45 d后模型成功。

1.3.3 分组与给药 实验组在造模成功后随机分为模型组(10只)、塞来昔布组(10只)及前列通瘀片大、中、小剂量组(各10只)5组。前列通瘀片大、中、小剂量组给药剂量分别按临床常用剂量的 12、6、3倍计算，分别为 36、18、9g生药/kg。塞来昔布给药剂量为0.04 g/kg。正常组和模型组给于相同剂量的蒸馏水，以上各组均灌胃给药，每日1次，连续给药30 d。

1.3.4 取材［2］各组大鼠给药30 d后称重，用颈椎脱臼法处死大鼠。剖开腹腔，取下前列腺，称湿重。将前列腺组织分为左右两部分，将右侧部分称重后，按每克前列腺组织加入0.5%tritonX-100生理盐水溶液5.0 mL，在冰水浴上用玻璃匀浆器使之成匀浆。3 000 r/min离心20 min后取出上清液，置低温冰箱中备用。

1.3.5 细胞因子含量检测 用双抗体夹心-酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA)法;具体操作按各试剂盒使用说明。各组间计量资料比较采用单因素方差分析(成组t)检验［3］，实验结果采用±s表示。

2 结果

大鼠前列腺组织匀浆中 IL-1β，COX-2，PGE2，β-EP的含量变化结果见表1。

表1 大鼠前列腺组织匀浆中 IL-1β，COX-2，PGE2，β-EP的含量变化(±s;n=10)

表1 大鼠前列腺组织匀浆中 IL-1β，COX-2，PGE2，β-EP的含量变化(±s;n=10)

与正常组比较，﹡P<0.05，﹡﹡P<0.01;与模型组比较，△P<0.05，△△P<0.01;与塞来昔布组比较，▼P<0.05，▼▼P<0.01。

组别 IL-1β/(pg/mL) COX-2/(pg/mL) PGE2/(pg/mL) β-EP/(pg/mL)正常组 45.355±22.495△△ 59.048±21.056△△▼▼ 201.263±114.829△△▼▼ 134.265±27.546△△▼▼模型组 155.038±31.028﹡﹡▼▼ 262.167±58.721﹡﹡▼▼ 1057.715±150.896﹡﹡▼▼ 36.484±14.332﹡﹡▼▼塞来昔布组 54.363±20.255△△ 98.852±33.473﹡﹡△△ 463.706±129.048﹡﹡△△ 92.728±26.963﹡﹡△△前列通瘀片大剂量组 70.294±37.987△△ 88.301±38.972△△ 529.844±103.897﹡﹡△△ 85.392±18.759﹡﹡△△前列通瘀片中剂量组 80.878±31.939﹡△△▼ 131.921±34.894﹡﹡△△▼ 581.529±140.044﹡﹡△△ 53.745±17.386﹡﹡△▼▼前列通瘀片小剂量组 113.749±37.564△△﹡﹡▼▼ 167.236±45.561﹡﹡△△▼▼ 755.683±255.874﹡﹡△△▼▼ 51.941±22.599﹡﹡▼▼

3 讨论

3.1 CPPS动物模型的制作目前尚无公认的标准方法。现在使用的造模方法大致可归纳为三类:前列腺注射造模法、雌激素结合去势造模法和通过自身免疫反应造模法。前列腺注射造模法的病理机制是一种急性或增生性的炎症，炎性反应较为剧烈，与本病的病理表现相比有较大的差距。雌激素结合去势造模法的造模效果与大鼠的种系和年龄等有较大的相关性，重复性较差。自身免疫反应造模法的动物发病机制和前列腺的病理改变与人比较接近，是目前相对较为理想的一种造模方法［4-5］。

IL-1β为促炎性细胞因子，可介导一系列免疫炎症反应。研究证明［6］，在 CPPS患者组的精浆中的促炎性细胞因子IL-1β的水平升高，明显高于对照组。本实验显示，模型组大鼠前列腺组织匀浆中 IL-1β较正常组显著升高，表明在CPPS的前列腺组织中存在着较强的炎症反应，而这种炎症反应可由自身免疫反应诱导产生。前列通瘀片能显著降低实验性CPPS大鼠前列腺组织中 IL-1β水平，因此具有较好的抗炎作用。

PGE2是一种炎性因子，本研究表明，前列通瘀片能够降低前列腺组织中的PGE2含量，从而缓解 CPPS患者的疼痛症状。同时前列通瘀片还可以通过调节PGE2的含量以改善前列腺组织中的炎症反应。

β-EP是一种天然的内阿片样肽，主要由下丘脑弓状核及垂体中叶合成分泌，有镇痛及维持神经内分泌环境相对稳定等作用。本实验显示:前列通瘀片能显著升高前列腺组织中β-EP的含量，从而增强了局部的镇痛作用，以减轻临床症状。

［1］周晓辉，韩 蕾，周智恒，等.免疫性慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型的形态学与分子生物学特性［J］.中华男科学杂志，2005，11(4):290-295.

［2］徐叔云，卞如濂，陈 修主编.药理实验方法学［M］.第3版.北京:人民卫生出版社，2002:1557，911.

［3］赵子剑.前列通胶囊对大鼠实验性前列腺增生的作用［J］.中药药理与临床，2007，23(5):191-192.

［4］魏武然，张唯力，戴君勇.大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的建立［J］.中国男科学杂志.2006，20(1):22-24.

［5］叶伟成，薛慈民，徐兆东，等.免疫佐剂法制作慢性非细菌性前列腺炎小鼠模型的方法［J］.中国男科学杂志.2001，15(1):29-32.

［6］Litwin MS，MC Naughton Collins M，Fowler FJJR，et al.The National Institutes of Health chronic prostatitis symptom index:development and validation of a new outcome measure ［J］.J Urol，1999，162(2):369-375.