针刺家兔内关穴对缓慢型心律失常模型心肌细胞Na+－K+－ATP酶活性影响的研究

姚凤祯，王岩

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

心律失常是一种严重的致残性和致死性疾病，其发病率呈逐年增高的趋势，不仅对人类健康构成了严重的威胁，亦给家庭及社会带来了沉重的经济负担。因此，心律失常的治疗具有十分重要的意义。针刺法将中医学的整体观念、辨证论治理论与经络学说结合起来，更加全面的发挥中医治疗特色，日益显现出中医药疗法在本病治疗中的优越性和独特魅力。在临床实践中运用针刺法治疗心律失常，取得了较好的疗效，为进一步探讨其作用机制，故以缓慢型心律失常家兔模型为研究对象进行了实验研究，现将结果报告如下。

1 实验材料

1.1 实验动物

家兔，雌雄各半，体重(1.5～2.0)kg，4～5月龄，均购自黑龙江中医药大学实验动物中心，在通风，温度、湿度适宜的动物室内常规饲养。

1.2 药物与试剂

参附注射液(四川省雅安三九药业有限公司，批号:Z51020664);盐酸维拉帕米注射液(上海禾丰制药有限公司提供。批号:H31021343);ATP酶试剂盒(南京建成生物研究所)。

1.3 主要仪器

十六导电脑生理记录仪(美国Biopac公司);示波器(美国Biopac公司);MP－2003型注射泵(上海雷恩医疗器械有限公司);XW－80型漩涡混合器(上海第一医学院仪器厂);紫外分光光度计DU－600型(美国Beckman公司)。

2 实验方法

2.1 模型制备及分组

选取体重1.5kg～2kg的家兔40只，适应性喂养1w。将家兔随机分为5组，每组8只，分别为空白对照组、模型对照组、针刺预防组、针刺治疗组和参附注射液组。依据《中药药理研究方法学》(第二版)复制家兔缓慢型心律模型［1］。将各组家兔固定于实验台上，用酒精棉球擦拭其四肢腕、踝关节近心端内侧皮肤。以电极与皮肤成30°角倾斜刺入皮下，用16导电脑生理记录仪记录100s正常心电图后，以20%乌拉坦(1g·kg－1)耳缘静脉麻醉，除空白对照组外，各组于20 min后从耳缘静脉恒速注射2%盐酸维拉帕米生理溶液(0.44～0.66mL·min－1)。当盐酸维拉帕米剂量达到0.8～1.8(平均1.4)mg·kg－1时，心率显著减慢，并出现二度房室传导阻滞。

2.2 针刺取穴

参照《实验针灸学》［2］中“家兔的常用针灸穴位定位标准”及比较解剖学的方法定位:前臂下1/6折点处的内侧桡，尺骨间隙中，腧穴常规消毒后，左手食指或拇指紧按针穴，右手持30号1寸毫针刺入穴内5mm，连续重插轻提约60s。

2.3 治疗及给药方法

空白对照组:记录900s心电图，不予任何处理;

模型对照组:麻醉后注射维拉帕米，不予任何处理;

针刺预防组:注射维拉帕米前5min，针刺内关穴，60s后留针;

针刺治疗组:出现二度房室传导阻滞(5:4传导阻滞)时，立即给予家兔双侧内关穴针刺，行针60s后留针;

参附注射液组:于注射维拉帕米前15min，沿耳缘静脉缓慢注射参附注射液5mL。

各组家兔均通过示波器观察体表心电变化，并同步记录，留针至恢复正常心律后停止记录，拔出针电极，立即取材。

2.4 取材

上述各组家兔心电图大致恢复正常后，立即处死家兔。以生理盐水润湿家兔胸部皮毛，剪开其胸部皮肤，钝性剥离肌肉、剪开胸骨，掀开胸骨，剪开心包膜，充分暴露出家兔心脏。摘取心脏，以滤纸吸干血液，投入液氮罐中快速冷冻，以低温冰箱保存备用。

2.5 统计学处理

应用SPSS 13.0 for Windows统计软件进行统计分析。所有数据以均数±标准差(±s)表示，多组间的比较应用方差分析，两两比较用q检验。

3 结果

3.1 针刺内关穴对缓慢型心律失常家兔模型心电图时相性变化的影响

3.1.1 出现二度房室传导阻滞(5∶4传导阻滞)的时间

表1结果显示:针刺治疗组、参附注射液组与模型对照组相比，出现二度房室传导阻滞(5∶4传导阻滞)的时间差异无统计学意义(P>0.05);针刺预防组与模型对照组比较，出现二度房室传导阻滞(5∶4传导阻滞)的时间延长，差异有统计学意义(P<0.05);针刺治疗组与参附注射液组相比较，出现二度房室传导阻滞(5∶4传导阻滞)的时间差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 各组出现二度房室传导阻滞(5∶4传导阻滞)的时间比较(±s，n=8)

表1 各组出现二度房室传导阻滞(5∶4传导阻滞)的时间比较(±s，n=8)

注:与模型对照组比较，★P<0.05。

模型对照组 针刺预防组 针刺治疗组 参附注射液组出现二度AVB(5∶4)的时间(s)1035±42.61 1432±51.55★1073±44.81 1064±36.15

3.1.2 恢复到一度房室传导阻滞的时间

表2结果显示:针刺治疗组、参附注射液组与模型对照组相比较，恢复到一度房室传导阻滞的时间缩短，差异有统计学意义(P<0.05);针刺预防组与模型对照组比较，恢复到一度房室传导阻滞的时间缩短，差异有统计学意义(P<0.01);针刺治疗组与参附注射液组相比较，恢复到一度房室传导阻滞的时间差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 各组恢复到一度房室传导阻滞的时间比较(±s)

表2 各组恢复到一度房室传导阻滞的时间比较(±s)

注:与模型对照组比较，★P<0.05，△P<0.01。

模型对照组 针刺预防组 针刺治疗组 参附注射液组恢复一度AVB的时间(s) 403±16.18 186±11.32△ 279±21.60★ 293±22.03★

3.1.3 恢复到大致正常心率的时间

表3结果显示:针刺治疗组、参附注射液组与模型对照组相比较，恢复到大致正常心率的时间缩短，差异有统计学意义(P<0.05);针刺预防组与模型对照组比较，恢复到大致正常心率的时间缩短，差异有统计学意义(P<0.01);针刺预防组、针刺治疗组与参附注射液组相比较，恢复到大致正常心率的时间差异无统计学意义(P>0.05)。

表3 各组恢复到大致正常心率的时间比较(±s，n=8)

表3 各组恢复到大致正常心率的时间比较(±s，n=8)

注:与模型对照组比较，★P<0.05，△P<0.01。

模型对照组 针刺预防组 针刺治疗组 参附注射液组恢复大致正常心律的时间(s) 288±14.67 165±9.75△ 186±14.43★ 199±18.87★

3.2 针刺家兔内关穴对缓慢型心律失常家兔模型心肌组织Na+－K+－ATP酶活性的影响

结果显示，各组与空白组相比，心肌组织Na+－K+－ATP酶活性降低，差异有统计学意义(P<0.05);针刺预防组、针刺治疗组、参附注射液组与模型对照组相比较，心肌组织Na+－K+－ATP酶活性提高，差异有统计学意义(P<0.05);针刺预防组与针刺治疗组、参附注射液组相比较，心肌组织Na+－K+－ATP酶活性提高，差异有统计学意义(P<0.05)。

表4 各组心肌组织Na+－K+－ATP酶活性的比较(±s)

表4 各组心肌组织Na+－K+－ATP酶活性的比较(±s)

注:与空白对照组比较，★P<0.05;与模型对照组比较，☆P<0.05;与针刺治疗组比较，※P<0.05。

组别 n Na+－K+－ATP酶(umolPi/mg protein/h)32.11±5.36模型对照组 8 9.15±1.47★针刺预防组 8 25.25±4.12★☆※针刺治疗组 8 17.58±1.52★☆参附注射液组 8 19.08±4.65空白对照组8★☆

4 讨论

针刺治疗快速型心律失常，疗效已获肯定。本实验二度房室传导阻滞(5∶4传导阻滞)的出现时间:针刺预防组与模型组比较，出现的时间延长，说明针刺内关穴可改善心肌细胞传导性，进而延缓房室传导阻滞的出现时间，对房室传导阻滞有防治作用。恢复到一度房室传导阻滞的时间:针刺预防组、针刺治疗组与模型组相比较，恢复到一度房室传导阻滞的时间缩短，提示针刺内关穴能够提高心肌细胞传导速度，进而缩短房室传导阻滞的恢复时间，对房室传导阻滞有治疗作用。恢复到大致正常心率的时间:针刺预防组、针刺治疗组与模型组比较，恢复到大致正常心率的时间显著缩短，提示针刺内关穴能够持续改善心肌细胞传导速度，缩短房室传导阻滞的恢复时间，对房室传导阻滞有治疗作用。针刺治疗组与参附注射液治疗组相比无明显差异，提示在本时间段两组的治疗作用相近。

Na+－K+－ATP酶是细胞膜上普遍存在的一种离子驱动泵，在水解ATP的同时，能对抗细胞膜两侧电－化学梯度，维持膜内外Na+、K+的浓度差，并参与机体的多种生理活动［3］。心肌细胞膜内外离子的不均匀分布，是心肌细胞的生物电现象的产生的基础，从而影响心肌细胞传导性，可能是缓慢性心律失常发生的重要原因。Na+－K+－ATP酶的抗缓慢心律失常作用可能与调节心肌细胞膜内外Na+、K+分布，进而影响细胞内Ca2+水平，提高NaATP通道、KATP通道活性有关，延长动作电位时程，维持心肌细胞膜及细胞内钙镁的稳态有关。另外，Na+－K+－ATP酶参与心肌细胞能量代谢，可改善房室传导阻滞造成的心肌缺血、缺氧的代谢变化，有助于修复传导纤维的损伤。

本实验通过观察缓慢性心律失常家兔心肌组织Na+－K+－ATP酶活性发现:模型组与空白组相比较，心肌组织Na+－K+－ATP酶活性明显降低，提示家兔缓慢性心律失常模型复制成功;针刺预防组、针刺治疗组、参附注射液治疗组与空白组相比，心肌组织Na+－K+－ATP酶活性降低，表明针刺内关穴尚未完全恢复缓慢性心律失常家兔心肌组织Na+－K+－ATP酶活性。针刺预防组、针刺治疗组、参附注射液治疗组与模型组相比较，心肌组织Na+－K+－ATP酶活性明显提高，表明针刺内关穴能够提高缓慢性心律失常家兔心肌组织Na+－K+－ATP酶活性，促进家兔缓慢性心律失常模型心肌细胞膜两侧Na+、K+的转运，提高Na－ATP通道、K－ATP通道活性，延长动作电位时程，改善心肌细胞传导性，从而具有预防和治疗缓慢性心律失常的作用。由此可见，针刺家兔内关穴防治缓慢性心律失常疗效确切，而提高心肌组织的Na+－K+－ATP酶活性可能是其治疗缓慢性心律失常的机制之一。

［1］ 陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社，2003.

［2］ 林文注.实验针灸学［M］.上海:上海科学技术出版社，1994:274，142，215.

［3］ Schemer－Bobis G.The sodium pump.Its molecular proper－ties and mechanics of ion transport［J］.Eur J Biochem，2002，269(10):2424－2433.