比阿培南对鲍曼不动杆菌的抗菌活性评价

赖艳榕，彭湘明，刘少娟 ，刘燕娣

（1.广东省广州市红十字会医院检验科，广东广州 510220；2.广东医学院，广东东莞 523808）

鲍曼不动杆菌是医院感染的重要病原菌之一。近年来，由于抗生素的滥用，对美罗培南、亚胺培南、三代头孢耐药的鲍曼不动杆菌不断出现，给临床治疗带来了困难[1-2]。比阿培南是一种新型的碳青霉烯类抗生素，它的C1位上有一个β-甲基，对人肾二氢肽酶-1（DHP-1）的水解稳定。本实验采用琼脂稀释法测定比阿培南对鲍曼不动杆菌的MIC，并将它与其他3种抗菌药物进行比较，以评价其体外抗菌活性，为临床合理用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株的来源 选择广东省广州市红十字会医院2009年10月25日～12月10日住院患者的细菌培养标本分离的30株菌，经美国BD公司凤凰100全自动细菌及药敏分析仪鉴定为鲍曼不动杆菌，标本来源：1株为胆汁，2株为咽拭子，27株为痰液。质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853。

1.1.2 药物及培养基 比阿培南：南京先声东元制药公司，批号：92-090402；亚胺培南：默沙东制药有限公司，批号：09553；美罗培南：住友制药有限公司，批号：2029C；头孢他啶：葛兰素史克公司，批号：F615；M-H 琼脂：OXIOD 公司，批号：838703。

1.2 方法

1.2.1 MIC的测定 按照《全国临床检验操作规程》，用琼脂稀释法进行MIC测定。

1.2.2 抗菌药物的稀释 将比阿培南、亚胺培南、美罗培南、头孢他啶4种药物用倍比稀释法从125 μg/ml至5 120 μg/ml连续倍比稀释13个浓度梯度。

1.2.3 培养基制备 将已稀释的不同浓度抗菌药物按1∶10分别加入经高压灭菌过的并在45～50℃水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度约4 mm，药物的最终浓度为 0.125～512.000 μg/ml。

1.2.4 接种方法 制备浓度相当于 0.5McFarland的菌悬液，再1∶10稀释，吸取制备好菌液约1 μl接种于含药MH平板表面，接种点的细菌浓度约为104 cfu/ml，直径为5～8 mm的菌斑。

1.2.5 孵育 将接种好的平板置于（35±1）℃培养 18～24 h。

1.2.6 结果判断 根据CLSI抗菌药物敏感试验的执行标准，亚胺培南敏感≤4 μg/ml；美罗培南敏感≤4 μg/ml；头孢他啶敏感≤8 μg/ml。国家临床实验室标准化委员会尚未建立起比阿培南的折点浓度，但有文献推荐，将≤4 μg/ml作为比阿培南对需氧菌的敏感浓度[3]。数据采用SPSS 11.0统计学软件分析，计数资料用χ2检验。

2 结果

2.1 对30株鲍曼不动杆菌的MIC

见表1，结果显示，比阿培南的MIC集中分布在＜0.125～16.000 μg/ml浓度范围内，美罗培南的 MIC浓度集中分布 在0.25～16.00 μg/ml浓度范围内，亚胺培南的 MIC 浓度集中分布在0.25～16.00 μg/ml浓度范围内，头孢他啶的 MIC 集中分布在 2～512 μg/ml浓度范围内。

表1 4种药物各个浓度的MIC分布情况Tab.1 MIC distribution of 4 antibiotics in different concentration

通过多个独立样本比较的Kruskal-Wallis H检验，χ2=38.7，P=0.000，按 α=0.05 水准，认为比阿培南、美罗培南、亚胺培南、头孢他啶4种药物对鲍曼不动杆菌的抗菌能力不同，其中比阿培南抗菌效果最好（平均秩为78.4）。

2.2 对30株临床分离的鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性

见表2。

表2 4种抗菌药物对30株临床分离的鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性Tab.2 Antimicrobial activity of 4 antibiotics against 30 strains of Acinetobacter baumannii in vitro

结果分析，经 χ2检验，χ2=18.2，P=0.000，按 α=0.05 水准，可认为4种抗菌药物的抗菌活性有差异。多个样本率间的多重比较结果为比阿培南抗菌活性优于美罗培南、亚胺培南，高于三代头孢——头孢他啶。

3 讨论

碳青霉烯类抗生素具有抗菌谱广，抗菌作用强等优点，在临床广泛被应用，特别是对于重症感染的患者。早期的碳青霉烯类抗生素对人肾脱氢肽酶-1的水解作用不稳定，因此需要和脱氢肽酶-1抑制剂联用。比阿培南是一种新型胃肠外吸收药物的注射用有4位（R）甲基的碳青霉烯类抗生素，对DHP-1的水解稳定，无需与DHP-1抑制剂合用。

碳青霉烯类抗生素对革兰阴性杆菌具有较强的抗菌活性，但是随着时间的变化，革兰阴性杆菌对β-内酰胺类抗生素（包括碳青霉烯类抗生素）和第三代头孢类抗生素的耐药性逐渐增强。有研究将比阿培南、亚胺培南、美罗培南和帕尼培南对革兰阴性杆菌的MIC90值进行比较，发现随着时间的变化，比阿培南与其他碳青霉烯类抗生素相比，较少出现耐药问题[4]。鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制主要包括产碳青霉烯酶、OMP丢失和主动外排，而比阿培南可以抑制细菌细胞壁的合成，耐受多种β-内酰胺酶的水解，与主要的青霉素结合蛋白高度结合，对革兰阴性菌有良好的细胞穿透力，较少发生其他β-内酰胺类抗生素常见的细菌耐药性问题[5]，对头孢菌素耐药菌仍能发挥强效的抗菌作用。

表1、2结果显示，比阿培南、美罗培南、亚胺培南、头孢他啶四种药物对鲍曼不动杆菌的抗菌能力有差异，而以比阿培南的抗菌效果最好，其对鲍曼不动杆菌的抗菌活性优于同类药物，高于三代头孢——头孢他啶，与Hiraishi等[6]结果基本相符。据日本化学疗法学会杂志报道，平泻洋一等[7]研究：比阿培南对鲍曼不动杆菌的MIC50和MIC90分别为0.1 μg/ml和0.2 μg/ml，较亚胺培南和美罗培南显示更强的抗菌活性。本实验中比阿培南的 MIC50和 MIC90分别为 1 μg/ml和 8 μg/ml，较平泻洋一等[7]的研究数值高，但比阿培南仍比亚胺培南和美罗培南等其他抗菌药物抗菌活性要好，这可能是由于抗生素的广泛应用，耐药菌株的增加，细菌不断增殖，使其基因型发生了的改变，以适应环境。

由实验结果可知，作为碳青霉烯类抗生素新型药物，比阿培南对鲍曼不动杆菌的抗菌作用强。由于比阿培南特殊的结构，它在注射入体内后较其他碳青霉烯类抗生素更稳定，不易被水解，而且其肾毒性几乎为零，具有能够单独给药的优势，所以比阿培南是更安全、有效的碳青霉烯类抗生素。比阿培南不仅可用于治疗呼吸系统、泌尿生殖系统等方面的疾病，而且因其无中枢神经系统毒性，不会诱发癫痫发作，故可用于治疗细菌性脑膜炎。亚胺培南、美罗培南等碳青酶烯类药物已在国内临床广泛使用，而比阿培南只在日本等少数国家使用，在国内还没有正式投入临床应用。因此，本研究为将来国内广泛开展比阿培南的临床应用提供了可靠的实验依据。

[1]Haluk V,Fatma B,Murat K,et al.High prevalence of OXA-51-type class D β-lactamases among ceftazidime-resistant clinical isolates of Acinetobacter spp.∶co-existence with OXA-58 in multiple centres[J].J Antimicrob Chemother,2006,58(3)∶537.

[2]王金良.密切注视鲍曼不动杆茵的耐药发展趋势[J].中华检验医学杂志,2005,28(4)∶355.

[3]Chen HY,Livermore DM.In-vitro activity of biapenem,compared with imipenem and meropenem,against Pseudomonas aeruginosa strains and mutants with known resistance mechanisms[J].J Antimicrob Chemother,1994,33(5)∶949-958.

[4]Hirakata Y,Matsuda J,Mochida C,et al.Annual changes is susceptibility of clinical isolates to biapenem in Japanese[J].Jpn J Chemother,2002,50(6)∶329-351.

[5]崔银珠.新型抗菌药物比阿培南(biapenem)[J].世界临床药物,2003,24(9)∶572.

[6]Hiraishi T,Miyata A,Hara T,et al.Bactericidal activity for biapenem against various bacteria[J].Jpn J Antibiot,2001,54(12)∶581.

[7]Sirot D.Extend-spectrum plasmid-mediated β-lactamases[J].Jantimicrob Chemother,1995,36(Suppl A)∶19-34.