RP-HPLC测定宫瘤消片中芍药苷的含量

张 迪 ，马晓璐 ，张国刚

(1.辽宁省辽阳市药品检验所，辽宁辽阳 111000；2.沈阳药科大学，辽宁沈阳 110016)

宫瘤消片是在已有国家标准同类产品宫瘤消胶囊基础上经改剂型而制成的片剂新药。临床用于子宫肌瘤属气滞血瘀证，证见：月经量多，夹有大小血块，经期延长，或有腹痛，舌暗红，或边有紫点、瘀斑，脉细或细涩[1]。本品由牡蛎、牡丹皮、香附、白花蛇舌草等十一味药组成的复方制剂，化学成分较为复杂，而牡丹皮在处方中是重要的活血化瘀，软坚散结药物，是反应制剂功能主治的重要组成成分。近代药理研究表明，牡丹皮有抗凝血、降压、抗感染、抑制中枢神经系统等功能[2]。因此通过参考有关文献，采用法HPLC[3-4]对方中牡丹皮中芍药苷的含量进行测定，并结合分散片剂型特点，开展方法学研究。结果表明，文中方法具有灵敏、准确、重复性好等优点，可用于本品的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100液相色谱仪；sartorius BP211D电子天平（感量 0.1 mg；0.01 mg）；USC-502 超声波清洗器。

1.2 试药

芍药苷对照品（110736-200526，供含量测定用，中国药品生物制品检定所）；乙腈，甲醇均为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

取芍药苷对照品适量，用甲醇溶解并制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备

2.2.1 提取溶剂的考察 取宫瘤消片样品 （批号：050601），研细，取约1.163 g，2份，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇、乙醇各20 ml，称定重量，超声处理（300 W，25 kHz）20 min，取出，放冷，再称定重量，分别用各自溶媒补足减失重量，摇匀，滤过，作为供试品溶液。用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液按正文色谱条件测定，计算含量，分别为0.462 mg/g（甲醇）、0.456 mg/g（乙醇）。 以甲醇作为提取溶剂芍药苷的含量较乙醇高，故试验选用甲醇作为提取溶剂。

2.2.2 提取方法的考察 试验对超声处理、回流提取进行了对比。取同一批样品适量，研细，取约1.163 g，2份，精密称定，一份置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 ml，称定重量，超声处理（300 W，25 kHz）20 h，取出，放冷，再称定重量，补足减失重量，摇匀，滤过，滤液，作为供试品溶液；另一份置50 ml锥形瓶中，精密加甲醇20 ml，称定重量，水浴回流20 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液，作为供试品溶液。取供试品溶液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液按正文色谱条件测定，计算含量，分别为0.435 mg/g（超声）、0.438 mg/g（回流）。超声处理与加热回流相比，含量无显著性差异，故选择超声处理样品。

2.2.3 提取时间的考察 取同一批样品，研细，取约1.163 g，4份，精密称定，置50 ml锥形瓶中，精密加甲醇20 ml，称定重量，超声处理（300 W，25 kHz）10、20、50、60 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液，作为供试品溶液。取供试品溶液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液按正文色谱条件测定，计算含量，分别为 0.365、0.468、0.462、0.470mg/g。超声20、50、60 min芍药苷含量没有明显的变化，为了节省时间，合理利用资源，故试验选择超声提取时间为20 min。

2.3 色谱条件及系统适用性试验

实验参照国家食品药品监督管理局宫瘤消胶囊标准，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）为流动相；检测波长为230 nm。流速：1.0 ml/min，柱温：30℃，以 Agilent-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）柱为分析柱，进行试验研究，结果芍药苷与样品中其他组分色谱峰可基线分离，芍药苷与其相邻色谱的分离度大于1.5；按芍药苷峰计算，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2 000。见图1。

2.4 标准曲线的制备

分别精密吸取对照品溶液 2、4、6、8、10 μl按正文色谱条件进行分析，测定峰面积，结果见表1、图2。以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程，结果表明芍药苷进样量在0.2～1.0 μg范围内，呈良好的线性关系。回归方程为 Y=1 050.2X+44.93（r=0.999 2）。

表1 标准曲线测定结果Tab.1 The result of standardized curve

2.5 稳定性试验

取本品（批号：050601）20 片，研细，称取粉末 1.163 g，精密称定，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别在制备样品后的0、2、4、8，12 h进样测定，测得芍药苷峰面积的平均值为330.46，RSD为1.21%，结果表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.6 重复性试验

取本品（批号：050601）20片研细，称取 5份，各 1.163 g，精密称定，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，并进行测定，芍药苷的平均含量为0.486 7 mg/g，RSD为1.29%，结果表明本法重现性良好。

2.7 加样回收率试验

精密称取已知含量的样品（批号：050601，含量：0.5538mg/g）5份，分别精密加入对照品溶液1 ml，浓度为0.1 mg/ml，按上述条件依法测定。结果见表2。本法平均回收率为99.26%，RSD=1.65%，表明回收率的重现性较好。

表2 加样回收率试验结果Tab.2 Results of recovery test

2.8 样品含量测定

按照质量标准正文含量测定项下芍药苷测定方法对10批中试及试生产成品的芍药苷含量进行了测定，每批平行测定2次，结果见表3。

3 讨论

3.1 检测波长的选择

取芍药苷对照品甲醇溶液，以甲醇为空白，于200～400 nm波长处进行光谱扫描，由光谱图可见，对照品芍药苷在230 nm波长处有一特征吸收波长，故试验选择230 nm作为检测波长。

3.2 流动相的选择

本实验曾经试过乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-0.1%磷酸溶液等不同的流动相系统，发现乙腈-0.1%磷酸溶液调pH值可获得较好峰形和适合的极性范围，最终确定流动相的比例为乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）获得较好的分离，分离度均大于1.5，拖尾因子在0.95～1.05。

表3 样品含量测定结果Tab.3 Content determination results of samples

3.3 提取方法的选择

对于本品分别考察了甲醇、乙醇作为提取溶剂，结果显示以甲醇作为提取溶剂，芍药苷的含量较乙醇高，故试验选用甲醇作为提取溶剂；采用超声、回流不同提取方式，超声处理与加热回流相比，结果表明含量无显著性差异，故选择超声处理样品；对提取时间10、20、50、60 min的处理，进行了对比结果显示超声20、50、60 min芍药苷含量没有明显的变化，为了节省时间，合理利用资源，试验选择超声提取时间为20min。即提取方法为甲醇超声处理20 min。

[1]张丽华,孙红霞,李洪宇,等.宫瘤消片质量标准研究[J].中成药,2007,29(7):20-21.

[2]吴少华,马云保,罗晓东,等.丹皮的化学成分研究[J].中草药,2002,33(8):679-680.

[3]郭戎,狄留庆,谢光辉,等.HPLC法测定加味逍遥丸中丹皮酚的含量[J].中国中药杂志,1998,23(3):156.

[4]寸时灿.HPLC法测定金匮肾气丸中丹皮酚的含量[J].中成药,2002,24(4):309.

[5]国家药品监督管理局编.《国家中成药标准汇编》（中成药地方标准上升国家标准部分）[C].肿瘤:儿科分册,2002:391.

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2005:119.

[7]刘岩,刘顺航,徐佳丽,等.HPLC同时测定广东汤中葛根素和芍药苷的含量[J].中成药,2007,29(6):842-845.

[8]温预关,陆润基,喻凌寒.RP-HPLC-MS法测定益智合剂中芍药苷的含量[J].中国药房,2008,(3):199-200.