固相分散萃取－液相色谱法测定豆沙中的富马酸二甲酯

周建科 杨冬霞 徐鹏 耿向飞

（河北大学理化分析中心河北省分析科学技术重点实验室，保定071002）

固相分散萃取－液相色谱法测定豆沙中的富马酸二甲酯

周建科*杨冬霞 徐鹏 耿向飞

（河北大学理化分析中心河北省分析科学技术重点实验室，保定071002）

采用固相分散萃取技术对豆沙样品进行预处理，用高效液相色谱法测定其中的富马酸二甲酯。Diamonsil C18色谱柱，柱温25℃，甲醇－水（体积比为55∶45）作流动相，流速1.0 mL/min，检测波长220 nm。富马酸二甲酯在0.136 μg/mL～33.5 μg/mL范围内线性良好，相关系数为0.9998，方法检出限0.82 μg/g，平均回收率82.5%，相对标准偏差为3.3%。市售豆沙馅中未检出富马酸二甲酯。

固相分散萃取；高效液相色谱；富马酸二甲酯

AbstractA solid phase dispersion extraction-high performance liquid chromatography was used for the determination of dimethyl fumarate（DMF）in bean paste. Anhydrous sodium sulfate was used as dispersant and dehydrant.DMF was analyzed by Diamonsil C18column using UV detector at 220 nm.The mobile phase composed of a mixture of methanol and water（55∶45，V/V），with the flow rate of 1.0 mL/min.The column temperature was 25℃.The linear range was 0.136 μg/ mL～33.5 μg/mLwith correlation coefficient of0.999 8. The detection limit was 0.82 μg/g.The average recovery rate was 82.5%，and relative standard deviation was 3.3%.Dimethyl Fumarate wasn't detected in bean paste sold in the market.

Keywordssolid phase dispersion extractin；liquid chromatography；dimethyl fumarate

随着人们生活水平的提高，食品中添加剂的滥用等食品安全问题越来越受到关注。食品添加剂中的防腐剂是一类保持食品原有品质和营养价值的物质。富马酸二甲酯（DMF）是20世纪80年代开发的一种防腐剂，其防霉效果好，抗菌活性受pH影响小，曾被广泛用于饼干、面粉、熟食等食品中。后经实验证明，富马酸二甲酯易水解生成甲醇，对人体的眼睛、皮肤等有刺激作用，对肝、肾毒副作用很大，目前我国已禁止在食品中使用。为防止不法企业的继续滥用，建立快速、高效检测富马酸二甲酯的方法对食品行业的监管具有重要意义。

目前，测定食品中的富马酸二甲酯大多采用气相色谱（GC）、薄层色谱、紫外分光光度法和高效液相色谱（HPLC）等方法，高效液相色谱是分析食品中防腐剂的常用方法。对于食品检测，常用的前处理技术主要包括溶剂萃取法（SE）、固相萃取法（SPE）、固相微萃取技术（SPME）和基质固相分散技术（MSPD）等。本文采用一种新的样品前处理技术-固相分散萃取，该方法与MSPD相比，省略了装填柱子、选择适当分散剂、洗脱剂等步骤，方法操作简单，结合高效液相色谱对豆沙馅中的富马酸二甲酯进行了测定。

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

岛津LC～6A高压输液泵；7125型手动进样阀；LINEAR200紫外检测器；N2000色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；旋涡混合器。

富马酸二甲酯（Alfa Aesar）；甲醇为色谱纯；无水硫酸钠为分析纯（300℃马弗炉烘烤）；二次水；豆沙馅购自超市。

1.2 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18色谱柱（250×4.6 mm，5 μm）；柱温25℃；流动相：甲醇－水（体积比55∶45）；流速1.0 mL/min；检测波长220 nm；进样量10 μL。采用色谱峰的保留时间定性，外标法峰面积定量。

1.3 标准溶液配制

储备液：准确称取富马酸二甲酯标准品，用甲醇溶解定容，配成质量浓度为1.36 mg/mL的储备液，4℃冰箱存放。工作溶液：准确量取适量储备液，甲醇为溶剂逐级稀释，配制系列工作溶液。

1.4 样品预处理

准确称取2.0 g豆沙和5.0 g无水硫酸钠，于研钵中混合研磨至豆沙分散、脱水后变为细小颗粒。将研磨好的混合物转入锥形瓶中，加入6 mL甲醇，旋涡震荡2 min，静置片刻，倾析上清液至15 mL刻度试管中。残渣重复萃取两次，每次加入甲醇的量为5 mL，合并萃取液至试管。漏斗过滤，调整滤液总体积为12 mL。移取适量滤液经0.45 um滤膜过滤，取10 μL进样分析。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件优化

实验考察了不同体积比的甲醇－水做流动相时富马酸二甲酯的出峰情况。结果表明，当甲醇与水的体积比为55∶45时，保留时间短且峰形较好。故本实验采用体积比为55∶45的甲醇－水作为流动相。

取一定浓度标准溶液从200 nm～320 nm进行光谱扫描，结果显示在220 nm处富马酸二甲酯紫外吸收较强且干扰少，故选220 nm为最佳检测波长。标准物色谱图见图1。

图1 标准物色谱图

2.2 分散剂用量

样品预处理时，选择无水Na2SO4作为分散剂和脱水剂，可以起到破坏细胞结构、分散样品以及脱水的作用。本实验考察了无水Na2SO4与豆沙质量比分别为1∶1、2∶1、2.5∶1和3∶1时的分散、脱水情况。结果表明，质量比为1∶1和2∶1时，豆沙分散、脱水不充分；当质量比为3∶1时，分散、脱水效果好，但消耗萃取溶剂体积过大。从处理效果和溶剂用量两方面考虑，本试验选择分散剂与样品质量的最佳比例为2.5∶1。

2.3 萃取剂体积

富马酸二甲酯在甲醇中有较大的溶解度且杂质干扰少，因此本实验采用甲醇作为萃取剂。考察了10 mL～18 mL的一系列萃取剂体积对回收率的影响。如图2所示，当甲醇体积为16 mL时，回收率最高，故选择16 mL作为最佳萃取剂体积。

图2 甲醇体积对回收率的影响

2.4 萃取次数

本实验考察了萃取次数对回收率的影响。结果表明，萃取一次和两次时，回收率低于70%。萃取三次时，回收率显著提高，可达到80%～90%。再增加萃取次数，会导致操作繁杂，分析时间过长，故选择最佳萃取次数为三次。

2.5 线性方程及检出限

移取系列标准工作液，在所选的色谱条件下，以峰面积对质量浓度绘制工作曲线。在0.136 μg/mL～33.5 μg/mL范围内富马酸二甲酯线性良好，DMF的线性相关系数及仪器检出限见表1。

表1 线性方程

2.6 回收率和精密度

取2.0 g豆沙，加入适量富马酸二甲酯标准溶液，在选定的色谱条件下，测定样品加标后富马酸二甲酯的含量，平行测定六次，计算相应的回收率和精密度。结果见表2。

表2 平均回收率及RSD(n=6)

2.7 样品测定

在优化的色谱条件下我们对超市购买的豆沙馅进行了测定,平行测定三次，未检出富马酸二甲酯。实际样品色谱图见图3。

图3 实际样品色谱图

3 结论

本实验建立了固相分散萃取-高效液相色谱法测定豆沙中富马酸二甲酯的方法。固相分散萃取技术处理豆沙样品，设备简单，操作容易，萃取时间短，所用试剂成本低，是一种简便、快捷、经济的方法。市售豆沙中未检出富马酸二甲酯。

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Determination ofdimethylfumarate in bean paste by liquid chromatography after solid phase dispersion extraction

ZHOUJian-ke*YANGDong-xiaXUPengGENGXiang-fei
（Research center ofphysics and chemistryanalysis，keylaboratoryofanalytical science and technologyofHebei Province，Hebei University，Baoding 071002，China）

*周建科，男，1956年出生，1982年毕业于河北大学，研究员。

2010-07-14