HPLC法同时测定麦冬药材中麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A的含量Δ

胥秀英，郑一敏，傅善权，韩玉梅，杨艳红（重庆理工大学药学与生物工程学院，重庆市 400050）

HPLC法同时测定麦冬药材中麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A的含量Δ

胥秀英＊，郑一敏，傅善权，韩玉梅，杨艳红（重庆理工大学药学与生物工程学院，重庆市 400050）

目的：建立以高效液相色谱法测定麦冬药材中麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A含量的方法。方法：色谱柱为Waters C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-水（35∶65），流速为1.0 mL·min-1，检测波长为208 nm，柱温为室温。结果：麦冬皂苷Ra、慈溪麦冬皂苷A的进样量分别在1.88～9.40 μg（r＝0.999 6）、1.96～9.80 μg（r＝0.999 5）范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系；平均回收率分别为100.2%、99.7%，RSD均为1.7%（n＝6）。结论：本方法简便、快速、准确，可用于麦冬药材的质量控制。

麦冬；高效液相色谱法；麦冬皂苷Ra；慈溪麦冬皂苷A；含量测定

Δ重庆市科技攻关计划项目（CSTC2008AC5029，CSTC2008 AB5116）

＊研究员。研究方向：天然药物的研发。电话：023-68662335。E-mail：yxx651116@cqut.edu.cn

麦冬为百合科沿阶草属植物麦冬Ophiopogon japonicus（Thunb.）Ker-Gaw1.的肉质块茎[1，2]，主产于浙江、四川等地，为常用中药品种，用于治疗冠心病、心绞痛等症[3]。其主要化学成分有甾体皂苷、多糖、高异黄酮类、氨基酸等，其中麦冬甾体皂苷作为主要有效成分之一[4]，具有明显的抗缺氧、抗诱变及抑制肿瘤等活性。姚令文等[5]采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）法测定了川麦冬中麦冬皂苷D’的含量，但至今未见同时测定麦冬药材中麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A含量的报道。因此，笔者采用HPLC法建立了同时测定麦冬药材中麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A含量的方法，该方法简便、快速、准确，可用于麦冬药材的质量控制。

1 仪器与材料

1.1 仪器

HPLC仪，包括1525泵、2487双波长检测器、Breeze工作站（美国Waters公司）。

1.2 试药

乙腈为色谱纯，其它试剂均为市售分析纯；麦冬皂苷Ra、慈溪麦冬皂苷A标准品（本实验室制备，批号分别为080602、080721，经HPLC面积归一化法测定含量分别为98.4%、100%）；麦冬药材购于重庆市药材市场，经本院傅善权副主任药师鉴定为麦冬[O.japonicus（Thunb.）Ker-Gaw1.]。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[6]

色谱柱：Waters C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（35∶65）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：208 nm；柱温：室温。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.标准品；B.供试品；1.慈溪麦冬皂苷A；2.麦冬皂苷RaFig 1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.test sample；1.cixi-ophiopogon A；2.ophiopogon Ra

2.2 溶液的制备[7]

2.2.1 标准品溶液 精密称取麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A标准品，制成麦冬皂苷Ra浓度为0.94 g·L-1和慈溪麦冬皂苷A浓度为0.98 g·L-1的混合甲醇溶液，作为标准品贮备液。再分别取该贮备液适量，用甲醇稀释制成含麦冬皂苷Ra分别为0.094、0.188、0.282、0.376、0.470 g·L-1和慈溪麦冬皂苷A分别为0.098、0.196、0.294、0.392、0.490 g·L-1的混合液，0.45 μm滤膜滤过，备用。

2.2.2 供试品溶液 精密称取经干燥粉碎过40目筛的麦冬药材10 g，分别加入药材量10、8、7倍的水于80～90℃煎煮3次，收集滤液，冷后过预先处理好的大孔吸附树脂柱[7]，再用80%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至干，称量得提取物。取该提取物5.0 mg，用甲醇溶解制成5.0 mg·mL-1的溶液，0.45 μm滤膜滤过，备用。

2.3 线性关系考察

分别精密取“2.2.1”项下标准品混合液20 μL进样，以色谱峰峰面积（Y）对标准品质量浓度（X）进行线性回归。结果，麦冬皂苷Ra的线性方程为Y＝77 247X+4 730（r＝0.999 6），线性范围为1.88～9.40 μg；慈溪麦冬皂苷A的线性方程为Y＝75 740X+7 273.7（r＝0.999 5），线性范围为1.96～9.80 μg。

2.4 最低检测限的测定

在“2.1”项下色谱条件下，按信噪比＞3时测定最低检测限。结果，麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A的最低检测限分别为6、10 ng。

2.5 精密度试验

取“2.2.1”项下标准品溶液（含麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A分别为0.282 g·L-1和0.294 g·L-1），分别在“2.1”项下色谱条件下连续进样10 μL，共进样6次。结果，麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A峰面积的RSD分别为1.6%和1.9%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取“2.2.2”项下供试品溶液，分别在0、2、4、8、16 h各进样10 μL，照上述方法测定。结果，麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A峰面积的RSD分别为1.4%和1.6%，表明供试品溶液在16 h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批麦冬药材样品，按“2.2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别进样10 μL，照上述方法测定。结果，麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A含量的RSD分别为2.5%和2.2%，表明方法重复性较好。

2.8 加样回收率试验

取同一批麦冬药材6份，分别加入麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A标准品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件下进样10 μL，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（n＝6）

2.9 样品含量测定

取3批麦冬药材样品，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件下进样10 μL（3次平行），测定峰面积，由线性方程计算3批麦冬药材中麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A的含量，结果见表2。

表2 麦冬药材中麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A含量测定结果（n＝3）Tab 2 Content determination of ophiopogon Ra and cixiophiopogonAin O.japonicus（n＝3）

3 讨论

本试验曾采用超声、回流提取样品直接进样，但由于多糖等杂质较多，导致色谱干扰较大；而采用水提取大孔树脂吸附，可以除去大量非皂苷类杂质，而且成本低，无污染物排出，是一种理想的皂苷类提取方法。

麦冬为2005年版《中国药典》（一部）收载的品种，原标准中只有显色鉴别反应，缺乏有效成分定性和定量检测。本文重点对麦冬药材中2种有效成分进行了定量测定，可为麦冬药材的质量控制提供依据。

[1]肖培根.新编中药志（第2卷）[M].北京：化学工业出版社，2002：481.

[2]阳美平，吴 皓，尹 莲，等.麦冬皂苷和多糖类成分的研究进展[J].中华中医药学刊，2008，26（10）：2 170.

[3]王建中，陈小兵，王锋鹏，等.川麦冬皂苷类化学成分的研究[J].有机化学，2008，28（9）：1 620.

[4]莫正纪，江光池，冉 兰，等.麦冬有效成分的药理研究[J].华西药学杂志，1991，6（3）：13.

[5]姚令文，王钢力，王 峰，等.HPLC-ELSD法测定川麦冬中麦冬皂苷D’的含量[J].中草药，2004，35（12）：1 419.

[6]关颖丽，刘建宇，尹 虹.D101型大孔吸附树脂在分离纯化三萜皂苷方面的应用[J].中国药房，2008，19（30）：2 399.

[7]胥秀英，郑一敏，傅善权，等.麦冬须根与麦冬块根中麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A含量比较[J].中国中药杂志，2009，34（19）：2 531.

Content Determination of Ophiopogon Ra and Cixi-ophiopogon A fromOphiopogon japonicusby HPLC

XU Xiu-ying，ZHENG Yi-min，FU Shan-quan，HAN Yu-mei，YANG Yan-hong（College of Pharmaceutical and Biological Engineering，Chongqing University of Technology，Chongqing 400050，China）

OBJECTIVE：To determine the contents of ophiopogon Ra and cixi-ophiopogon A fromOphiopogon japonicusby HPLC.METHODS：The determination was performed on Waters C18（150 mm×4.6 mm，5μm）column with mobile phase consisted of acetonitrile-water（35 ∶65）at flow rate of 1.0 mL·min-1.The detection wavelength was set at 208 nm and the column temperature was room temperature.RESULTS：The linear range of ophiopogon Ra was 1.88～9.40 μg（r＝0.999 6）with an average recovery of 100.2%（RSD＝1.7%，n＝6）.The liner range of cixi-ophiopogon A was 1.96～9.80 μg（r＝0.999 5）with an average recovery of 99.7%（RSD＝1.7%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，rapid and accurate for the quality control ofO.japonicus.

Ophiopogon japonicus；HPLC；Ophiopogon Ra；Cixi-ophiopogon A；Content determination

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2010）39-3704-02

2009-11-02

2010-03-25）