癌复康胶囊Ⅱ号质量标准研究

孔俏玲，李瑞明（1.武汉大学，武汉市 40072；2.广东食品药品职业学院，广州市 510520；.中山大学附属第一医院药学部，广州市 510080）

癌复康胶囊Ⅱ号质量标准研究

孔俏玲1，2＊，李瑞明3（1.武汉大学，武汉市 430072；2.广东食品药品职业学院，广州市 510520；3.中山大学附属第一医院药学部，广州市 510080）

目的：建立癌复康胶囊Ⅱ号的质量标准。方法：采用薄层色谱（TLC）法对方中葛根、西洋参进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对葛根素进行含量测定。结果：TLC斑点清晰、分离度好，阴性对照无干扰；葛根素检测浓度在50.0～750.0 μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r＝0.999 9），平均回收率为99.51%，RSD＝0.81%（n＝6）。结论：定性定量方法操作简便，结果准确、可靠，精密度好，所建标准可用于该制剂的质量控制。

癌复康胶囊Ⅱ号；质量标准；葛根素；薄层色谱法；高效液相色谱法

癌复康胶囊Ⅱ号是由当归、升麻、葛根、苦参、西洋参等15味药构成，具有独特疗效的医院制剂。临床研究发现，癌复康胶囊Ⅱ号具有活血抗癌的功效，可以提高人体机能，加快术后康复，减轻因放、化疗带来的副作用，在癌症的辅助治疗及术后康复等方面有满意的临床效果。笔者对本品进行新的质量标准的制定，增加葛根、西洋参2味药材的薄层色谱（TLC）鉴别。同时，由于葛根为本品的主要药味之一，葛根素（Puerarin）为葛根的主要成分之一[1]，因此，本试验采用高效液相色谱（HPLC）法测定癌复康胶囊Ⅱ号中葛根素含量，以有效控制产品的内在质量，提高临床疗效。

1 仪器与材料

1.1 仪器

L114型万分之一电子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；CQ-25型超声波仪（上海超声波仪器厂）；硅胶G、H薄层板（青岛海洋化工厂）；2100型紫外-可见分光光度计及HPLC仪，包括SPD-10Avp紫外检测器、LC-10ATvp泵、N-2000双管道色谱数据工作站（日本岛津公司）。

1.2 试药

葛根素对照品，葛根、西洋参对照药材（中国药品生物制品检定所，批号分别为0125-200207、1175-200501、120997-200508）；癌复康胶囊Ⅱ号样品及阴性样品均由天津中医学院第二附属医院制剂室自制；水为2次重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 定性鉴别

2.1 葛根的TLC鉴别[2，3]

取本品内容物粉末6 g，加甲醇30 mL，超声1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液；另取葛根对照药材粉末6 g，同法制成对照药材溶液；再取缺葛根阴性样品粉末6 g，同法制成阴性对照溶液。照TLC法[2]试验，吸取上述3种溶液各6 μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，使成条状，以氯仿-甲醇-水（5∶1∶0.1）为展开剂，展开，展距为13 cm，取出，晾干，紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑；阴性对照无干扰。葛根的TLC见图1。

2.2 西洋参的TLC鉴别[2]

取本品内容物粉末3 g，加甲醇25 mL，加热回流1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，乙醚振摇提取2次，每次10 mL，水层再用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次15 mL，合并饱和正丁醇溶液，用水洗涤2次，每次10 mL，再用稀氨水10 mL洗涤1次，弃去水层，饱和正丁醇溶液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液；另取西洋参对照药材粉末1 g，同法制成对照药材溶液；再取缺西洋参阴性样品粉末3 g，同法制成阴性对照溶液。照TLC法[2]试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液各4 μL，对照药材溶液2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以氯仿-甲醇-水（69∶27∶4）为展开剂，展开，展距为12 cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点清晰，紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点；阴性对照无干扰。西洋参的TLC见图2。

图1 葛根的TLC1.供试品；2.葛根对照药材；3.阴性对照Fig 1 TLC of Pueraria lobata1.test sample；2.Puerariae Lobatae Radix；3.negative control

3 葛根素的含量测定

3.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Thermo CTO-10A（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（25∶75）；检测波长：250 nm；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL；柱温：30 ℃；柱压：106 Pa；灵敏度：0.01 AUFS。理论板数按葛根素色谱峰计算为5 340，其余组分的色谱峰能达到基线分离，分离度为1.9。供试品与葛根素对照品在相同时间点出现同一色谱峰，阴性对照未出现色谱峰。色谱见图3。

3.2 溶液的制备[4]

3.2.1 对照品溶液的制备 准确称取葛根素对照品3.1 mg，置于100 mL量瓶中，加50%甲醇水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得0.031 mg·mL-1的葛根素对照品溶液。

图2 西洋参的TLC1.供试品；2.西洋参对照药材；3.阴性对照Fig 2 TLC of Panax quinquefolium1.test sample；2.Panacis Quinquefolii Radix control；3.negative control

图3 高效液相色谱图A.供试品；B.葛根素对照品；C.阴性对照Fig 3HPLCA.test sample；B.Puerarin control；C.negative control

3.2.2 供试品溶液的制备 取样品5粒，倾出内容物（约相当于含葛根素0.740 6 mg），置于50 mL量瓶中，加50%甲醇水溶液近刻度，超声处理1 h，取出，放冷，再加50%甲醇水溶液至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。

3.2.3 阴性对照溶液的制备 取本品缺葛根的阴性样品粉末适量（约2 g），按“3.2.2”项下方法同法制成阴性对照溶液。

3.3 标准曲线的制备

精密吸取0.031 mg·mL-1的葛根素对照品溶液1、3、6、9、12、15 μL，按上述色谱条件进样测定。以葛根素检测浓度（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝4 118.9X+404.12（r＝0.999 9）。结果表明，葛根素检测浓度在50.0～750.0 μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

3.4 精密度试验

取同一批次（批号：050302）供试品溶液适量，按上述色谱条件进样测定6次，记录色谱图。结果，RSD＝2.18%（n＝6），表明本方法精密度较好。

3.5 重复性试验

分别取同一批（批号：050302）样品6份，按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件测定，记录色谱图。结果，RSD＝1.74%（n＝6），表明方法重复性较好。

3.6 稳定性试验

取供试品溶液（批号：050302），分别在0、2、4、6、8、10 h进样，连续进样6次，照上述色谱条件测定。结果，RSD＝1.17%（n＝6），表明供试品溶液在10 h内稳定。

3.7 加样回收率试验

精密称取样品（批号：050302）适量（共6份），分别置于50 mL量瓶中，各加0.03 mg·mL-1的葛根素对照品溶液10 mL，摇匀后再各加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，超声1 h，再加50%甲醇至刻度，滤过，取续滤液，每份精密量取10μL进样测定，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

3.8 样品含量测定

取5个批号的癌复康胶囊Ⅱ号，按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件测定，按外标法计算葛根素含量。结 果 ，5批（批 号 ：0503022、0503023、0503024、0503025、0503026）样品的含量分别为0.441 2、0.442 2、0.434 1、0.440 9、0.437 6 mg·mL-1，平均含量为0.439 2 mg·mL-1，RSD＝1.42%（n＝6）。

4 讨论

葛根的TLC鉴别，把展开剂氯仿-甲醇-水的比例7∶2.5∶0.25[2]改为5∶1∶0.1，相应地降低了展开剂的极性，从而降低斑点随展开剂移动的速度，达到更好的分离效果。

取0.05 mg·mL-1的葛根素对照品溶液进行紫外扫描。结果，葛根素在250 nm和306 nm波长处各有一个吸收峰。查阅资料可知，虽然选择306 nm作为检测波长时色谱图中的组分峰会减少，色谱图较为简单，但选择250 nm作为检测波长，灵敏度最高，能有效检测出葛根素特征峰，故确定选择250 nm作为检测波长。

[2，5，6]，分别用 95%、30%、50%、25%的甲醇，超声提取（20、30、60 min）样品。结果，以50%甲醇超声提取60 min的供试品溶液在甲醇-水（25∶75）为流动相的条件下，色谱效果最佳。较文献[3]介绍的提取有效成分效率更高的热回流法提取操作简单、损失率低、主峰分离好。

根据2005年版《中国药典》（一部）中HPLC法测定葛根素含量的方法，选择甲醇-水（25∶75）为流动相。结果，葛根素的分离情况很好，保留时间较短，约为13 min；其余组分亦能在较短的时间内出峰，从而缩短了分析时间。

综上，本试验制定的方法操作简便，结果准确、可靠，精密度好，所建标准可用于该制剂的质量控制。

参考文献

[1]方建国，潘学晖，王文清，等.高效液相色谱法测定脉君安胶囊葛根素与氢氯噻嗪含量[J].医药导报，2008，27（5）：592.

[2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：附录31、234、附录313、87.

[3]彭菊艳，王俊儒，张义英，等.葛根有效成分的含量测定与提取工艺优化[J].陕西农业科学，2005，51（3）：52.

[4]刘同祥，王 勇.HPLC测定消渴胶囊中葛根素的含量[J].云南中医学院学报，2009，32（3）：33.

[5]郑国华，徐 晶，陶君彦，等.儿泻停胶囊的质量标准研究[J].中医药学刊，2005，23（7）：1 318.

[6]方继辉，朱炳辉，邹玉婷，等.复方葛根合剂及葛根中葛根素含量高效液相色谱分析[J].中国药学杂志，2001，36（5）：336.

Study on Quality Standard of AifukangⅡCapsules

KONG Qiao-ling（Wuhan University，Wuhan 430072，China）
KONG Qiao-ling（Guangdong Food and Drug Vocational College，Guangzhou 510520，China）
LI Rui-ming（Dept.of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Sun Yet-sen University，Guangzhou 510080，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard for AifukangⅡcapsules.METHODS：TLC was used for the qualitative identification ofPueraria lobataandPanax quinquefolium.HPLC was used to determine the content of puerarin.RESULTS：TLC spots were clear and well-separated without negative interference.The linear range of puerarin was 50.0～750.0 μg·mL-1（r＝0.999 9）with an average recovery of 99.51%（RSD＝0.81%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，accurate and reliable with good precision.It can be used for the quality control of AifukangⅡcapsules.

AifukangⅡ capsules；Quality standard；Puerarin；TLC；HPLC

R283.65；R927.1

A

1001-0408（2010）39-3724-03

2010-04-02

2010-08-30）