HPLC测定润肺止咳颗粒黄芩苷的研究

罗建福，李建利

（1.四川省三台县中医医院，四川三台 600000；2.四川省中医药科学院中医研究所，四川成都 610031）

HPLC测定润肺止咳颗粒黄芩苷的研究

罗建福1，李建利2

（1.四川省三台县中医医院，四川三台 600000；2.四川省中医药科学院中医研究所，四川成都 610031）

目的：建立润肺止咳颗粒的含量测定标准，更有效地控制该产品质量。方法：含量采用高效液相色谱（HPLC）测定制剂中的黄芩苷。高效液相色谱条件：KromasilODS-1C18，流动相：甲醇－0.32%磷酸（46.9∶53.1）。结果：HPLC准确、可靠，回收率为95%～105%，RSD为1.85%。结论：该标准可用于润肺止咳颗粒含量质量控制。

润肺止咳颗粒；黄芩；黄芩苷；高效液相色谱

润肺止咳颗粒系四川省科学技术厅科研课题，由黄芩等药材制成的中药复方制剂，具有清热解毒、化痰止咳的功效。其是治疗咳嗽、发热、吐黄痰或脓痰，咽喉痒痛有效创新药物。本文建立了黄芩苷的含量测定项目。

1 仪器与试剂

仪器：SHIMADZU高效液相色谱仪（LC-10ATVP双泵溶剂输送系统，SPD-M10AVP检测器；CTO-10ASVP柱温箱)；KQ-400DB型数控超声清洗波器（工作频率：40 kHz，功率：400 W；昆山市超声仪器有限公司）；FA1104型电子天平（感量：0.01 mg，上海精科)；SZ-93型自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂）。对照品：黄芩苷（含量测定用；批号715-200111）；由中国药品生物制品检定所提供。

试剂：甲醇、磷酸为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。药品：润肺止咳颗粒，四川省第二中医医院制剂室生产。

2 实验与结果

2.1 试验条件

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为：甲醇-0.32%磷酸（46.9∶53.1），流速：1.0 ml/min；柱温：30℃；检测波长为280 nm；理论塔板数按黄芩苷峰面积计算应不低于3000。

2.2 测定方法

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1毫升含59 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品约0.1 g，精密称定，置50 ml容量瓶中，加入70%乙醇约48 ml，超声处理60 min，取出，放冷，加70%乙醇至刻度，滤过，取续滤液过微孔滤膜，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性溶液的制备 精密称取按处方制成的缺黄芩的样品3 g，照供试品溶液的制备方法制备。

2.3 测定波长的选择

黄芩苷的测定波长为280 nm。

2.4 空白试验

按上述色谱条件，吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性溶液各10 μl，分别注入色谱仪中。供试品色谱中，在与对照品色谱图相应位置上，有一相同的色谱峰，阴性溶液在此保留时间无干扰。

2.5 测定方法

分别精密吸取对照品溶液4、10 μl和供试品溶液10 μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

2.6 方法学考察

2.6.1 线性关系 精密称取黄芩苷对照品5.9 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，得每毫升含0.059 mg的溶液。精密吸取上述溶液 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 μl注入液相色谱仪测定，结果见表1。

表1黄芩苷对照品线性关系考察测定结果

以峰面积积分值Y为纵坐标，进样量X（μg）为横坐标（图 1），并进行线性回归，得回归方程：Y=3287760X-42.156 15，r=0.999 9。

由于标准曲线未过原点，因此每次测定时，均随行测定2个不同进样量的黄芩苷对照品，记录峰面积并算出标准曲线，再由标准曲线计算样品的含量。

图1 实验图

2.6.2 精密度试验 精密吸取线性考察项下对照品溶液5 μl注入液相色谱仪，连续进样5次，测得黄芩苷峰面积的相对标准差(RSD)<3%，说明精密度良好。

2.6.3 重复性试验 按拟定的含量测定方法，对同一批样品，同时制备五份样品供试品溶液，分别精密进样10 μl，计算黄芩苷含量，重复性试验结果RSD<2.296%，说明提取和检测方法重现性好，故可行。

2.6.4 稳定性试验 取对照品溶液 5 μl,分别于 0、1、2、3、4、7、10 h进样10 μl，测得对照品峰面积值的相对标准偏差为1.148%，试验表明，对照品溶液在10 h内基本稳定。

2.6.5 回收率试验 精密称取已知含量(1.874%)的样品0.2 g，精密称定，分别加入对照品适量，按前述成品供试品溶液的制备方法及色谱条件进行测定，按以下公式计算加样回收率，结果见表2。

以下列公式计算回收率。

表2 回收率试验结果

以上试验结果表明：本法回收率良好。

2.7 样品测定

取不同批号的样品，按前述拟定的含量测定方法进行含量测定，结果见表3。

表3 样品中黄芩苷含量测定结果（n=2）

根据以上测定结果，考虑到药材的来源、产地等级、炮制加工、制剂生产及贮藏等因素，考虑以样品黄芩苷平均含量的80%计算，本标准暂定本品每袋含黄芩以黄芩苷计，不得少于90 mg。

3 讨论

采用HPLC对润肺止咳颗粒黄芩苷进行测定。结果方法可靠，操作简便，专属性强，可以作为润肺止咳颗粒含量控制的有效方法。

原实验选择中国药典2005年版一部黄芩项下HPLC测定黄芩苷色谱条件，流动相为甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）干扰较大，后改为甲醇-0.32%磷酸（46.9∶53.1），分离效果良好。

根据HPLC对润肺止咳颗粒黄芩苷测定结果计算，黄芩苷转移率达70%以上，从而证明了工艺稳定与合理。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版[M].一部.北京:化学工业出版社,2005.

[2]彭华,周自新.黄连及其制剂中小檗碱的含量测定[J].中成药研究,1984,6(12):13.

[3]阴健.中药现代研究与临床应用[M].北京:学苑出版社,1993,

[4]王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究[M].北京:中国医药科技出版社,2000.

[5]陈发奎.常用中草药有效成分含量测定[M].北京:人民卫生出版社,1997.

[6]王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究[M].北京:中国医药科技出版社,2000.

[7]苗明三,李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京:人民卫生出版社,2000.

Research by determine baicalin of HPLC for Runfei zhike granules

LUO Jianfu1,LI Jianli2
(1.Tradtional Chinese Medical Hospital of Santai County,Sichuan Province,Santai600000,China;2.Institute of Tradtional Chinese Medical Sichuan Province Academy of Chinese Medcial Sciences,Chengdu 610031,China)

Objective:To set up content standard of Runfei zhike granules.Methods:To determine baicalin of Runfei zhike granules by high performance liquid chromatography(HPLC).The determiation was done with a KromasilODS-1C18,mobile phase:methanol-0.32%phosphonic acid(46.9∶53.1)..ResultsThe present method was reliable and accurate,the recovery rates were 95%～105%,RSD were 1.85%.Conclusion:The standard may use to control content of Runfei zhike granules.

Runfei zhike granules;Scutellaria baicalensis;Baicalin;HPLC

R943.1

B

1674-4721（2010）12（a）-054-02

2010-06-22）