高效液相色谱法测定养阴降糖胶囊中葛根素的含量

林明越

（佛山市中医院，广东佛山 528000）

查阅相关文献[1]，养阴降糖胶囊由养阴降糖片（《卫生部药品标准之中药成方制剂》第五册）改变剂型而得，主要成分为党参、葛根、玄参、枸杞子、知母、川芎等12味药材。参照2005版药典[2]的含量测定方法，经过筛选，采用HPLC法测定胶囊中有效成分葛根素的含量，现报道如下：

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津高效液相色谱仪（LC-10Atvp泵，SPD-10Avp紫外检测器，Z2000色谱数据工作站）。分析天平（美国梅特勒），进样瓶（国产）。

1.2 试剂与试药

葛根素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：20080102），养阴降糖胶囊样品为生产厂家提供；甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择

采用 Agilent XDB C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相为甲醇∶磷酸盐溶液=20∶80，紫外检查波长为250 nm，柱温：室温。在此条件下，样品得到良好的分离，在葛根素的出峰位置无干扰峰出现，从而不干扰该样品的测定。

2.2 线性关系的考察

精密称取经无氧化二磷减压干燥的葛根素对照品1.00 mg，甲醇定容至 5 ml容量瓶中，分别取 80、160、320、480 μl至2 ml容量瓶中，甲醇定容至刻度。分别精密吸取10 μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，葛根素的浓度为横坐标进行回归计算，得葛根素的回归方程为：Y=2.50×106+5.5×104，相关系数 r=0.999 6，葛根素在 0.100～3.100 μg范围内呈良好的线性关系。图1。

2.3 重复性试验

称取本样品5份，3 ml水溶解后，按照对照品的制备方法制备样品，按上述方法经线性关系方程计算含量，其RSD=2.11%，结果可知本方法重复性良好。

2.4 精密度考察

精密吸取上述样品溶液10 μl入高效液相色谱仪中，连续进样5次，记录峰面积，峰面积的RSD=0.80%，结果表明，本方法的精密度良好。

2.5 稳定性考察

取样品溶液，分别于 0、4、8、12、16 h 测定样品中葛根素的含量，结果葛根素含量的RSD=1.12%，因此样品在16 h内稳定性良好。

2.6 回收率的考察

取定量已知含量的样品，采用加样回收法，加入适量的对照品溶液，依照上述方法制备供试品溶液，测定含量，计算平均回收率，结果见表1。

2.7 样品的测定

取样品适量，研钵研细混匀后，精密称取样品1.0 g，精密吸取甲醇定容至25 ml容量瓶中，称定，超声提取30 min后，再用甲醇定容至刻度，过滤后，精密吸取滤液10 ml，水浴蒸干后，加入5.0 ml水溶解，置中性氧化铝大孔吸附柱上，100 ml水洗涤后，用50%的乙醇200 ml洗脱，收集洗脱液后蒸干，用流动相溶液后，定容至2 ml容量瓶中，取10 μl高效液相色谱测定，结果表明本方法的测定结果良好。

表1 葛根素加样回收率的考察结果（n=5）

3 讨论

养阴降糖胶囊制剂中药味较多，且在制剂成品中葛根素的含量较低，且存在一定的干扰因素，因此对样品的前处理尤为关键[3]。本实验考察了流动相对葛根素含量测定的影响。考察了甲醇∶0.1%磷酸溶液=25∶75、甲醇∶水=40∶60、甲醇∶0.1%磷酸溶液=20∶80等流动相进行比较，其中以甲醇∶0.1%磷酸溶液=20∶80的保留时间较为合理，并且分离度良好，其他两种方法下葛根素的保留时间较短，且分离度差[4]。

在检测波长的选择方面，我们采取了称取葛根素对照品适量，用流动相稀释后制成对照品溶液，在180～325 nm波长范围内对葛根素的检测波长进行扫描，在250 nm波长处存在最大吸收，因此选择250 nm作为葛根素高效液相检查的波长条件[5]。

综合上述结果，HPLC法测定养阴降糖胶囊中葛根素的含量，操作简单[6]，灵敏度高，结果准确，因此，可以作为该胶囊剂实际生产中的质量控制标准。

[1]牛宇东,高东平,王云霞,等.HPLC法测定养阴降糖胶囊中葛根素的含量[J].陕西中医,2005,26(9):967-969.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版[M].一部.北京:化学工业出版社,2005:279.

[3]陆炜琨,曾芳,李媛.反相高效液相色谱法测定益气降糖胶囊中葛根素的含量[J].广东药学院学报,2008,24(5):475-477.

[4]邹安华.高效液相色谱法测定心康胶囊中葛根素的含量[J].白求恩军医学院学报,2007,5(1):33-34.

[5]张玉军,路玫.高效液相色谱法测定降糖舒分散片中葛根素的含量[J].广西医学,2008,30(12):1902-1903.

[6]丁爱英,李艳茹,曲佳,等.十味降糖胶囊葛根中葛根素的HPLC含量测定[J].齐鲁药事,2009,28(1):22-24.