单侧睾丸扭转复位后对侧睾丸组织CGRP和LDH的测定

包小周，秦乐，陈肖鸣

(温州医学院附属育英儿童医院 小儿外科，浙江 温州 325035)

单侧睾丸扭转好发于青春前期男性，除引起同侧睾丸受损外，也可累及对侧睾丸[1]。降钙基因相关肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）是目前已知的生物体内最强大的舒血管活性肽[2]，近几年来，被广泛应用于脑、心、肝、肾等组织器官的缺血再灌注损伤研究；但其在睾丸组织中的作用罕见报道。本研究拟通过动物实验观察单侧睾丸扭转复位后CGRP及乳酸脱氢酶（lactate dehydrojgenase，LDH）在对侧睾丸组织中浓度变化，了解CGRP在对侧睾丸中的作用。

1 材料和方法

1.1 动物分组 选取处于青春发育前期28～30 d的健康雄性SD大鼠30只，体重150～200 g，随机分为假手术组、扭转复位组和扭转切除组，每组10只。

1.2 动物模型建立 所有大鼠均在术前以25%乌拉坦行腹腔注射全麻。假手术组将左侧阴囊打开，分离暴露左侧睾丸后即予固定缝合。扭转复位组和扭转切除组先依Turner法[3]建立左侧睾丸扭转模型：左下腹小切口，游离左侧睾丸，切断睾丸引带，分离周围组织至附睾头，睾丸顺时针扭转720 °，固定扭转侧睾丸防止自然复位，维持4 h后原切口打开，扭转复位组复位扭转睾丸并固定后关闭切口；扭转切除组不予复位，直接切除扭转的睾丸及附睾，结扎精索末端后缝合切口。

1.3 标本制备 各组大鼠分别于术后4 h和24 h时以快速脱颈法处死5只，采集未扭转侧睾丸标本用于制备组织匀浆。

1.4 检测方法 按试剂盒要求制备组织匀浆；以ELISA法测定CGPP、LDH浓度。均严格按照试剂盒说明书操作。

1.5 统计学处理方法 多组比较用单因素方差分析，组间两两比较方差齐性用LSD检验，方差不齐性用Dunnett T3检验。

2 结果

2.1 相对于假手术组与扭转切除组，扭转复位组的对侧睾丸CGRP、LDH浓度（见表1）均在术后4 h起有明显升高（P<0.05），而假手术组与扭转切除组的同类指标比较差异无显著性。

表1 大鼠CGRP及LDH浓度值

2.2 Tuner法是较为成熟的睾丸扭转模型制作方法，经不断改良，现有操作有创口小、出血较少的优点，故本实验中无大鼠死亡；扭转复位组大鼠烦躁不安明显，其余2组未见此现象。麻醉苏醒后各组大鼠饮食情况良好，按统一条件饲养，未使用其他药物，但扭转复位组大鼠烦躁不安感明显，其余2组未见此现象。

2.3 术后4 h及24 h时取材时见扭转侧睾丸呈黑紫色，淤血肿胀明显（见图1）；各组对侧睾丸肉眼可见改变不甚明显（见图2）；既往曾行类似实验并行病理检查，示扭转侧睾丸出现大面积凝固性坏死，而对侧睾丸亦有不同程度受损[4]。

图1 扭转侧睾丸

图2 对侧睾丸

3 讨论

组织低氧时可导致乳酸堆积，从而引起LDH浓度上升，因此LDH水平可以反映组织的低氧程度。本实验中，相比于扭转切除组与假手术组，扭转复位组LDH的浓度4 h时即见明显升高，示对侧睾丸组织存在低氧情况。我们此前的类似实验也已证实对侧睾丸存在一定程度的缺血再灌注损伤[4，6]，与本实验结果相符。

而CGRP作为目前已知的生物体内最强大的舒血管活性肽，在周围神经系统中广泛分布，具有传递伤害性感觉信息、参与痛觉信息传入的调制、扩张组织血管等作用[2]。本实验中，相比于扭转切除组与假手术组，对侧睾丸组织中的CGRP 4 h时即开始升高，间接说明对侧睾丸存在明显的血管扩张现象。国内陈林等[5]应用B超观察单侧睾丸扭转复位后对侧睾丸血流情况，发现直至复位后72 h，对侧睾丸的血供仍远高于对照的假手术组，与本实验结果相符。

据本实验中对侧睾丸CGRP、LDH的浓度增高，以及既往实验中发现的对侧睾丸存在缺血再灌注损伤的情况，我们推测由于单侧睾丸扭转复位后对侧睾丸存在一定程度的缺血、低氧，引起局部包括自由基、一氧化氮、乳酸等在内的大量有毒物质积聚[6]，进而通过刺激广泛分布于对侧睾丸的周围神经而导致局部CGRP大量释放，引起对侧睾丸血管扩张，血供增加；就血管扩张本身而言，我们推测可能为一种拮抗组织缺血低氧的反应性保护机制，具体尚待进一步实验证实。

值得指出的是，CGRP与LDH两项指标在假手术组与扭转切除组对侧睾丸的比较中差异均无显著性，提示扭转切除组中大鼠的对侧睾丸未受明显影响。我们在既往的类似研究中也已证实扭转切除组的对侧睾丸无明显受损[6]。因此，我们认为在证实单侧睾丸扭转并出现严重坏死的情况下，不予复位而行睾丸切除可能对另侧睾丸组织有保护作用。

[1] 林涛,李旭良. 单侧睾丸扭转后对另侧睾丸影响的研究进展[J].临床小儿外科杂志,2003,2(6):442-443.

[2] 谢乐斯,郑林丰,曾志成,等. 大鼠脊神经后根切断后脊髓和背根神经节CGRP的表达变化 [J].神经解剖学杂志,2007,23(2):209-213.

[3] Turner TT, Bang HJ, Lysiak JL, et al.The molecular pathology of experimental testicular torsion suggests adjunct therapy to surgical repair [J].J Urol,2004,172(6):2574-2578.

[4] 王浩,秦乐,陈肖鸣,等. 大鼠一侧睾丸扭转后切除对另侧睾丸组织的保护作用 [J].温州医学院学报,2009,39(3):209-211.

[5] 陈林,詹维伟,吕琛,等. 单侧睾丸扭转后对侧睾丸损伤的超声造影实验研究 [J].中华超声影像学杂志,2008,17(11):998-1001.

[6] 秦乐,林孝坤,陈肖鸣,等. 一氧化氮在大鼠单侧睾丸扭转复位后对侧睾丸早期损伤中的作用 [J].温州医学院学报,2008,38(3):197-199.