538例新生儿溶血三项检查及抗体鉴定分析

焦立新,林乾飞,鞠瑞青,綦翠华

(1.长春市中心血站,吉林 长春 130033;2.济南大学食品科学与营养学系)

538例新生儿溶血三项检查及抗体鉴定分析

焦立新1,林乾飞1,鞠瑞青1,綦翠华2*

(1.长春市中心血站,吉林 长春 130033;2.济南大学食品科学与营养学系)

*通讯作者

新生儿溶血病(HDN)是由于母婴血型不合,母亲体内产生的IgG血型免疫抗体通过胎盘进入胎儿体内,使胎儿红细胞破坏。血型血清学检查能为新生儿溶血病患儿的换血和治疗提供依据,笔者对538例新生儿黄疸患者进行了溶血三项检测和抗体鉴定试验[1],现报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 2007年6月至2008年12月,长春市各临床医院儿科送检的新生儿黄疸血样。新生儿平均日龄是4天,男302例,女236例。

1.2 仪器与试剂 血型血清学专用离心机、数显电热恒温水温箱;聚凝胺试剂购自中山市生科试剂仪器有限公司;抗人球蛋白试剂、抗A和抗B血清、ABO标准红细胞、木瓜酶、筛选细胞和谱细胞购自上海血液生物医药有限公司。

1.3 方法 取新生儿血样3 000 rpm离心5 min,分离血浆和细胞,再继续进行直接抗人球蛋白试验、血清游离抗体测定试验、红细胞抗体放散及测定试验、ABO血型系统以外的抗体筛查及鉴定试验。

1.3.1 血型鉴定 取小试管分别标记 -A、-B、-D,分别加入患儿和母亲 3%红细胞悬液1滴,试剂抗血清1滴,1 000 rpm离心1 min后判定结果;母亲血型鉴定还需做反定型,待检血清2滴分别加入A、B、O标准红细胞各1滴,离心后判定结果。

1.3.2 直抗试验 患儿3%红细胞悬液1滴,加抗人球蛋白试剂1滴,1 000 rpm离心1 min后判定结果。

1.3.3 血清游离抗体试验 取小试管3支,分别标记Ac、Bc、Oc,各加入患儿血清2滴,再分别加入标准A、B、O红细胞各 1滴,将试管置于37℃30 min,三洗后加抗球蛋白试剂1滴,1 000 rpm离心1 min后判定结果。

1.3.4 红细胞抗体放散及测定试验(热放散法)(1)取三洗后患儿压积红细胞0.5-1 ml,加等量生理盐水置试管中,试管放入56℃水浴中10min(期间不停振摇),取出后置56℃热套管内,立即2 000 rpm离心5 min吸取上清液(即放散液);(2)小试管3支,标记EAc、EBc、EOc后,分别加入5%酶处理A、B、O红细胞各1滴,将吸取的放散液均匀分在三支试管中,将试管置于37℃30 min,三洗后加抗球蛋白试剂1滴,1 000 rpm离心1 min后判定结果。

1.3.5 红细胞血型抗体筛查试验(1)取小试管3支,分别标记 S1、S2、S3后,加入相应筛选细胞各 1滴和患儿红细胞放散液各2-5滴,试管置37℃30 min,三洗后加抗球蛋白试剂1 000 rpm离心1 min后判定结果。

1.3.6 红细胞血型抗体鉴定试验进一步用盐水、聚凝胺法、抗球蛋白试验进行抗体鉴定试验。所有实验操作均严格按照《中国输血技术操作规程》(血站部分,1997版)进行操作。

1.4 结果判断

1.4.1 新生儿溶血病游离、释放试验的判定 患儿血清或红细胞放散液中检测到针对其红细胞抗原的抗体为阳性结果。

1.4.2 通过直抗、游离、释放试验确定为ABO新生儿溶血病的方法(见表1)。

1.4.3 其他血型系统HDN的诊断方法:综合分析母子ABO和Rh血型、直抗和游离放散试验结果,可判断是否存在其他血型系统引起新生儿溶血可能性。如果不能除外,则需要用红细胞放散液进一步做血型抗体鉴定。

2 结果

2.1 新生儿血型血清学检测,明确母婴血型不合ABO-HDN诊断192例(35.7%),ABO-HDN可疑65例(12.0%),排除 ABO-HDN 281例 (52.2%)。

2.2 母-婴血型分布及新生儿血型血清学结果(见表2)。

表1 ABO新生儿溶血病的诊断方法

表2 母-婴血型分布及血型血清学结果

2.3 红细胞抗体筛查和鉴定试验结果 ABO血型系统以外的抗体鉴定试验阳性有5例(已经排除合并ABO溶血病),阳性率为0.93%。鉴定结果如下:抗-D 3例(母亲均为Rh阴);抗-E 1例;抗-c 1例。

3 讨论

新生儿溶血病是由于孕妇体内存在与胎儿红细胞不配合的IgG性质血型抗体,引起的同种被动免疫性疾病。理论上,凡是以 IgG性质出现的血型抗体都可以引起新生儿溶血病,其中ABO系统最常见,其次为Rh系统。

HDN的主要症状和体征有水肿、黄疸、贫血和肝脾肿大,黄疸深者可能并发核黄疸。症状轻重一般取决于孕妇体内IgG抗体种类及效价、胎儿代偿性造血能力以及免疫功能等因素。通过血清学检查可分析母婴血型是否不合、母亲血清中是否存在与患儿红细胞相对应IgG性质的抗体、患儿红细胞是否被来自母亲抗体所致敏,从而对新生儿溶血病进行诊断和治疗。

检测Rh系HDN的同时,注意母婴ABO系HDN的并存,患儿的血样本检查包括直抗、ABO和 Rh血型定型、乙醚放散试验、游离试验,排除合并ABO溶血病。如果Rh系HDN的三项试验为阳性,即可证实婴儿的红细胞被来自母体的IgG抗体致敏,需以缺乏该Rh抗体相应抗原的A(B)红细胞与婴儿红细胞放散液反应检测证实。

Rh新生儿溶血病的直抗都相当强,当直抗≥2+时,释放试验最好用乙醚放散,放散液做一组谱细胞,如此项试验阳性,就可以直接确诊为由免疫抗体所致的溶血病。抗体筛选和鉴定常使的试验方法有盐水介质试验法、抗球蛋白试验、聚凝胺法。

抗体鉴定的方法可按抗体的血清学行为和试验的具体条件选择[2,3]。为换血的新生儿配血当新生儿红细胞直抗阳性时,只需作主管配血,分别做盐水、聚凝胺法、抗球蛋白法;当母婴ABO血型配合时,配血尽量用母亲血清代替婴儿血清进行配血;当母婴ABO血型不配合时,配血应用婴儿细胞放散液代替血清进行配血。本组病例检测阳性率约36%,且大多数为ABO溶血,说明基层单位开展ABOHDN检测可以基本解决新生儿溶血病诊断问题。

总之,溶血三项检测在新生儿溶血病诊断中具有重要意义,其中以释放试验难度较大,实验中应注意放散时的温度、放散液的量、离心转速和时间等[4、5],确保实验的准确性。由于临床上ABO系统溶血病最为常见,因此放散方法也以热放散为主,遇到特殊情况,可考虑乙醚放散和抗体鉴定。试管法是经典的检测方法,操作比较烦琐且耗时,但是结果可靠。由于微柱凝胶卡使用简便、快捷,如果凝胶卡的质量经过确认,也可以采用该方法进行检测。

[1]李 勇,杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术[M].北京:中国科学技术出版社,1999.173-187.

[2]赖福才,王梁平,彭道波,等.112例O型孕妇新生儿溶血病检测[J].临床血液学杂志,2004,17(5):284.

[3]徐蕴华,刘善英.母儿血型不合的诊断与治疗[J].中国实用妇科与产科杂志,2001,17(10):583.

[4]刘达庄.免疫血液学[M].上海:上海科学技术出版社,2002.224-225.

[5]安万新.输血技术学[M].北京:北京科学技术文献出版社,2006.91-101.

1007-4287(2010)06-0901-02

2009-06-21)