注射用二丁酰环磷腺苷钙的血管刺激性、溶血性和过敏性研究

2010-08-21宋晓娜王子彪

中国医药指南 2010年27期

宋晓娜王子彪周丽

注射用二丁酰环磷腺苷钙（Calcium Dibutyryladenosine Cyclophosphate for injection）为蛋白酶激活剂，可催化人体内一氧化磷酸反应和三羧酸循环，激活人体各种反应。同时产生大量ATP，改善细胞能量代谢，促进神经再生，扩张血管，舒张平滑肌，改善心肌缺氧缺血等作用。为确保药品质量，保证患者用药安全、有效，避免毒副反应发生，本文对注射用二丁酰环磷腺苷钙的血管刺激性、溶血性及过敏性试验结果进行了详细阐述。

1 材料

1.1 药物

注射用二丁酰环磷腺苷钙：济南泰盛达医药技术开发公司提供。5%葡萄糖注射液：批号：08010903，浙江济民制药有限公司。过敏试验阳性对照物（4%卵白蛋白葡萄糖水溶液，取新鲜蛋清临用时在无菌条件下用5%葡萄糖注射液配制）。

1.2 受试动物

白色家兔9只，体质量2.22～2.51kg，雌雄各半。由河北医科大学动物中心提供，合格证号：06036。豚鼠18只，体质量261～293g，雌雄各半，由河北医科大学动物中心提供，合格证号：06037。

2 方法与结果

2.1 动物饲养环境

家兔：温度：（22±2）℃；湿度：（50±5）%；每笼1只；喂以家兔专用颗粒饲料，辅以新鲜蔬菜。实验前动物饮水、进食正常，状态良好。豚鼠：温度：（22±2）℃；湿度：（50±5）%；每笼3只；喂以豚鼠专用颗粒饲料，辅以新鲜蔬菜。实验前动物饮水、进食正常，状态良好。

2.2 试验方法

2.2.1 溶血性试验[1]

取健康家兔1只，颈动脉取血5mL至洁净干燥小烧杯中，用玻璃棒搅拌去纤维蛋白，加5%葡萄糖注射液5mL，3000转/min，离心10min，弃去上清液，再加10mL 5%葡萄糖注射液轻轻摇匀，离心，弃去上清液，如此反复几次至上清液不呈红色为止，然后按所得红细胞比容，用5%葡萄糖注射液配制成2%红细胞悬液，置冰箱备用；另取试管7支，1～5管分别加入0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL溶解后的注射用二丁酰环磷腺苷钙（临用时取1支注射用二丁酰环磷腺苷钙，用250mL 5%葡萄糖注射液溶解）并用5%葡萄糖注射液稀释至2.5mL，6号、7号试管中分别加入5%葡萄糖注射液2.5mL、蒸馏水2.5mL（完全溶血对照）。最后每管均加入2%兔红细胞悬液2.5mL，轻轻摇匀，置37℃水浴中，分别记录15、30min、1、2、4h各管的溶血和凝集情况。

溶液澄清，红色，管底无红细胞残留为完全溶血；溶液澄清，红色或棕色，管底尚有少量红细胞残留为部分溶血；红细胞全部下沉，上层液无色澄明为不溶血；虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散，或出现药物沉淀为凝集。

2.2.2 过敏性试验

豚鼠18只，按体质量、性别随机分为3组，每组6只，阴性对照组给予5%葡萄糖注射液0.5mL致敏，并以1.0mL该注射液进行攻击；阳性对照组预先以4%鸡蛋清0.5mL致敏，并以1.0mL该试剂进行攻击；受试药组以0.5mL溶解后的注射用二丁酰环磷腺苷钙致敏，并以1.0mL该药进行攻击。各组首先隔日腹腔注射药液0.5mL/只，共注射3次。然后将每组豚鼠分为2小组，其中1小组豚鼠在第一次腹腔注射药液后14d由前肢静脉注射溶解后的原药液1.0mL/只；另一小组于第一次腹腔注射药液后第21天从前肢静脉注射溶解后的原药液1.0mL/只。观察静脉注射后30min内的豚鼠过敏反应症状，并按表1评分标准进行评分。

表1 全身性过敏反应的评分标准

2.2.3 血管刺激性试验

取家兔8只，随机分为两组，每组4只，第一组家兔每日耳缘静脉缓慢滴注5%葡萄糖注射液24.0mL/kg，第二组动物亦每日由耳缘静脉缓慢滴注溶解后的注射用二丁酰环磷腺苷钙24.0mL/kg，连续滴注7d，末次给药后24h，每组取2只动物，木棒击毙家兔，剪取距注射部位1cm处和5cm处兔耳，放于10%福尔马林溶液中固定，石蜡包埋,HE染色，末次给药后72h，处死每组剩下2只动物，剪取距滴注部位1cm处和5cm处兔耳，放于10%福尔马林溶液中固定，石蜡包埋，HE染色。光镜下观察注射用二丁酰环磷腺苷钙给药后24及72h对兔耳血管的刺激性反应。

表2 注射用二丁酰环磷腺苷钙的溶血试验结果

表3 注射用二丁酰环磷腺苷钙过敏性试验结果

表4 家兔耳缘静脉滴注后肉眼观察结果

表5 注射用二丁酰环磷腺苷钙家兔耳缘静脉滴注后病理组织学检查结果

肉眼观察注射部位兔耳静脉有无充血、水肿变性、硬结及坏死现象，记录病变程度及出现血管组织变化的家兔数目，血管充血及水肿程度分为0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度，0度为无变化，Ⅰ度为轻微变化，Ⅱ度为明显变化，Ⅲ度为严重变化；病理组织学检查标准为观察注射部位兔耳静脉血管扩张充血、血栓形成、水肿及炎性细胞浸润等改变，每项内容按病变程度分正常、轻、中、重，分别以–、+、++、+++表示。

2.3 结果

2.3.1 溶血性试验

由表2所示注射用二丁酰环磷腺苷钙1～5管在4h内均未引起溶血和凝集反应。

2.3.2 过敏性试验

注射用二丁酰环磷腺苷钙的两组豚鼠分别于第1次腹腔注射后14d和第21天用溶解后的原药液进行攻击均未发生过敏性反应；而阳性对照组豚鼠于注射后3min内出现呼吸困难，抽搐倒下，而后死亡，豚鼠死亡均发生在注射后1～5min内。另外，阴性对照组6只豚鼠均未发生过敏反应，结果见表3。

2.3.3 血管刺激性试验结果

表4所示为肉眼观察结果，家兔耳缘静脉缓慢滴注注射用二丁酰环磷腺苷钙或5%葡萄糖注射液24.0mL/kg，1次/d，连续7d，末次给药后24、72h，肉眼观察给药组与对照组无明显区别。

表5所示为病理组织学检查结果，镜下可见给药后24h，距注射部位1cm处兔耳缘静脉可见炎性细胞浸润、轻微充血等，未见硬结、坏死现象。与1cm处相比，距注射部位5cm处兔血管炎性细胞浸润、充血明显减轻。给药后72h，1和5cm处兔血管炎性细胞浸润、充血均明显减轻。5%葡萄糖注射液组耳缘静脉组织病理学呈现相似的变化，与注射用二丁酰环磷腺苷钙给药组相比较没有明显差别。