HPLC-ELSD测定强心胶囊中黄芪甲苷质量比

陈 晶,高西蒙,王庆国,孙宏宇

(黑龙江中医药大学,哈尔滨 150040)

强心胶囊由附子(炮)、黄芪等十味药材组成,用于治疗轻、中度慢性充血性心力衰竭的复方制剂,其中附子(炮)为君药,经预试验重现性不强,因此选择了本处方中的臣药黄芪进行质量比测定,对制剂进行质量控制[1].

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters 600E高效液相色谱仪 ;奥特 2000蒸发光散射检测器;Empower色谱工作站;梅特勒 AE-240电子分析天平.

1.2 试药

乙腈(色谱纯);氮气(高纯氮);重蒸馏水;黄芪甲苷对照品(批号 110781-200412中国药品生物制品检定所);强心胶囊(050501,050502,050503自制)其余试剂为分析纯.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

VP-ODS(4.6 mm×150 mm.5 μm),柱温35℃,流动相为乙腈 -水(34∶66),流速为 1.0 mL/min进样量为 20μL.蒸发光散射器漂移管温度 105℃,氮气流速 2.5 L/min[2-3].

2.2 对照品溶液的制备

精密称取黄芪甲苷对照品适量,加甲醇制成每1mL含 0.65mg的溶液,即得.

2.3 供试品溶液的制备

取本品装量差异项下的内容物[4],混匀,称取5.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加甲醇 40mL,超声提取 3次,每次 30m in,滤过,合并滤液,蒸干,残渣加水 10m L使溶解,饱和正丁醇溶液萃取4次(30、30、20、20mL),合并正丁醇溶液,用氨试液提取 2次(每次 30 mL),弃去氨层,再用正丁醇饱和水洗涤 2次(每次 20m L),将正丁醇溶液蒸干,残渣加甲醇5 mL使溶解于 5mL量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜滤过,弃去初滤液,收集续滤液,即得.

2.4 线性关系考察

取上述黄芪甲苷对照品溶液,分别吸取 4、8、12、16、20μL,分别进样,按色谱条件测定峰面积,以进样量的自然对数为横坐标(X),峰面积积分值的自然对数为纵坐标(Y),回归方程为 Y=1.672 2X+4.590 4,r=0.999 5,表明黄芪甲苷在 2.60～13.0μg之间成良好的线性关系.

2.5 精密度试验

精密吸取上述对照品溶液 10μL重复进样 5次,按色谱条件测定黄芪甲苷积分值,RSD=1.17%.

2.6 稳定性试验

取上述制备好的供试品溶液,精密吸取20μL,分别在 0,2,4,6,8,10,12 h进样测定,黄芪甲苷平均峰面积积分值为 493 878.2,RSD=2.28%,表明样品溶液在 12 h内稳定.

2.7 重复性试验

取同一批样品(050501)5份,按供试品溶液方法制备成样品溶液,测定样品质量比,结果样品质量比平均结果为 0.145mg/粒,RSD=1.38%.

2.8 加样回收率试验

精密称取已知质量比的样品 2.5 g,5份,分别加入已配好的对照品溶液(0.111 6 mg/m L)1mL,按照供试品溶液制备的方法制成样品溶液,依法测定计算回收率.结果见表1.

表1 加样回收率试验

2.9 阴性空白溶液

按制备工艺制成不含黄芪的强心胶囊,按供试品溶液方法制成阴性空白溶液,吸取 20μL注入液相色谱中,结果表明空白溶液在黄芪甲苷出峰处无峰干扰.

2.10 样品测定

取 3批样品(050501,050502,050503)按供试品溶液制备方法制成供试品溶液,精密吸取对照品溶液 10μL、20μL、样品溶液 20μL,注入色谱仪中,以外标两点对数法计算样品质量比,结果见表2.

表2 3批样品的质量比

3 结 语

样品制备过程中,曾考察过索式回流提取和超声提取 2种方法,经比较两者质量比无明显差异(超声提取 530 428;索式回流 524 322),超声具有提取时间短,方便,不用加热等优点,因此在制定标准时选择了超声提取.

经预试验考察,上大孔树脂和不上大孔树脂两种处理方法中,上大孔树脂的样品色谱峰数目较少,但质量比比不上大孔树脂明显减少,因此为减少样品在质量比测定结果中的损失,没有选择大孔树脂处理.

通过参考文献及预试验,最后确定流动相乙腈-水 (34∶66),柱温 35 ℃,流速为 1.0 mL/min,蒸发光散射器漂移管温度 105℃,氮气流速为2.5 L/min.

[1] 李小安.HPLC-ELSD法测定暖胃舒乐胶囊中黄芪甲苷的含量[J].现代中医药,2007,27(2):67.

[2] 吴巧风,范 英.HPLC法测定补血胶囊中黄芪甲苷的含量[J].中成药,2003,34(5):425.

[3] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社,2005,212.

[4] 张智圆,沈志滨,季宇彬.HPLC同时测定制草乌中三种生物碱质量比[J].哈尔滨商业大学学报:自然科学版,2010,26(1):1-3,8.