实验室培养果蝇的方法和注意事项

冯 航

西安文理学院生命科学系，陕西 西安 710065

果蝇属于昆虫纲，双翅目，与家蝇是不同的种。它的生活史包括卵→幼虫→蛹→成虫。果蝇具有生活史短、繁殖率高、饲养简便等特点，是研究遗传学的好材料，尤其在基因分离、连锁、交换等方面，对果蝇的研究更是广泛而充分[1]。因此，做好果蝇培养对遗传学实验有着重要的作用。

1 果蝇的培养

1.1 培养基的配方

培养基是饲养果蝇的基础，不同材料的配制方法不尽相同。结合几年的培养经验，目前西安文理学院生命科学系采用的效果较好的配方为：玉米粉100g，糖130g，琼脂10g，酵母片20g，苯甲酸0.75g，丙酸1.25ml，加蒸馏水1200ml。

1.2 配制方法

1）取一定量的水将玉米粉拌匀，加热至糊状。期间要不断搅拌，防止糊底；

2）将糖和琼脂加入水中煮沸溶解；

3）将酵母片在研钵中加水研磨至糊状。

将1）、2）二者混合后降温至50℃左右时加入3）苯甲酸和丙酸，搅拌均匀后即可分装到培养瓶中。

1.3 培养基的分装

将干净的培养瓶在121℃下灭菌20min，倒入约2.5cm厚的未完全冷却的培养基。待培养基冷却凝固后即可将果蝇转入培养。

1.4 果蝇处理

因为果蝇对乙醚很敏感，易麻醉，可以对作种的果蝇轻度麻醉。（果蝇翅膀外展45℃角表示已死亡）。选用广口瓶作为麻醉瓶，瓶塞内部塞上适量的脱脂棉，滴加数滴乙醚。培养瓶口与麻醉瓶口对接轻拍上方的培养瓶将果蝇落到麻醉瓶里。然后迅速盖好两个瓶塞，半分钟左右，果蝇被麻醉，活动缓慢，注意麻醉不得过度，如果果蝇两翅展开且肢体僵硬，说明已致死。因此，必须抓紧时间移人新培养瓶中，可将培养瓶横卧，用干净毛笔把果蝇挑人，待果蝇清醒后，再竖立加塞，防止果蝇粘在培养基上[2]。

1.5 原种培养

留种培养时，事先检查一下果蝇有没有混杂，以防原种丢失。亲本的数目一般每瓶5～10对[1]。原种一般可在18℃下培养。原种大约4周左右换一次培养基，要多注意观察，具体根据培养温度的不同，视培养基的消耗程度而定。每一原种培养至少保留两套，并注明名称和日期，培养时避免日光直射。

2 注意事项

果蝇培养过程中有几个关键性的环节，如若掌握不好，将不能使果蝇正常生长，甚至导致部分或全部死亡。因此，应特别注意[3]。

2.1 玉米粉的溶解

玉米粉一定要先用凉水拌匀后再加热，不能直接倒入加热的培养基中，否则容易聚集成团，不易溶解。配制的培养基容易出现块状，不易于果蝇的利用。

2.2 添加酵母的时间

酵母为活性物质，高温易失活。因此应当在培养基冷却到50℃左右时加入到培养基中，切勿将酵母粉加入到培养基中直接煮沸。

2.3 培养温度

果蝇的培养温度要以具体使用情况而定，在遗传学教学实验中，由于实验时间相对较短，要求果蝇的繁殖速度相对就较快，因此可以在23～25℃的条件下培养，而保种则应在18℃左右下培养，以免培养基消耗过快，减少转接次数。

3 常见问题处理

3.1 培养瓶内发霉

因为酵母菌与霉菌的生活环境相似，且由于培养过程几乎都在培养箱中进行，通风不良，时间久了容易滋生霉菌。因此，要使用的培养瓶要严格灭菌，当室温与培养温度相似时可以在实验室中培养，加强通风。对已经发霉的培养基，在具有备用种时可以将其淘汰，若仅此一瓶，就要杀死果蝇身上携带的霉菌。方法是将带有霉菌孢子的成蝇倒入空培养瓶中，棉塞上倒适量的75%酒精，再将瓶口塞紧，利用酒精具有挥发性，挥发后的酒精充满整个瓶内，从而将果蝇身上的霉孢子杀死。在操作上应注意两点：一是倒在棉塞上的酒精量要合适，过多果蝇易醉昏，过少杀死不了霉菌孢子；二是果蝇呆在空瓶内的时间要恰当，以2d为好[4]。转入新培养基的第二天再次把果蝇转到另一新培养基中，反复5～6次。

3.2 培养瓶内壁凝结水珠

培养基分装到培养瓶时热蒸汽会凝结在瓶壁，如果过早使用，果蝇会溺死。因此，在分装后要自然冷却一段时间，待瓶壁的水珠蒸发后使用。如若放置在冰箱内保存，使用前若发现瓶壁沾有水珠，则需用灭过菌的滤纸条吸干后使用。

3.3 培养基干结成块

一般配制的培养基放置时间过久或培养温度较高时，培养基因为失水而与瓶壁分离，干结成块，此种情况下果蝇无法正常生存，更无法产卵。因此，要及时更换培养基。

3.4 培养基过湿

果蝇代谢过程中会产生一定的废物，时间长了容易使培养基变成稀糊状，果蝇容易粘附在培养基表面，由于无法飞行和觅食而死亡。因此，要及时根据培养基的情况转接果蝇。

3.5 果蝇生活力降低

由于果蝇长期在偏低的温度下保种，低温使其生活力下降，许多性状出现退化，甚至变异，影响实验结果。因此，每隔一定时期必须进行复壮。复壮方法为用乙醚把果蝇麻昏，选择个体较大的、性状具有本品种特点的雌雄果蝇进行混合培养。再在产出的一代中又选择个体较大的、性状具有本品种特点的雌雄果蝇进行混合培养。如此进行一次，后代就能保持个体较大，又遗传了本品系性状的原种[5]。

[1]刘祖洞，江绍慧.遗传学实验[M].北京：高等教育出版社，1987：63.

[2]陈晓芸.果蝇的饲养[J].生物学通报，2006（2）：51.

[3]王转斌.果蝇的保种技巧及唾液腺染色体的制备[J].实验技术与管理，2002（3）：38.

[4]龚慧明.果蝇培养基长霉的处理措施[J].生物学教学，2007（4）：52.

[5]龚慧明.果蝇饲养管理的几个问题[J].生物学通报，2005（4）：5.