千佛菌对衰老模型小鼠SDH和MDA影响的实验研究

孙瑜,席孝贤 ,贺新怀

(陕西中医学院,陕西咸阳712046)

千佛菌(Grirola frondosa)是一种名贵的药食两用高等真菌类中药,含有多种活性组分。本研究旨在从D-半乳糖所致衰老模型小鼠出发,探讨千佛菌的抗衰老作用,为开发中药新制品、延缓衰老及防治老年病提供实验与理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验药物制备 千佛菌干品浸泡煮沸30 min过滤,重复2次;将2次所得滤液混合,浓缩制成100%(W/V)浓度;50%浓度生理盐水稀释。D-半乳糖注射粉针剂制成5 mg/mL D-半乳糖生理盐水溶液。

1.2 试剂与仪器 SDH、MDA测定试剂盒,购自南京建成生物工程研究所。723型分光光度计;KDC-40低速离心机。

1.3 动物分组 昆明种小鼠40只,雌雄各半,体重(20±2)g,按体重随机分为4组：正常对照、衰老模型、千佛菌大(100%浓度)、小剂量组(50%浓度),每组10只,雌雄各半。

1.4 造模及用药 参照文献[1]除正常对照组,其余各组小鼠每日腹腔注射D-半乳糖溶液0.4 mL/只,连续6周。自21 d起,千佛菌大、小剂量组分别灌胃100%和50%浓度药液0.4 mL/只,每日1次,连续3周。

1.5 脑组织SDH、MDA活性的测定 末次给药12 h后,取脑组织按 1∶9比例匀浆,3 000 r/min离心15 min,制成10%的脑组织匀浆液,并参照试剂盒测定脑组织SDH及MDA。

2 实验结果

2.1 对小鼠脑SDH活性的影响 见表1。

2.2 对小鼠脑MDA活性的影响 见表2。

表1 实验各组对小鼠脑SDH活性的影响(±s)

表1 实验各组对小鼠脑SDH活性的影响(±s)

注：与正常对照组比较,▲▲P＜0.01;与模型组比较,#P＜0.05,##P＜0.01。

组 别 n SDH/(U/mgprot)正 常 对 照 组 10 9.1±1.7模 型 对 照 组 10 5.8±1.2▲▲千佛菌小剂量组 10 7.3±1.9#千佛菌大剂量组 10 8.6±2.1##

表2 实验各组对小鼠脑MDA活性的影响(±s)

表2 实验各组对小鼠脑MDA活性的影响(±s)

注：与正常对照组比较,▲▲P＜0.01;与模型组比较,#P＜0.05,##P＜0.01。

组 别 n MDA/(mmol/mg)正 常 对 照 组 10 11.34±2.12模 型 对 照 组 10 16.91±3.19▲▲千佛菌小剂量组 10 15.52±3.17#千佛菌大剂量组 10 12.35±2.74##

3 讨论

琥珀酸脱氢酶(SDH)存在于有氧呼吸细胞线粒体内膜,不需辅酶,自身有黄素蛋白作为辅基,常用来反映三羧酸循环情况,是线粒体标志酶之一。衰老时线粒体发生肿胀、变性、空洞化、数量减少等一系列退行性改变[2],SDH活性的衰退与线粒体损伤同时出现且与线粒体数目呈正相关。所以SDH活性可反应线粒体能量代谢状况。丙二醛(MDA)介导自由基损伤,有很强的生物反应活性,能攻击所有的生物大分子,导致结构改变和功能丧失,最终引起细胞功能减退及细胞外环境发生与衰老相关改变,是生物膜磷酯中多不饱和脂肪酸受自由基攻击的终产物之一。多数文献报道,MDA水平在60岁以上老年组显著升高,而60岁以下人群相对稳定[3]。MDA可反映细胞损伤情况及机体衰老程度。

本实验SDH检测表明千佛菌可提高衰老模型小鼠SDH活性,同时降低MDA含量,且大、小剂量组间存在一定剂量依赖性,大剂量较小剂量有更显著的治疗效果。证明千佛菌可以提高机体抗氧化衰老能力,维持机体正常生理平衡。

[1]余资江,应大君,董世武,等.半乳糖急性致衰老动物模型剂量的探讨[J].解剖学杂志,2005,28(4)：424.

[2]Susan M,Tanhauser,PhilipJ,Laipis.Multiple deletions are perectable in mitochondrial DNA of aqine mice.J.Biol.Chem.,1995,270：24769-24775.

[3]Inal ME.Kanbak G,Sund E.Antioxidant enzyme activities and malondialdehyde levels related to aging[J].Clin Cheim Acta,2001,305：75.