HPLC法测定健胃消食片中橙皮苷的含量

叶鹏

健胃消食片由太子参、陈皮、山药、麦芽(炒)、山楂五味药制成，具有健胃消食之功效, 用于脾胃虚弱所致的食积，症见不思饮食、嗳腐酸臭、脘腹胀满；消化不良见上述证候者。本药为2005年版《中国药典》一部收载品种[1]。在药典含量测定项中规定其流动相为甲醇-0.5%冰醋酸(40：60)。实际工作中，当我们需要长时间运行色谱仪以检验多批样品时，冰醋酸的挥发性会在一定程度上带来色谱条件的波动，从而影响色谱峰的分离效果，如改用不具有挥发性的磷酸，则可以改善色谱条件的波动性。笔者通过方法学试验证明了这种改动的可行性。实践证明新方法准确、可靠，可以更好地控制产品的内在质量,保证临床用药的安全有效。

1 仪器与试药

岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-6A紫外检测器，N2000色谱工作站; AL 104 电子分析天平(Mettler Toledo)；橙皮苷对照品(供含量测定用，中国药品生物检定所，批号：0721-200010)，健胃消食片(自制，0.5g/片，批号：070601、070602、070603)；乙腈(色谱纯)，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：SHIMADZU VP-ODS(150mm×4.6mm,5μ)；流动相：乙腈-0.2%磷酸(20：80，v/v);检测波长：283nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量20μl；理论塔板数按橙皮苷色谱峰计算不低于2000。

2.2 专属性试验 对照品溶液的制备：取橙皮苷对照品12.5mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取3ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含橙皮苷15μg)。

供试品溶液的制备：取本品10片，研细，取约2g，精密称定，精密加入甲醇20ml，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照液的制备：按制备工艺制备不含陈皮的阴性颗粒，取适量，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照液。

取橙皮苷对照品溶液、健胃消食片供试品溶液、阴性对照液，分别注入液相色谱仪，绘制图谱，结果表明，处方中其它药味及辅料对橙皮苷的检出无干扰(见图1)。

2.3 线性范围 精密称取橙皮苷对照品7.34mg，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，做为储备液。吸取储备液适量，加50%甲醇配制成浓度为73.40μg/ml的溶液。分别精密吸取2μl、4μl、6μl、8μl、10μl该溶液，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定色谱峰面积。以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，得到回归方程：y=959216×-824.19，r=0.9998。测定结果表明：橙皮苷进样量在0.1468μg～0.7340μg范围内线性关系良好。

2.4 精密度试验 分别精密吸取浓度为14.68μg/ml的橙皮苷对照品溶液20μl，连续进样6次，按前述色谱条件进样分析，测定色谱峰面积，RSD为1.75%，表明仪器精密度良好。

2.5 溶液稳定性试验 精密吸取“2.2”项下供试品溶液20μl，分别在0、1、2、4、6、8、10小时进样，测定色谱峰面积，RSD为1.65%，表明供试品溶液在10小时内稳定。

2.6 重复性试验 取同一批健胃消食片(批号：070601)，按“2.2”项下平行制备供试品溶液6份，按上述色谱条件测定样品中橙皮苷的含量。平均含量为0.1905mg/片，RSD为1.05%，符合相关规定。

2.7 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品(070601)细粉6份，每份1g，分别精密加入橙皮苷对照品溶液2.0ml(146.8μg/ml)，按供试品溶液制备方法操作，进样20μl，测定加样回收率，结果见表1。

表1 橙皮苷加样回收率试验结果

表2 三批样品含量测定结果

2.8 样品含量测定 取不同批号样品三批, 按供试品溶液制备方法操作，精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定色谱峰面积，计算各批样品的橙皮苷含量，结果见表2。

3 讨论

试验比较了甲醇-磷酸水，乙腈-磷酸水系统及不同浓度乙腈-磷酸水的分离效果，发现当流动相为乙腈-0.2%磷酸(20：80，v/v)时，分离效果最好，而且保留时间适宜，峰形对称。

由于中药的成分众多复杂，中药复方制剂的HPLC图谱中常常会出现很多色谱峰，因此色谱分离条件必须满足专属性强，重现性好，稳定性高，准确度高等要求。本试验中笔者尝试采用不具有挥发性的磷酸代替冰醋酸，从而改善色谱条件的稳定性和重现性。此举不仅可以更好地控制产品内在质量，还为将来建立该制剂的HPLC指纹图谱积累了经验和数据。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版一部[S].北京:化学工业出版社,2005.567.