高效液相色谱法测定清咽滴丸中没食子酸的含量*

2010-08-06刘丽华孟庆军王金磊

天津药学 2010年3期

刘丽华,杨柳,孟庆军,王金磊

(天津中新药业第六中药厂,天津 300401)

清咽滴丸由人工牛黄、诃子、青黛、甘草、冰片、薄荷脑等中药组成,经临床应用,疗效显著,具有疏风清热,解毒利咽之功效,用于风热喉痹、咽痛、咽干、口渴,或微恶风、发热、咽部红肿、急性咽炎见上述证候者。本品君药诃子是使君子科落叶乔本植物 TerminaliachebulaRetz的成熟果实[1],含有诃子酸、诃黎勒酸、1,3,6-三没食子酰基葡萄糖,还含有多种酚酸性成分,其中以没食子酸为典型[2],现代药理研究表明,诃子中所含没食子酸具有抗 HBsAg作用。为有效的定量控制药品质量,采用高效液相色谱法[3-5]对清咽滴丸中没食子酸的含量进行测定研究,结果满意。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1200高效液相色谱仪,AEG-220G电子天平(日本岛津公司);超声波清洗器(250W)。

1.2 试药没食子酸对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号 110831-200302,供含量测定用);甲醇为色谱纯;水为高纯水;其他所用试剂均为分析纯;清咽滴丸(天津市第六中药厂提供,批号为 627032、628018、628023、080301、080302、080303)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：Luna-C18(250mm×4.6 mm,5μm);流动相：甲醇 -0.1%磷酸水溶液(15∶85);检测波长：270nm;流速：1ml/min;柱温：室温 ;进样量：20μl。在该色谱条件下,样品中没食子酸可达基线分离,其他成分对测定无干扰,理论板数按没食子酸计算大于 3000。结果见图 1。

图 1 阴性对照(A)对照品(B)供试品(C)HPLC色谱图

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液精密称取没食子酸对照品适量,加 50%甲醇配制成浓度为 0.020mg/ml的溶液。

2.2.2 供试品溶液精密称取样品粉末约 200mg置10ml量瓶中,加入 50%甲醇溶液适量,超声溶解,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。

2.2.3 诃子阴性对照溶液取按处方量和工艺制备的缺诃子阴性对照品粉末适量,精密称定,照“2.2.2”项下方法制备,即得。

2.3 线性关系考察精密称取没食子酸对照品 10.1 mg置 10ml量瓶中,加 50%甲醇超声溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取 3ml置 25ml量瓶中,加 50%甲醇超声溶解并稀释至刻度,摇匀。精密吸取上述对照品溶液 1、2、3、5、7和 10ml分别置于 10ml量瓶中,加50%甲醇溶液稀释至刻度 ,配得 1、2、3、4、5、6号溶液。分别精密吸取 1、2、3、4、5、6号溶液各 20 μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,测定其峰面积。并以峰面积(Y)对没食子酸的进样量(X)进行线性回归,得回归方程：Y=2809.7X-7.7047,r=1。没食子酸对照品进样量在 0.2424～2.4240μg范围内,与峰面积具有良好的线性关系,相关性显著。

2.4 精密度试验精密吸取同一份对照品溶液 20 μl,在上述色谱条件下重复进样 6次,记录色谱图,测定其峰面积积分值。结果其 RSD为 0.25%,表明精密度良好。

2.5 重复性试验称取同一样品约 200mg,共 6份,精密称定,照上述“2.2.2”项下方法制得供试品溶液6份,分别精密吸取 20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,测定其峰面积,并计算含量。结果平均含量为0.1033%,RSD为 1.72%,表明具有良好的重复性。

2.6 稳定性试验同一份供试品溶液,精密吸取 20 μl,分别于 0、2、4、8、12和 24h,注入液相色谱仪,记录色谱图,测定其峰面积。结果其 RSD为 0.52%,表明供试品溶液在 24h内测定稳定性良好。

2.7 回收率试验取已知含量的样品粉末约 100 mg,共 6份,精密称定,分别加入一定量的没食子酸对照品,照“2.2.2”项下方法制得供试品溶液后进样测定峰面积,并计算回收率,得平均回收率为 96.96%,RSD为 1.29%,结果见表1。